MS培养基的作用

1、MS培养基的作用植物组织培养中常用的一种培养基是MS培养基。MS培养基的配制步骤这样每次使用时，取其总量的1/20（50 mL）或1/200（5 mL）,加水稀释，制成培养液。现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出，供配制时使 用。大量元素（母液I ） mg/LNH4NO3 33 000KNO338 000CaCl2 - 2H2O 8 800MgSO4 7H2O 7 400KH2PO4 3 400微量元素（母液H ）KI 166H3BO3 1 240MnSO4 4H2O 4 460ZnSO4 7H2O 1 720Na2MoO 4 2H2O 50CuSO4 5H2O 5CoCl2 - 6H2O

2、 5铁盐（母液田）FeSO4 7H2O 5 560Na2-EDTA 2H2O 7 460有机成分（母液IV） IVA肌西I 20 000IVB烟酸100盐酸叱,哆醇（维生素B6） 100盐酸硫胺素（维生素B1） 20甘氨酸400以上各种营养成分的用量，除了母液I为 20倍浓缩液外，其余的均为 200倍浓缩液。上述几种母液都要单独配成1 L的贮备液。其中，母液I、母液R及母液IV的配制方法是：每种母液中的几种成分称量完毕后，分别用少量的蒸储水彻底溶解，然后再将它们混溶，最后定容到1L。母液田的配制方法是 ：将称好的 FeSO4 7H2O和Na2-EDTA 2H2O分另 放到450 mL蒸储水中，

3、边加热边不断搅拌使它们溶解，然后将两种溶液混合，并将pH调至5?5,最后定容到1 L ,保存在棕色玻璃瓶中。各种母液 配完后，分别用玻璃瓶贮存，并且贴上标签，注明母液号、配制倍数、日 期等，保存在冰箱的冷藏室中。MS培养基中还需要加入：2, 4-二氯苯氧乙酸（2, 4-D）、-乙酸（NAA）、6-甲基喋吟（6-BA）等植物生长调节物质，并且分别配成母液（0?1 mg/mL）。其配制方法是：分别称取这3种物质各10 mg将2,4-D和NAA用少量（1 mL） 无水乙醇预溶，将 6-BA用少量（1 mL）的物质的量浓度为 0.1 mol/L的NaOH 溶液溶解，溶解过程需要水浴加热，最后分别定容至

4、100 mL,即得质量浓度为0.1 mg/mL的母液。配制培养液 用量筒或移液管从各种母液中分别取出所需的用量：母液I 为 50 mL,母液 H、田、IVA 和IVB 各 5 mL 再取 2, 4-D 5 mL NAA1 mL, 与各种母液一起放入烧杯中。MS培养基配制培养液时的注意事项配制培养液时应注意：在使用提前配制的母液时，应在量取各种母液之前，轻轻摇动盛放 母液的瓶子，如果发现瓶中有沉淀、悬浮物或被微生物污染，应立即淘汰 这种母液，重新进行配制；用量筒或移液管量取培养基母液之前，必须用所量取的母液将量筒 或移液管润洗2次；量取母液时，最好将各种母液按将要量取的顺序写在纸上，量取1种，划

5、掉1种，以免出错。溶化琼脂用粗天平分别称取琼脂9 g、蔗糖30g,放入1 000 mL的搪瓷量杯中，再加入 蒸储水750 mL,用电炉加热，边 加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半透明状。然后再将配好的混合培养液 加入到煮沸的琼脂中，最后加蒸储水定容至1 000 mL ,搅拌均匀。需要注意的是，在加热琼脂，制备培养基的过程中，操作者千万不能离开，否则沸腾的琼脂外溢，就需要重新称量、制备。止匕外，如果没有搪瓷量杯，可用大烧杯代替。但要注意大烧杯底的外表面不能沾水，否则加热时烧杯容易炸裂，使溶液外溢，造成烫伤。调pH用滴管吸取物质的量浓 度为1 mol/L的NaOH容液，逐滴滴入溶化的培养基中，边滴边

6、搅拌，并随 时用精密的pH试纸（5.47.0）测培养基的pH, 一直到培养基的 pH为5.8 为止（培养基的pH必须严格控制在 5.8）。培养基的分装 溶化的培养基应该 趁热分装。分装时，先将培养基倒入烧杯中，然后将烧杯中的培养基倒入 锥形瓶（50 mL或100 mL）中。注意不要让培养基沾到瓶口和瓶壁上。锥形瓶中培养基的量约为锥形瓶容量的1/51/4。每1 000 mL培养基，可分装2530瓶。培养基分装完毕后，应及时封盖瓶口。用2块硫酸纸（每块大小约为9 cmX9 cm）中间夹1层薄牛皮纸封盖瓶口，并用线绳捆扎。最后在锥 形瓶外壁贴上标签。高压灭菌培养基的高压灭菌 步骤高压灭菌培养基的高压

7、灭菌包括以下几个步骤。第一，码放锥形瓶。将装有培养基的锥形瓶直立于金属小筐中，再放 入高压蒸气灭菌锅内。如果没有金属小筐，可以在两层锥形瓶之间放一块 玻璃板隔开。第二，放置其他需要灭菌的物品。将其他需要灭菌的物品也放入高压 蒸气灭菌锅内，如装有蒸储水的锥形瓶、带螺口盖的玻璃瓶、烧杯、广口 瓶（以上物品都要用牛皮纸封口），用牛皮纸包裹的培养皿、剪刀、解剖刀、银子、滤纸、铅笔等。第三，灭菌。待需要灭菌的物品码放完毕，盖上锅盖。在98 kPa、121.3 C下，灭菌20 min。灭菌后取出锥形瓶，让其中的培养基自然冷却凝固。最 好放置1 d后再使用。囹开放分类：植物组织培养中常用的一种培养基是MS培

8、养基。MS培养基的配制包括以下步骤。培养基母液的配制和保存培养基母液的配制和保存培养基母液的配制和保存培养基母液的配制 和保存MS培养基含有近30种营养成分，为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进 行称量，可将培养基中的各种成分，按原量的20倍或200倍分别称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做培养基母液。这样每次使用时，取其总量的 1/20（50 mL）或1/200（5 mL）,加水稀释，制成培养液。现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出，供配制时使用。大量元 TOC o 1-5 h z 素大量元素大量元素大量元素（母液母液母液母液I I I I ）mg/LNH4NO333 000KNO33

9、8 000CaCl2 - 2H2O8 800MgSO4 - 7H2O7 400KH2PO43 400微量元素微量元素微量元素微量元素（母液母液母液母液n n n n ）KI166H3BO31 240MnSO4 - 4H2O4 460ZnSO4 - 7H2O1 720Na2MoO4 - 2H2O50CuSO4 - 5H2O5CoCl2 - 6H2O5铁盐铁盐铁盐铁盐（母液母液母液母液nunmni）FeSO4 - 7H2O5 560Na2-EDTA - 2H2O7 460有机成分有机成分有机成分有机成分(母液母液母液母液IVIVIVIV)WA肌醇20 000WB烟酸100盐酸吡哆醇(维生素B6)1

10、00盐酸硫胺素(维生素B1)100甘氨酸400以上各种营养成分的用量，除了母液I为 20倍浓缩液外，其余的均为200倍浓缩液。上述几种母液都要单独配成1 L的贮备液。其中，母液I、母液H及母液IV的配制方法是：每种母液中的几种成分称量完毕后， 分别用少量的蒸馏水彻底溶解， 然后再将它们混溶， 最 后定容到1 L。 母液出的配制方法是：将称好的FeSO4 - 7H2O和Na2-EDTA 2H2O分另1J放到 450 mL 蒸馏水中，边加热边不断搅拌使它们溶解，然后将两种溶液混合，并将pH 调至 5.5，最后定容到1 L ，保存在棕色玻璃瓶中。 各种母液配完后，分别用玻璃瓶贮存，并且贴上标签，注明

11、母液号、配制倍数、日期等，保存在冰箱的冷藏室中。MS 培养基中还需要加入 2， 4-二氯苯氧乙酸(2 ， 4-D) 、 萘乙酸 (NAA) 、 6 苄基嘌呤 (6BA)等植物生长调节物质，并且分别配成母液(0.1 mg/mL) 。其配制方法是：分别称取这3 种物质各 10 mg， 将 2， 4-D 和 NAA 用少量 (1 mL) 无水乙醇预溶， 将 6BA 用少量 (1 mL) 的物质的 量浓度为 0.1 mol/L 的 NaOH 溶液溶解，溶解过程需要水浴加热，最后分别定容至100 mL ，即得质量浓度为 0.1 mg/mL 的母液。 配制培养液配制培养液配制培养液配制培养液用量筒或移液管

12、从各种母液中分别取出所需的用量：母液I为 50 mL,母液H、出、A A和IVB各 5 mLo再取2, 4-D 5 mL、NAA 1 mL ,与各种母液一起放入烧杯中。配制培养液时应注意：在使用提前配制的母液时，应在量取各种母液之前，轻轻摇 动盛放母液的瓶子，如果发现瓶中有沉淀、悬浮物或被微生物污染，应立即淘汰这种母液， 重新进行配制； 用量筒或移液管量取培养基母液之前， 必须用所量取的母液将量筒或移液 管润洗2次；量取母液时，最好将各种母液按将要量取的顺序写在纸上，量取1种，划掉1种，以免出错。溶化琼脂溶化琼脂溶化琼脂溶化琼脂用粗天平分别称取琼脂9 g、蒸糖30 g,放入1 000 mL的搪

13、瓷量杯中，再加入蒸储水750 mL ,用电炉加热，边加热边用玻璃棒搅拌， 直到液体呈半透明状。 然后再将配好的混合培养液加入到煮沸的琼脂中， 最后加蒸 馏水定容至1 000 mL ，搅拌均匀。 需要注意的是，在加热琼脂、制备培养基的过程中，操作者千万不能离开，否则沸腾的琼脂外溢，就需要重新称量、制备。此外，如果没有搪瓷量 杯，可用大烧杯代替。但要注意大烧杯底的外表面不能沾水， 否则加热时烧杯容易炸裂，使 溶液外溢，造成烫伤。调 pH 用滴管吸取物质的量浓度为 1 mol/L 的 NaOH 溶液，逐滴滴入溶化的培养基中，边滴边搅拌，并随时用精密的pH试纸(5 47 0)测培养基的pH, 一直到培

14、养基的pH为 5 8 为止 (培养基的pH 必须严格控制在5 8)。 培养基的分装培养基的分装培养基的分装培养基的分装 溶化的培养基应该趁热分装。分装时，先将培养基倒入烧杯中，然后将烧杯中的培养基倒入锥形瓶(50 mL 或 100 mL) 中。 注意不要让培养基沾到瓶口和瓶壁上。 锥形瓶中培养基的量约为锥形瓶容量的1/51/4。每1 000 mL培养基，可分装 2530瓶。培养基分装完毕后，应及时封盖瓶口。用2块硫酸纸(每块大小约为9 cm X 9 cm)中间夹 1 层薄牛皮纸封盖瓶口，并用线绳捆扎。最后在锥形瓶外壁贴上标签。 高压灭菌高压灭 菌高压灭菌高压灭菌 培养基的高压灭菌包括以下几个步

15、骤。 第一， 码放锥形瓶。 将装有培 养基的锥形瓶直立于金属小筐中， 再放入高压蒸气灭菌锅内。 如果没有金属小筐， 可以在两 层锥形瓶之间放一块玻璃板隔开。 第二，放置其他需要灭菌的物品。将其他需要灭菌的物品也放入高压蒸气灭菌锅内，如装有蒸储水的锥形瓶、带螺口盖的玻璃瓶、烧杯、广口瓶（以 上物品都要用牛皮纸封口 ），用牛皮纸包裹的培养皿、剪刀、解剖刀、镣子、滤纸、铅笔等。第三，灭菌。待需要灭菌的物品码放完毕，盖上锅盖。在98 kPa、121.3 C下，灭菌20 min。灭菌后取出锥形瓶，让其中的培养基自然冷却凝固。最好放置 1d后再使用一付液配制与保存配制培养基时如果每次配制都变按彳;杨成分表

16、依次称量既费时 又增加r名次称常误差：h r提高tu二方养基的.作效率 一般将常用的某本培养 基配制成10200倍 甚至1000倍的浓缩贮备液即时液口母液贮存丁冰箱中 使用时将它们按一定的比例言行稀释混介 可多次使用 并在配制较多数量的培养基时 海低工 作展度也娓高试验的精度二基本培养基的母液有四种人量元素液缩20倍 微量元素浓缩100倍 铁盐 浓缩200倍除蔗糖之外的有机物质 浓缩100倍1大量元素 配制大量元素母液时要分别称量分别溶解 至定容忖按.表1中的序号依次加入容量瓶中以I防也则I，淀、.闺人加片剂加中贴好标然可依好记出广叶：际保存或成入诋知内保存。表1大量元素母液配1L20倍的母液

17、序号 成分 配方用 量/ mg.L-1称取量 /mg 配 1mL 培养基吸取量 /mL 1 NH4NO3 1650 3300050 2 KNO3 1900 38000 3KH2PO4 170 3400 4 MgSO4.7H2O 370 7400 5 无水 CaCl2 440 66442 微量元素母液 在配制微量元素母液时也，应分刈诟I :和外驯溶科 定一涔寸不分先后次次丁忆点!n人潘UM中定容 表2股下公出现下淀工象、.倒入磨口试剂M中 M好杯答刈做好家；可常温保存或放入冰箱内保有存。表2微量元素母液（配制1L100倍母液）成分 配方用量/（mg.L-1） 称取量/mg 配制 1L 培养基吸取量/mL KI 083 8310MnSO4.H2O 223 1690 H3BO3 62 620 ZnSO4