病毒遗传分析

1、关于病毒的遗传分析第一张，PPT共三十九页，创作于2022年6月第一节 噬菌体的繁殖和突变型一 噬菌体的繁殖 （一）烈性噬菌体的感染周期 （二）温和性噬菌体的感染周期 1 溶源周期： 原噬菌体: 溶源性细菌: 溶源性细菌的特点: 2 裂解周期： 溶源性细菌自发或经诱发裂解细菌 释放 子噬菌体。第二张，PPT共三十九页，创作于2022年6月第三张，PPT共三十九页，创作于2022年6月第四张，PPT共三十九页，创作于2022年6月二 噬菌体的突变型(一)快速溶菌突变型（r） (二)宿主范围突变型（h） (三) 条件致死突变型 1 温度敏感突变型 2 抑制因子敏感突变（sus） 噬菌体 细菌 正常

2、基因 sus+ su- 突变基因 sus su+ 第五张，PPT共三十九页，创作于2022年6月（1）抑制因子敏感突变的概念：例如：噬菌体mRNA基因 细菌tRNA基因反密码子 正常 突变 突变 正常基因：5TAC 35TAG 3 3ATC 53ATG 5 mRNA 5UAC 3 5UAG 3 3AUC 5 3AUG 5 表型：酪氨酸 终止 5UAG 3酪氨酸酪氨酸3AUC 5 酪氨酸第六张，PPT共三十九页，创作于2022年6月表8-2携带不同专一性抑制基因宿主中sus突变噬菌体的表现（2）噬菌体的抑制因子敏感突变型类型及表现 琥珀型（amber）UAG 赭石型（ocher）UAA 乳白型（

3、opal） UGA 第七张，PPT共三十九页，创作于2022年6月一般而言，上述三种突变型不能在细菌中生存，但某些细菌突变株带有抑制三种突变型的基因，事实上是宿主的 tDNA 基因突变，转录出的tRNA能识别终止密码子并按第三位碱基摆动的原则，插入相应的氨基酸，故噬菌体具有终止密码子突变型能够在此类宿主中，利用宿主的抑制突变特性而正常繁殖。第八张，PPT共三十九页，创作于2022年6月（二）无义突变与无义抑制突变无义突变：指一个为氨基酸编码的密码变为终止密码的突变。 无义抑制突变：指能抑制无义突变表现的突变。第九张，PPT共三十九页，创作于2022年6月 噬菌体突变型快速溶菌突变型：2宿主范围

4、突变型:3 条件致死突变型：第二节 重组测验第十张，PPT共三十九页，创作于2022年6月 1 噬菌体杂交实验 r47r+ X r+r104 B 10-6 10-2 B K()亲组合：r47r+、r+r104， r+r+ 重组合：r+r+、r47r104， 共525 共370 2 重组值的计算 重组值重组噬菌斑数 X 100 总噬菌斑数三 Benzer的重组测验 0.0141在K()上生长的噬菌斑数X2X100 在B上生长的噬菌斑数 370X102 X2 X100 525X106第十一张，PPT共三十九页，创作于2022年6月第十二张，PPT共三十九页，创作于2022年6月第十三张，PPT共三

5、十九页，创作于2022年6月第三节 互补试验 rIIA+B X rIIAB+ 一 互补试验的概念和原理 1 互补试验的概念: rII A+ B rII A B+ EcoliK() EcoliK()rII A+ BrII A B+第十四张，PPT共三十九页，创作于2022年6月 2 互补试验的原理 表型 有无功能互补 结论 反式: A+ B A B+ 反式: A+ B A B+ 3 互补试验方法斑点测试法4 互补试验的意义突变型 属同一顺反子野生型 属不同顺反子第十五张，PPT共三十九页，创作于2022年6月第十六张，PPT共三十九页，创作于2022年6月二 顺反子（基因）2 顺反试验：指将两个

6、拟突变分别处于顺式和反式， 根据其表型确定两个突变是否是同一基因的试验。 3 判断方法: 顺式 反式 分析结论：两突变 + +/- - + -/- + 表现型 野生型 野生型 属于两个顺反子 表现型 野生型 突变型 属于同一顺反子1 顺反子的概念第十七张，PPT共三十九页，创作于2022年6月第十八张，PPT共三十九页，创作于2022年6月三 互补测验及结果 表8-8 X174突变的互补测验结果 顺反子 突 变 型 A am8,am18,am30,am33,am35,am50,am86,tsl28, B am14,am16,och5,ts9,tsl16,och1,och8,och11, C o

7、ch6 D am10,amH81, E am3,am6,am27, F am87,am88,am89, amH57,op6, op9,tsh6,ts41D G am9,am32,ts,ts79 H amN1,am23,am80,am90,ts4第十九张，PPT共三十九页，创作于2022年6月第二十张，PPT共三十九页，创作于2022年6月T4突变型的互补试验第二十一张，PPT共三十九页，创作于2022年6月四 基因内互补1 基因内互补的机理第二十二张，PPT共三十九页，创作于2022年6月2 基因内互补与基因间互补的区别第二十三张，PPT共三十九页，创作于2022年6月第四节 缺失作图一 缺失

8、的特点 1 多bp的缺失； 2 具不可逆性； 3 有部分相同缺失突变型间不能通过重组恢复 野生型表型。二 缺失作图的优点：简便、精确三 缺失作图的条件四 缺失作图的原理 P202原理：凡是能重组的，点突变一定不在缺失区内； 凡是不能重组的，点突变一定在缺失区内。第二十四张，PPT共三十九页，创作于2022年6月五 缺失作图的方法步骤：如图8-15 1 将待测点突变（X）先与几个最大的缺失突变体 分别杂交，从中找出最小不重组和最大可重组 缺失突变； 2 从最小不重组区（PB242）中减去与之重叠的最 大重组区（A105）=点突变的位置（A5区内）。 3 将点突变与A5区内的几个缺失突变体分别杂交

9、 根据结果确定：点突变就在A5区内的c2区内。第二十五张，PPT共三十九页，创作于2022年6月C2第二十六张，PPT共三十九页，创作于2022年6月第五节 噬菌体基因组与原噬菌体一 噬菌体的基因组：由49000bp构成 1 基因分类 头部基因： 7个（必需基因：相邻） 尾部基因： 11个（必需基因：相邻） 噬菌斑形成必需的基因 复制所需基因：O、P 裂解、释放所需基因：S、R基因 正调控基因：N、Q 附着区：att； 专一性重组所必需：int、xis 噬菌斑形成非必需的基因 溶源化所需：CI、CII、CIII 重组所必需：exo、red 第二十七张，PPT共三十九页，创作于2022年6月P1

10、33 图5-6第二十八张，PPT共三十九页，创作于2022年6月 2 噬菌体基因组的结构特点:二 原噬菌体与合子诱导 1 原噬菌体： 2 合子诱导： Hfr()X F-受体菌裂解(进入F-后)b+原点d+ c+a+3 合子诱导与整合部位的确定第二十九张，PPT共三十九页，创作于2022年6月三 原噬菌体的插入与切除1 原噬菌体的插入与正常切除 P206 图 8-17 2 原噬菌体的异常切除 P206 图8-18 （1）转导噬菌体：指带有细菌基因的噬菌体。 （2）d 转导噬菌体的特点：3 温和性噬菌体的互补试验与作图 (1)与众多已知位点的点突变作互补试验，确定缺失区域 (2)用众多已知缺失区域

11、的缺失品系对点突变进行缺失作图第三十张，PPT共三十九页，创作于2022年6月第三十一张，PPT共三十九页，创作于2022年6月整合态第三十二张，PPT共三十九页，创作于2022年6月attPdgal1dgal2 dgal3 dgal4 dgal5ABEGHM第三十三张，PPT共三十九页，创作于2022年6月 位点专一性重组的分子机制一、噬菌体的整合和切除1. -DNA对E.coli的整合： POP + BOB BOPPOB 需要整合酶(Int拓扑异构酶活性)和整合宿主因子(IHF)参与,非可逆反应。2. -DNA从E.coli的切离： BOPPOB POP + BOB 需要整合酶(Int)、

12、整合宿主因子(IHF)和切除酶(Xis)参与,非可逆反应。第三十四张，PPT共三十九页，创作于2022年6月 整合的过程: A. 具有对特异性DNA强烈亲和力的Int与attP和attB位点结合；B. Int的拓扑异构酶活性，使两条双链各自断开一条单链，瞬间旋转然后交换连接，形成Holliday中间体，C. 在另两条单链之间发生同样的断裂重接，从而完成双链间的重组。 返回第三十五张，PPT共三十九页，创作于2022年6月二、位点专一性重组的核苷酸序列1. POP:O为15bp(核心)富含A-T的非对称序列； P为-160 0的160bp序列 P为0 80的80bp序列 共240bp2. BOB:B为-11 0序列 B为0 11序列 共23bp第三十六张，PPT共三十九页，创作于2022年6月第六节 环状排列与末端重复一 线状DNA具有环状遗传图 1噬菌体DNA结构特点：具末端重复（末端冗余） 末端冗余:指DNA分子两端