101夏仙树氯冉酸荷移分光光度法测定氨基己酸注射液的含量

1、1氯冉酸荷移分光光度法测定氨基己酸注射液含量届别2014 届系别化学系专业化学学口号2010121141姓名夏仙树指导教师李省云 （教授)四年五月 氯冉酸荷移分光光度法测定氨基己酸注射液含量学生：夏仙树指导教师：李省云太原师范学院化学系101摘要本文使用紫外分光光度法研究了氨基己酸与氯冉酸的荷移反应,再以此为基础来测定氨基己酸注射液的含量。由实验可知，在无水乙醇介质中，氨基己酸与氯冉酸在60C的水浴中加热25min以后,可生成稳定的荷移络合物。此荷移络合物的最大吸收波长ax=318nm ,表观摩尔吸光系数3_1_1=0.80 相 L mol_ cm_ ,线性范围 25-100 卩 g/mL关键

2、词紫外分光光度法氨基己酸氯冉酸荷移反应1引言荷移反应是指电子相对丰富的分子与电子相对缺乏的分子之间通过电荷转移而形成的络合物的反 应。由于这类荷移配合物具有特征吸收峰，摩尔吸光系数较高，这使分光光度法测定痕量含氮的有机 物成为可能，基于此反应建立了测定有机化合物如氨基酸、芳胺、生物碱等物质的新方法。该方法测定药物含量，简单准确，专属性强，且具有较高的灵敏度2，因此近年来国内外多见报道3_7。氨基己酸，又名6-氨基己酸（ACA），为白色或淡黄色结晶粉末，能溶于水，其3.52%水溶液为等渗溶液，熔点204_207C 8。本品是一种临床常用的止血药，能抑制纤维蛋白溶酶原的激活酶，使纤维蛋 白酶原不能

3、被激活为纤维蛋白溶酶，从而抑制纤维蛋白的溶解，达到止血的作用9。目前定量测定氨基己酸的方法主要有：柱前衍生高效液相色谱法10、分子荧光光谱法11、柱后衍生高效阳离子交换色谱法12_14等。利用与醌类试剂发生荷移反应测定氨基酸含量的研究较多，如苏氨酸、苯丙氨酸、L酪氨 酸、色氨酸等15_17方法相对成熟，而氨基己酸与醌类试剂发生荷移反应的研究还未见报道。 故本文选用 氯冉酸为电子接受体，研究了氨基己酸与氯冉酸形成荷移络合物的最佳条件。2 实验部分2.1主要仪器与试剂仪器 CARY300紫外可见分光光度计（美国Varian） ; HH_6电热恒温水浴锅（北京科伟永鑫实验仪器设备厂）；92M_202

4、A_DR电子天平（普利赛斯国际贸易上海 有限公司）；试剂 氨基己酸（国药集团化学试剂有限公司，生化试剂BR）;氯冉酸（恒兴中远化工，化学纯）无水乙醇（天津市富宇精细化工有限公司，分析纯）；氨基己酸注射液（上海信谊金朱药业有限公司，产品批号110505，标示量10mL : 2g）。实验用水为高纯水。2.2溶液的配制方法氨基己酸标准溶液的配制：准确称取 的容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀, 氯冉酸溶液的配制：准确称取氯冉酸 用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，配成0.10026g氨基己酸，用少量的无水乙醇溶解，转移到 100mL 配成约 1.0026g/L的溶液，避光保存，待用。0.10034g,用少

5、量无水乙醇溶解，转移到100mL的容量瓶中，1.0034g/L的溶液，待用。2.3实验方法首先准确移取0.25ml氨基己酸试液，再准确移取0.25ml氯冉酸标准溶液于 10mL比色管中，用无318 nm水乙醇稀释至刻度，摇匀，在60 C的水浴中加热 25min，冷却至室温后，以试剂空白为参比，在最大吸收峰处，测定其吸光度。测定总的在测定后计算得知的氨基己酸样品溶液中，加入一定量的氨基己酸的标准溶液，反应后，吸光度，用工作曲线计算回收率的氨基己酸标准溶液的量除以加入的量，即得回收率。3结果与讨论0.25mL3.1精密度的测定序号12345678910A0.41580.40140.41320.41

6、010.41120.38020.40820.42920.40120.36623.2工作曲线的绘制在选定的实验条件下，准确移取不同量的氨基己酸标准溶液（0.25 1.0 mL),在最佳条件下反应，测定络合物的吸光度，并绘制工作曲线,其结果见表2、图1。结果表明：氨基己酸含量在45100呃/mL时符合比尔定律。线性回归方程为A=0.00826c-0.0256 (单位：j g/mL),相关系数R =0.9983，表观摩尔吸光系数 =0B00X103l mol-1 cm-1。表2工作曲线的测定氨基己酸标准液（mL）浓度 c ( (jg/mL)Abs0.25250.16680.30300.22790.3

7、5350.28010.40400.30400.45450.3339在选定的最佳条件下，即:首先准确移取氨基己酸标准溶液0.25mL ,再移取氯冉酸标准溶液于10mL比色管中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，在60 C下水浴加热25min并冷却至室温后，以试剂空白为参比，在 300nm-500nm范围内进行波长扫描，测其吸光度，按照实验方法平行测定10次，结果见表1。结果表明，该方法的相对标准偏差为4.50%。表1精密度的测定0.50500.38020.60600.48400.70700.56560.80800.61540.90900.71951.001000.80090.90.7IB0.12030

8、405060708090100110ug/ml图1工作曲线3.3络合比测定3和图2）,表明氨基己酸与氯冉酸所形成的荷用等摩尔连续变化法测定络合物的组成（结果见表 移络合组成比为 2:1。等摩尔连续变化法：配制浓度4.00 10-3mol/L的氨基己酸溶液（M ）:准确称取 0.13117g氨基己酸试剂，用无水乙醇溶解并定容至250mL的容量瓶中，保存备用。配制浓度4.00 XI0-3mol/L的氯冉酸溶液（N）:准确称取 0.20898g氯冉酸试剂，用无水乙醇溶 解并定容至 250mL的容量瓶中，保存备用。准确移取系列 M和N溶液，改变 M溶液和N溶液的体积比，使总的物质的量不变。按照实验方

9、法测定溶液的吸光度，结果见表3。以氨基己酸的物质的量分数为横坐标，吸光度为纵坐标，作图（见=2:1。图2）,可确定络合物的组成为氨基己酸：氯冉酸表3络合物组成的测定M (mL)N (mL)0.200.400.600.801.001.201.401.601.80M/0.10.20.30.40.50.60.70.80.91.801.601.401.201.000.800.600.400.20(M+N)吸光度0.2240.3710.4890.7390.9111 . 2831.0120.8210.539图23.4样品测定3.4.1氨基己酸试液(1g/L)的制备用1mL的吸量管准确吸取 0.50mL氨基

10、己酸注射液，转移至棕色的100mL容量瓶，再用无水乙醇定容至刻度，摇匀，备用。3.4.2氨基己酸试液吸光度的测量首先准确移取0.25ml氨基己酸试液，再准确移取 0.25ml氯冉酸标准溶液于 10mL比色管中，用无 水乙醇稀释至刻度，摇匀，平行配置5份，在60C的水浴中加热 25min，冷却至室温后，以试剂空白为参比，在318nm最大吸收峰处，测定其吸光度，结果见表4。结果表明，相对标准偏差为0.16%，氨基己酸样品的含量为0.962ug/mL。表4氨基己酸试液吸光度的测量序号0.7440.8030.7320.7570.80923.5回收实验在测定后计算得知的氨基己酸样品溶液中，加入0.30m

11、L(1-5)、0.50mL(6-10)、0.80mL(11-15)的氨基己酸标准溶液，在最佳条件下反应之后，测定总的吸光度，用工作曲线计算回收率的标准溶液的量除以加入的量，即得回收率，结果见表5,回收率的平均值为 99.09%，相对标准偏差为 2.15%。表5测定结果加入样品量(mL)标准加入 量(mL)吸光度平均值回收率(%)0.250.301.0181.0121.0181.0160.9931.01197.660.250.501.1781.1801.1691.1701.1711.17498.06 0.250.801.4291.4181.4561.4581.4391.440101.54 3.6

12、文献法测定 3.6.1氢氧化钠滴定液的配制准确称取氢氧化钠1.04587g于250mL烧杯中，加入少量新沸过的冷水溶解，在室温下转入250mL容量瓶中，用新沸过的冷水稀释到刻度，摇匀。3.6.2氢氧化钠滴定液的标定准确称取取在105C干燥至恒重的基准物质邻苯二甲酸氢钾(Mr=204.22g/mol)2.04730g至50ml小烧杯中，加适量新沸过的冷水使之溶解，在室温下转入100mL容量瓶中，用新沸过的冷水稀释到刻度，摇匀。用移液管准确移取20ml邻苯二甲酸氢钾标准溶液至锥形瓶中，滴两滴酚酞，用氢氧化钠滴定液滴 定至溶液变色为止。重复测定4次。记录消耗的氢氧化钠滴定液的体积，并计算氢氧化钠滴定

13、液的浓度。测定结果见表6。表6测定结果测定次数1234V始/g0.100.400.300.40V 终/ml21.9522.2522.2022.30V/ml21.8521.8521.9021.90VNaoH/ml121.87-1CNaOH/mol 0.091683.6.3药典法测氨基己酸注射液的含量准确移取氨基己酸注射液(上海信谊金朱药业有限公司，产品批号110505，标示量10mL : 2g)1ml于锥形瓶中，再加入甲醛溶液5ml，乙醇溶液20ml，酚酞指示剂两滴，摇匀，用氢氧化钠滴定液滴定。另取新沸过的冷水15ml，加甲醛溶液 5ml,乙醇溶液20ml，酚酞溶液两滴至另-一锥形瓶中作空白试验

14、校正即得。每1ml的0.1mol/L氢氧化钠溶液相当13.12mg氨基己酸。重复测定5次。测定结果见7。表7测定结果测定次数12345V空白/g0.10.250.350.30.15V滴定/ml16.3016.4016.5016.6016.35V/ml16.2016.1516.1516.3016.20V NaOH/ml16.20mC6H13NO2/g0.1948w/ %97.403.7统计处理用t检验法检验本法与药典法测定结果之间是否存在显著性差异，经计算，本法与药典法测定结果之间无显著性差异，即本方法不存在系统误差。结果见表8。具体计算过程如下：毕%业2%I. 31/2=1.36I X - T

15、 ISx1经查tp ,f值表，选置信度为 95%的值，f (n-1) =f(3-1)=f (2),此时理论值为4.30 1.36，说明本法与药 典法测定结果之间不存在显著性差异，即本方法不存在系统误差。表8t=2.15%本法药典法t99.09%97.40%1.36参考文献12Mullike n RS. Structures of compi exes formed by haloge n molecules With aromatic and with oxyge nated solve ntsJ. J Am Chem Soc,1950,72:600.赵彦美，荷移光度法在药物分析中的应用J.咸

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20、 n Normal Un iversityClass 092C for 25 minutes. The apparentm at 318nm. The calibration curve was linear inAbstract The charge-tra nsfer reacti on betwee n amincap roic acid and chlora nilic acid in alcohol solutio n was studied sp ectro photometrically., and the n to determ ine the content of Aminocap roic Acid Inject ion. Exp erime nts in dicated that the charge-tra nsfer react ion was carried out at 603-1-1molar absoptivity was determined to be 0.5510 L mol二二 the concentrat