a-羟丁酸脱氢酶a-HBDH操作规程SOP

1、a-羟丁酸脱氢酶（a-HBDH）操作规程（SOP一、用途本产品用于体外定量测定血清、血浆样品中a -羟丁酸 脱氢酶（a HBDH的活性。二、临床意义（一）概述a羟丁酸脱氢酶（a HBDH,酶编号为EC1.1.2.30 o 主要来源于心肌、肾和红细胞。具活性表示LDH中能利用a羟丁酸为反应基质的酶活性，主要为LDH和LDH的活性。（二）临床意义血清a-羟丁酸测定主要用于酮症酸中毒的鉴别诊断 及跟踪监护。同时还可用于心肌梗死、肝脏实质细胞病变、 活动性风湿性心肌炎、急性病毒性心肌炎、溶血性贫血等疾 病的辅助诊断。三、检验原理a -酮丁酸 + NADH H+ HBDH a -羟丁酸 + NADNAD

2、H的氧化速率与样品中民HBDH活性成正比，在340nm波长处，通过连续监测吸光度的下降速率（ A/min）,即可计算由样品中a HBDH勺活性。 四、样品血液样品原则上采集晨起空腹血（禁食 12小时）；患者 处于平静、休息状态，减少患者由于运动、 饮食带来的影响；静脉采血时患者应取坐位或卧位；止血带使用后1分钟内采血，回血后立即松开；正确使用抗凝剂；防止溶血；防止过 失性采样。样品运送过程中应防止过度振荡、防止样品容器的破 损、防止样品被污染、防止样品及唯一性标志的丢失和混淆， 防止样品对环境的污染、水分蒸发。a HBDHM定样品为不溶血的血清、 血浆（肝素或EDTA 抗凝）。样品应在低温条件

3、下运输保存，样品中a HBDH在 28c保存可稳定7天。五、试剂（一）试剂组成R:试剂1还原型辅酶I （ NADH0.33mmol/LR:试剂2a -酮酸16.5 mmol/L不同批号试剂中各组份不能互换。（二）试剂准备Ri和R试剂为即用型液体试剂，开瓶装载即可使用，用 后应及时冷藏保存。（三）试剂的保存及稳定性1.不能冰冻试剂。2,未开瓶的Ri和R试剂应在28 c密闭避光贮存，稳 定期为瓶签标示的有效期。开瓶后的试剂应在 28 c保存， 稳定期为30天。（四）试剂性能可接受的指标空白吸光度：试剂空白在主波长340nm副波长 405nm处，10mm径下，吸光度值n 1.000。（五）试剂使用中

4、的注意事项.严格按照试剂说明书的要求使用试剂。.试剂28c密闭避光贮存可稳定至瓶签标示的有效 期。对超过有效期的试剂不能使用。.严禁放置0C以下保存。.试剂开瓶后，如果长期放置，会吸收空气中的二氧 化碳，导致pH值下降，造成测定值不准确，因此请尽快使 用。.当试剂变混浊或被污染或空白吸光度值V1.000时，表明试剂已失效，应弃去。.装载试剂时防止产生气泡，否则结果无法保证。.不同批号的试剂之间尽管批间差很小，但仍然不能 混用，否则试剂的稳定性将无法保证。（六）预防危险发生的注意事项使用时避免与人体接触，当试剂误入口中或眼中，或者 附着到皮肤上的时候，请立即用大量清水冲洗，如有必要，请接受医生的

5、治疗。（七）处理废弃物时的注意事项试剂反应后所产生的废液及使用后的包装材料应集中 收集后按照相关法规进行废物处理。六、操作步骤.基本参数方法：速率法样品/试剂：1/50主波长：340nm 反应温度：37 C副波长：405nm 反应时间：10min.操作（1）二步法加入物空白（B）校准（C）测定（U） TOC o 1-5 h z 样品（以l ）-6校准品（以l ）-6-蒸储水/生理盐水6-（以l ）试剂 R （以 l ）240240240混匀，37c恒温5分钟。试剂 R （以 l ）606060混匀，37c恒温1分钟，340nm波长处以空白管调 零测定初始吸光度，然后准确测定平均每分钟吸光度变

6、化率 A/min 。（2） 一步法工作液配制：根据测定所需试剂量， 取Ri和R按4:1比加入物空白（B）校准（C）测定（U） TOC o 1-5 h z 样品（以l ）-20校准品（以l ）-20-蒸储水/生理盐水（以20-l ）工作液（以 l ）100010001000混匀，37c恒温1分钟，340nm波长处以空白管调零 测定初始吸光度，然后准确测定平均每分钟吸光度变化 率4 A/min。.操作流程图空白调零 时间： 温度:37 卜延迟中 测定嬷主波长:340nm副波长:405nm5分钟 1分钟1-2分钟R1:240 ii lR2:60样品:6 g l g l.计算样品HBD丽性（U/L）

7、x F=A/min理论F值：F=-8199注：由于理论F值是在理想条件下计算由的，每个实验 室使用仪器和测定条件都不一样，故如果用理论F值计算,可能存在偏差，应使用校准品进行校准。七、参考值范围72-182 U/L八、注意事项（一）本试剂尽管具有较好的抗交叉污染能力，但仍应根据 仪器性能及实验室条件做好防止交叉污染的工作。（二）试剂与样品用量可根据不同仪器的需要，在试剂样品 体积比例不变的条件下，适当增加或减少试剂与样品的用 量。（三）采用必要的预防措施使用试剂，试剂使用后应立即盖 紧瓶盖，避免污染。（四）准确的结果取决于准确校正的仪器、温度及时间的控 制。（五）红细胞内 HBDH含量比血清或血浆高数倍，样品应尽 量避免溶血。（六）药物、抗凝剂、促凝剂、分离胶等其他物质都可能对 测定值造成无法预知的干扰。当怀疑标本存在这些干扰物质 的影响时，请停