总大肠菌群检验课件

1、大肠菌群检验周小林副教授 水处理微生物知识点教学内容1.大肠菌群检验原理；2.大肠菌群检验的程序；3.检测各环节操作规范。 大肠菌群检验教学目标（1）知识目标大肠菌群的性状特征；多管发酵法检验原理；检验各环节的特征性表现。（2）技能目标掌握大肠菌群检验的总体程序；掌握乳糖发酵检验的操作技能；掌握伊红美蓝平板检验的操作技能；掌握检验结果报告的方法。（3）素质态度要求态度端正，积极主动学习，严守操作规范，团结协作。 大肠菌群检验一、大肠菌群检验原理与程序大肠菌群是水体粪便污染的指示菌。天然水体的细菌性污染主要源于生活污水中的粪便，其中可能病原菌种类很多，而大肠菌群是数量最大的，可以用作水体粪便污染

2、状况的指示菌。大肠菌群的类别特征：372448h能利用乳糖产酸产气，好氧和兼性厌氧，-，无芽胞。能在伊红美蓝培养基上产生特征性菌落：有核心，带金属光泽，深紫色；深黑色、不带或略带金属光泽；淡紫红色、中心较深。 大肠菌群检验检验程序：乳糖发酵检验伊红美蓝平板分离检验革兰氏染色准备工作：（1）制备培养基乳糖蛋白胨培养液：成分：蛋白胨10g、牛肉膏3g、乳糖5g、氯化钠5g、水1000ml，溴甲酚紫乙醇液（16g/L）1ml。制法：调pH7.27.4后加入溴甲酚紫乙醇液，分装于装有倒管的试管中（每管10ml）。11520min。二倍浓缩乳糖蛋白胨培养液：除水外加倍。 大肠菌群检验伊红美蓝培养基：成分

3、：蛋白胨10g、磷酸氢二钾2g、琼脂20g、水1000ml，乳糖10 g；伊红水溶液（20g/L）20ml、美蓝水溶液（5g/L）13ml。制法：调pH7.2后加入乳糖，11520min。倒平板前加入伊红美蓝。制备无菌生理盐水。（2）培养皿、试管、移液管等玻璃器皿的灭菌； 大肠菌群检验生活饮用水原始水样，接种10ml到双料液中（或加1个10倍无菌生理盐水稀释液，接种1ml到单料液中）。出厂自来水原始水样接种10ml到双料液中，1ml 10倍无菌生理盐水稀释液接种到单料液中。水源水10倍无菌生理盐水递交稀释到103，3浓度各1ml接种到单料液中；污染严重可加大稀释度。每个样品接种均为5重复。二、

4、乳糖发酵检验 大肠菌群检验36培养24h。产酸（变黄色）产气者报告为乳糖检验阳性，进入下一步检测。二、乳糖发酵检验 大肠菌群检验取发酵液接种到伊红美蓝培养基平板（划线分离），36培养24h。具备下列大肠菌群典型菌落特征的为阳性管：有核心，带金属光泽，深紫色；深黑色、不带或略带金属光泽；淡紫红色、中心较深。三、伊红美蓝平板分离检验大肠菌群-或复发酵（乳糖蛋白胨培养液培养）产酸产气。四、革兰氏染色检验 大肠菌群检验经过前面三个环节的检验，得到证实的各稀释度的大肠菌群阳性管数；查阅总大肠菌群MPN检索表，得到MPN/100ml值；再乘以测定3稀释度中的最小稀释倍数，报告数值；如果所有乳糖发酵管均为阴性，则报告未检出。五、MPN检索报告 大肠菌群检验六、任务考核考核内容考核指标分值培养基制作是否规范25乳糖发酵无菌操作、整个过程操作的规范性20平板分离培养划线