乙肝表面抗原及乙肝两对半检测课件

1、乙肝表面抗原及乙肝两对半检测(ppt)（优选）乙肝表面抗原及乙肝两对半检测检测的方法及原理检测方法及原理胶体金免疫层析法Part 1 胶体金免疫层析法 将特异性的抗原或抗体以条带状固定在膜上，胶体金标记试剂（抗体或单克隆抗体）吸附在结合垫上，当待检样本加到试纸条一端的样本垫上后，通过毛细作用向前移动，溶解结合垫上的胶体金标记试剂后相互反应，再移动至固定的抗原或抗体的区域时待检物与金标试剂的结合物又与之发生特异性结合而被截留，聚集在检测带上，可通过肉眼观察到显色结果。检测方法及原理胶体金免疫层析法Part 2酶免疫技术 以酶标记的抗体（或抗原）作为主要试剂，将抗原抗体的特异性和酶高效催化反应的专

2、一性相结合的一种免疫检测技术。酶结合物既保留抗体（或抗原）的免疫学活性，又保留酶对底物的催化活性。特点：灵敏度高、特异性强、准确性好、试剂稳定、方法简便易行检测方法及原理Part 2两对半ELISA检测原理 ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。在实际应用中，通过不同的设计，具体的方法步骤可有多种。即:用于检测抗体的间接法、用于检测抗原的双抗体夹心法以及用于检测小分

3、子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。比较常用的是ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法。检测方法及原理Part 2两对半ELISA检测原理 1 HBsAg：双抗体夹心法 正比 单克隆HBsAbHBsAg多克隆HBsAbHRP 2 HBsAb：双抗原夹心法 正比 HBsAgHBsAbHBsAgHRP 检测原理Part 2两对半ELISA检测原理 3 HBeAg：双抗体夹心法 正比 单克隆HBeAbHBeAg多克隆HBeAbHRP 4 HBeAb：竞争抑制法 反比 多克隆HBeAbHBeAgHBeAbHRP / HBeAb（标本） 5 HBcAb：竞争抑制法 反比 HBcAgHBcAbHRP / H

4、BcAb（标本）检测方法及原理Part 3免疫定量分析方法 近年来，随着抗病毒药物的不断问世，以及抗病毒药物疗效与乙肝病毒及其血清标志物水平之间关系的相关研究不断深入，单纯HBsAg定性检测在疗效的监测，特别是根据其早期变化对远期疗效进行预测方面，显得越来越难以满足要求。而且，很多学者对一些新药上市注册临床试验结果进行分析发现，HBsAg的定量检测在抗病毒治疗疗效的监测方面确有非常重要的意义。因此，HBsAg的定量检测就显得十分重要。检测方法及原理Part 3免疫定量分析方法 要想完成HBsAg定量检测，必须满足以下条件： 采用自动分析系统， 有可溯源的标准品， 测定结果与标准品之间有线性关系

5、。检测方法及原理Part 3免疫定量分析方法 化学发光技术是近二十年来发展非常迅速的非放射性免疫分析技术。 化学发光免疫测定（Chemiluminesent Immunoassay，CLIA）是免疫测定技术继酶免技术（EIA）、放免技术（RIA）、荧光免疫技术（FIA）之后发展的一项新兴测定技术。由于这种测定具备很高的特异性和很小的干扰，因此，如同RIA、FIA等一样利用免疫反应的特异性和化学发光本身的信号特异性形成了目前所说的化学发光免疫测定（CLIA）技术。检测方法及原理Part 3免疫定量分析方法 原理： 化学发光免疫分析仪是通过检测患者血清从而对人体进行免疫分析的医学检验仪器。将定量的

6、患者血清和辣根过氧化物（HRP）加入到固相包被有抗体的白色不透明微孔板中，血清中的待测分子与辣根过氧化物酶的结合物和固相载体上的抗体特异性结合。分离洗涤未反应的游离成分。然后，加入鲁米诺Luminol发光底液 ，利用化学反应释放的自由能激发中间体，从基态回到激发态，能量以光子的形式释放。此时，将微孔板置入分析仪内，通过仪器内部的三维传动系统，依次由光子计数器读出各孔的光子数。样品中的待测分子浓度根据标准品建立的数学模型进行定量分析。最后，打印数据报告，以辅助临床诊断。方法步骤 实验步骤 备注：因各厂家生产试剂操作方法不同，故参见试剂盒说明书结果判断及临床意义一、结果判断结果判断Part 1胶体

7、金免疫层析法结果判断 以艾康生物检测试剂盒为例：阳性（+）：两条红色条带出现，一条位于测试区（T）内，另一条位于质控区（C）。阳性结果表明：标本中含有待测物质。阴性（-）：仅质控区（C）出现一条红色条带，在测试区（T）内无红色条带出现。阴性结果表明：标本中检测不出待测物质。无效：质控区（C）未出现红色条带，表明不正确的操作过程或试纸条已变质损坏。在任何情况下，应重新测试。如果问题仍然存在，应立即停止使用此批号产品，并与当地供应商联系。注意：测试区（T）内的红色条带可显现出颜色深浅的现象。但是，在规定的观察时间内，不论该色带颜色深浅，即使只有非常弱的色带也应判为阳性结果。结果判断Part 1胶体

8、金免疫层析法结果判断阳性（+）：仅质控区（C）出现一条红色条带，在测试区（T）内无红色条带出现。阳性结果表明：标本中含有待测抗体。弱阳性（+）：质控区（C）出现一条红色条带，在测试区（T）内有非常弱的红色条带出现。弱阳性结果表明：标本中含有少量待测抗体。阴性 （-）：两条红色条带出现，一条位于测试区（T）内，另一条位于质控区（C）。阴性结果表明：标本中检测不出待测抗体。无效：质控区（C）未出现红色条带，表明不正确的操作过程或试纸条已变质损坏。在任何情况下，应重新测试。如果问题仍然存在，应立即停止使用此批号产品，并与当地供应商联系。结果判断Part 2酶免疫技术 以上海科华试剂盒为例：1 HBs

9、Ag： COV=阴性对照平均OD值+0.1 样本OD值/COV值1.0为阳性 样本OD值/COV值1.0为阴性2 HBsAb、HBeAg： COV=阴性对照平均OD值2.1（OD0.05按0.05计算） 当样本OD值COV值为阳性 当样本OD值COV值为阴性结果判断Part 2酶免疫技术 3 HBeAb：COV（阴性对照平均OD值阳性对照平均OD值）0.5 标本OD值COV为阴性，COV为阳性4 HBcAb：原倍血清COV阴性对照平均OD值0.3 1:30稀释血清COV阴性对照平均OD值0.5 标本OD值COV为阴性，COV为阳性二、临床意义临床意义 临床意义 临床意义 HBsAg的定量检测是

10、目前监测和预测抗乙肝病毒治疗后应答的新工具，结合HBV DNA及乙肝病毒e抗原（HBeAg）的阴转和血清转换，我们能更准确地预测患者的近期和远期抗病毒治疗的疗效。因此，该检测已在临床上得以广泛开展，特别是被用于判定抗病毒治疗疗效，以及根据早期下降的速度和幅度来预测远期疗效及决定疗程上。临床意义 聚乙二醇干扰素（Peg IFN） -2a治疗乙肝患者的研究结果显示，治疗12周时HBsAg定量20000 IU/ml（约占治疗人群的16%）,则治疗结束停药1年时的HBeAg血清转换率仅为19%（8/43例）。 临床意义 此外，研究还发现，患者治疗后HBsAg下降速度和幅度还与其长期清除率有关。在治疗2

11、4周HBsAg1500 IU/ml且同时出现HBeAg血清转换的患者中，有20%可获得HBsAg清除。因此，HBsAg定量可以用于指导治疗。而且，治疗结束时HBsAg水平越低，停药后随访的HBsAg清除率越高。临床意义 布鲁内托（Brunetto）研究显示，无论是HBeAg（+）还是HBeAg（-）的慢性乙肝患者，在接受干扰素治疗48周后，若其HBsAg定量10 IU/ml（占88%，171/194例），随访3年，仅有2%（4/174例）的患者出现HBsAg消失。同样，治疗48周时HBsAg下降2 log的患者， 随访3年，HBsAg消失率高达42%；下降2 log患者中，仅有3%的HBsAg

12、消失。因此，在治疗结束时，对于那些HBV DNA 阴转并出现HBeAg血清转换的患者，如果HBsAg水平下降不明显，可考虑延长疗程，以进一步提高HBeAg血清转换率和HBsAg清除率。临床意义检测模式分析Part 4检测结果模式分析HBsAgHBsAbHBeAgHBeAbHBcAbPreS1AgPreS1Ab简要意义乙肝表面抗原乙肝表面抗体乙肝E抗原乙肝E抗体乙肝核心抗体乙肝前S1抗原乙肝前S1抗体HBsAg阳性提示乙肝携带；HBeAg、pre-S1Ag、阳性提示病毒复制,传染性强；HBsAb、HBeAb阳性提示机体具备免疫力，趋于恢复，pre-S1Ab阳性提示肝细胞有阻断乙肝病毒感染的功能。

13、-没有乙肝病毒感染，不具备免疫力。-+-接种疫苗，乙肝恢复，具备免疫力。-+急性乙肝恢复或接种进口疫苗，具备免疫力。-+-+接种疫苗或少量乙肝病毒感染后恢复，免疫力强。+-表面抗原携带；急性乙肝病毒感染潜伏期后期。+-+-+-急性乙肝早期，病毒复制，有传染性。+-+-+-急慢性乙肝，病毒复制，有传染性（即大三阳）。+-+-+-+急慢性乙肝，恢复期或治疗有效，有传染性。+-+-急慢性乙肝，传染性弱或没有传染性。临床意义HBsAgHBsAbHBeAgHBeAbHBcAbPreS1AgPreS1Ab简要意义乙肝表面抗原乙肝表面抗体乙肝E抗原乙肝E抗体乙肝核心抗体乙肝前S1抗原乙肝前S1抗体HBsAg

14、阳性提示乙肝携带；HBeAg、pre-S1Ag、阳性提示病毒复制,传染性强；HBsAb、HBeAb阳性提示机体具备免疫力，趋于恢复，pre-S1Ab阳性提示肝细胞有阻断乙肝病毒感染的功能。+-+-急慢性乙肝，病毒复制有传染性，乙肝E抗原变异。+-+-急慢性乙肝，没有传染性或传染性弱（即小三阳）。+-+-+急慢性乙肝或乙肝治疗后恢复期，传染性弱。+-+-急慢性乙肝，病毒复制有传染性，乙肝E抗原变异。-+-乙肝核心抗隐性携带，有乙肝既往有感染史。-+-急性乙肝恢复期或既往有感染史。-+-+-+乙肝恢复期或急性乙肝既往有轻度乙肝病毒感染史。+-+-慢乙肝病毒感染携带，传染性弱或没有传染性。+-+-急

15、性乙肝趋于恢复，乙肝携带，病毒复制有传染性。-+-提示乙肝病毒早期感染，有传染性，建意检测HBV-DNA。临床意义 一、何谓PreS1Ag？ PreS1Ag是乙型肝炎病毒基因组前S1区编码的前蛋白，具有很强的免疫原性，是病毒表面抗原(HBsAg)的组成成分。它只存在于具有传染性的完整的乙肝病毒颗粒上，是黏附和侵袭人体肝细胞的主要因子。 临床意义 二、检测PreS1Ag的意义 1. PreS1Ag的检测能够弥补乙肝五项检测的不足 PreS1Ag出现在急性乙肝感染的最早期，在转氨酶升高前，即可查出，是早期诊断乙肝病毒感染的标志。 急性乙肝PreS1Ag转阴越早，预后越好，提示病毒清除和病情好转。反

16、之，PreS1Ag持续阳性，则提示将发展成慢性肝炎。 抗HBe()慢性乙肝约占慢肝的30%50%，检测PreS1Ag()，提示病毒在机体内继续复制，具有传染性，患者容易演变为肝硬化或肝癌。加查PreS1Ag，弥补了因HBeAg的缺失造成的诊治困难。 在乙肝无症状携带者中，有一定比例HBeAb()者，如果PreS1Ag()可反映出病毒并没有被清除，在体内复制仍然活跃，肝脏存在潜在的病理损伤。 抗病毒治疗，检测PreS1Ag可作为治疗前的患者筛查(适应症)和治疗后的疗效判断。 临床意义 2. PreS1Ag检测能够加强HBVDNA检测的作用 因病毒基因变异的影响，个别病毒变异株感染的患者HBVDN

17、A检测为阴性，PreS1Ag的检测可以防止漏检，并提示可能存在病毒变异迹象。 PreS1Ag是免疫测定技术，具有快速、直接、简便的特点。PreS1Ag的检测与HBVDNA检测在乙肝的诊断方面相互补充和加强，就像HBVDNA不能替代乙肝五项的检测一样，同样HBVDNA不能替代PreS1Ag的检测。临床意义 三、何谓PreS1Ab？ 是HBV的中和抗体，能阻止HBV侵入肝细胞，抗-PreS1Ab在急性期和恢复早期出现，预示病毒正在或已被清除，疾病预后良好。乙型肝炎病毒 前S1抗体 可作为急性乙型肝炎临床预后早期诊断的血清学指标。 临床意义 四、PreS1Ab意义： 1前S1抗体是急性 HBV 感染

18、最早期出现的抗体比 HBsAb 和抗 HBcIgM 出现早，起到了临床预后早期诊断的作用。前S1抗体出现提示预后良好。前S1抗体参与病毒的清除，前S1抗原/抗体的反转预示疾病将进入恢复期，急性乙型肝炎患者前S1抗原阴转越早，前S1抗体阳转越早预后越好。 2对慢性乙型肝炎患者长期动态、随访 出现血清前S1抗体阳性者，HBVDNA阴转率显著增高或 HBVDNA 含量显著下降，预示疾病恢复良好。 3乙型肝炎病毒 前S1抗体 可作为临床抗病毒疗效疾病预后的血清学指标。 4总之，乙型肝炎患者前S1抗体出现与否，与病程的进展以及预后有较密切的关联。前S1抗体的检测对乙肝的诊断及治疗有较为重要的临床意义。 三、注意事项注意事项 1 标本采集与处理的影响标本收集后应尽快分离出血清或血浆以避免溶血。检测时应尽量使用新鲜的标本