作业指导书-医疗器械产品生物负载检测操作指引,直接接种法,薄膜过滤法

1、XXX有限公司文件褊虢XXXPage 1 of 7工作指引名称:产品生物负载检测适用范围Scope适用于对产品的生物负载检测及评估.参考文件 Normative referenceISO 11737-1, Sterilization of medical devices Microbiological methods Part 1: Determination of a population of microorganisms on products;ISO 13485 Medical devices Quality management systems Requirements for re

2、gulatory purposes.GB19580 一次性使用医疗用品卫生标准定义 Definitions生物负载Bioburden:产品或无菌阻隔系统上的存活微生物的总数；修正系数Correction Factor(CF):用于补偿无法从产品或培养基中完全除去微生物 的数值；样品份额Sample item portion(SIP):从产品上取的用于测试的规定部分.职责 Responsibility实验员：具备微生物方面知识，熟悉测试操作，负责产品的测试及报告.实验工程师：熟悉测试，指导实验员测试，检查测试报告.质量主管/经理:负责审批测试报告.确认程序 Validation procedur

3、e实验员每月从生产车间随机三个单独批中抽取各10个样品测定批产品生物负载；样品的选择，被测试样品必须具有代表性，可以体现产品的真实生物负载的情况；测试样品份额(SIP)的选择，若验证生物负载在产品上是均匀分布的,SIP可以是该产 品的任何部份，否则样品应包含能代表所制产品的每种相应材质而随机选取的产品 部位.若已知生物负载分布，可以从认为对灭菌工艺最有挑战性的产品部份选取SIP.可在长度，质量，体积或表面积基础上计算SIP:制定:XX忍：日期：2-Mar-19修定版次：3XXX有限公司文件褊虢XXXPage 2 of 7工作指引名称:产品生物负载检测SIP的类型产品类型表面积植入类（无渗透吸收

4、型）质量粉尘类衣服类植入类（可渗透吸收型）长度管道类（管径T）体积液体奥5.4生物负载测定方法的选择，可参考以下图表YesNo|f non*? ofthe at)oeIs possibleSwabblng/conticlplating制定：XX忍：日期：2-Mar-19修定版次：3XXX有限公司文件褊虢XXXPage 3 of 7工作指引名称:产品生物负载检测测试准备检测设备A.洁净工作台B.细菌过滤器C.超声清洗机D.恒温培养箱E.高压蒸汽灭菌锅检测用品A.洗脱液，稀释液:0.02%吐温80,0.9 %NaCl,PH7.0氯化钠-蛋白冻缓冲液；B.营养琼脂培养基或胰蛋白陈大豆琼脂培养基；C.

5、剪刀银子，微孔滤膜（0.45叩）；D.酒精灯,75%酒精，培养皿；根据检测需要，按规定要求配制好培养基和洗脱液，稀释液；将配制好的培养基和洗脱液，稀释液分装到三角瓶中密封并用白纸包住封口，微孔滤膜用水润湿放入培养皿中，剪刀，银子，培养皿，细菌过滤器不锈钢杯用白纸 包好,所有物品经121c高压蒸气灭菌30min；超声清洗机和细菌过滤器用75%酒精擦洗干净；实验前两小时打开洁净工作台，微生物限度室，更衣室的紫外灯进行环境消毒 30min,在开启紫外灯时人员必须远离，以免灼伤眼睛和皮肤造成人身伤害；所有检测用品，样品由传递窗递入微生物限度室.测试操作步骤直接接种法：适用于生物负载低和样品结构合适的样

6、品；a）将样品包装去除，以无菌操作手法放入培养皿，注入约45 c的溶化培养基，混 匀，凝固，置361C培养2448小时,计数；b）取试验用培养基置于无菌平皿中，凝固，倒置培养，作阴性对照，不得有菌生长；薄膜过滤法：a）将样品包装去除，用灭菌银子将样品放入超声清洗机中，如样品过大而无法放 入可将样品进行适当拆分；b）将样品浸入含有适量洗脱液的超声清洗机中，加入适量的稀释液，以洗脱液浸 满样品表面为准；c）打开超声清洗机，清洗5min,超声清洗频率不应过高，以免造成微生物死亡；制定:XX忍：日期：2-Mar-19修定版次：3XXX有限公司文件褊虢XXXPage 4 of 7工作指引名称:产品生物负

7、载检测d）清洗结束后将样品取出，洗脱液在细菌过滤器上进行过滤，应注意滤膜在使用 前后的完整性；e）洗脱液经薄膜过滤后，可用PH7.0气化钠-蛋白冻缓冲液冲洗滤膜，每张滤膜每 次冲洗量为100ml;f）过滤完成取出滤膜，菌面朝上贴于培养基表面上培养，计数；g）取试验用的稀释液1ml,按上述方法操作，作为阴Tt对照，不得有菌生长； h）结果计算B = FTB XCFB（bioburden）:产品生物负载FTB （first treatment bioburden）:初次处理菌落数 CF（Correction factor）:修正系数注:CF的计算参考ISO11737-1附录C和 WI09.05-0

8、09.检测报告编号规则：P-XXX-YYYYXXX:流水号YYYY:年份6结果判定每个单元产品生物负载，每一批的平均单元产品生物负载（批平均）和所有单元产品 平均生物负载（总平均生物负载）不得大于100cfu/个；如产品的生物负载水平超过85cfu/个,应立即通知质量主管，及相关部门改善；如果每一批的平均单元产品生物负载（批平均）和所有单元产品平均生物负载（总平 均生物负载）超出100cfu/个，应从相同批次产品中重新抽样进行检测；如重新检测的结果仍超出合格水平，应立即通报相关部门并按COP14的要求发出内 部纠正行动要求表作出跟踪及纠正改善行动，由上级决定该批产品是否需要增加灭 菌次数或灭菌

9、剂量；灭菌后对产品抽样进行无菌检测，如检测结果符合无菌要求，则该批产品可放行；如检 测结果显示产品不能达到无菌的要求，由上级决定该批产品是否需重新灭菌；7 文件保存期限：相关检测报告保存10年.8 附录8.1 Product Bioburden Test Report8.2 Repetitive Recovery Testing Report制定:XX忍：日期：2-Mar-19修定版次：3XXX有限公司文件褊虢XXXPage 5 0f 7工作指引名称:产品生物负载检测附录 8.1 Product Bioburden Test ReportProduct Bioburden Test Repor

10、t(Ref： ISO1173M； GH16&80)Report No.PFodud Iriforriabon :Product Lol No.:Sample Qtantty:SIP:SanipIngJJaie :estinq EnvironMediaMma Lot NoIncubation Tcrnpcraturc:Incubation Pcrioa:Sample serials hoFirat Treatment BioburdenProduct BobuMun (CFUw)1234567g910AUtzRAGENC lhConclusionTested:Chedred:Approved :

11、Date:Date:Date:制定：XX忍：日期：2-Mar-19修定版次：3XXX有限公司文件褊虢XXXPage 6 of 7工作指引名称:产品生物负载检测附录 8.2 Repetitive Recovery Testing ReportRepetitive Recovery Testing Report(Rof： ISO 11737-1)Repor NoSanple intorrraton：Product on Lot No.Sample Qty:SIP:Sampbrg Date:Tcctinq Env ronmen: (FRH)：Media,Med a Lot No.7Incubatio

12、n Temperature :Inou bat ior Period :fatal Aerobic CcunttKecovened CFUrDewice 1t Mj.1stT-RaTmAFii2nd11rMment3rdTrsilrnen：4ihTwrn1mpi1，力Tre3mBmTotal colony couniRs rowal by1Trinni123A5Average Removal by 1st treatmenlCorrective Factor (CF)NOTE Removal by 1 st tnealment = 1st treatmenVTutai colony countC- - V Average Removal 号 1st treat men tTestedClieckedApprovedDateDate:Date制定：XX忍：日期：2-Mar-19修定版