药物分析学课件：第二十一章 药品质量控制中的现代分析方法的进展

1、8/4/20221药品质量控制中的现代分析方法的进展Modern analytical methods & techniquesin quality control of drugs第二十一章8/4/20222 现代分析方法与技术，为药学的发展提供了适时而有效的手段与动力。色谱及其联用技术： 药学研究分子水平。手性分析： 毛细管电泳及手性色谱技术药物研究与质量控制提供了保障。现代光谱技术： 药物结构鉴定， 微量杂质检定。概 况8/4/20223第一节 Capillary electrophoresis (CE)电泳-在电解质溶液中，位于电场中的带电离子在电场力的作用下，以不同的速度向其所带电荷

2、相反的电极方向迁移的现象，称之为电泳。由于不同离子所带电荷及性质的不同，迁移速率不同，可实现分离。利用电泳现象对某些化学或生物物质进行分离分析的方法和技术叫电泳法。动画18/4/20224高效毛细管电泳在技术上采取了两项重要改进： 一是采用了0.05mm内径的毛细管,； 二是采用了高达数千伏的电压。高效毛细管电泳的柱效远高于高效液相色谱，理论塔板数高达几十万块/米，特殊柱子可以达到数百万。8/4/20225分离过程 电场作用下，毛细管柱中出现：电泳现象和电渗流现象。电泳-是指在电场作用下，溶液中的带电粒子作定向移动的现象。电渗-是指在电场作用下，毛细管或固相多孔物质内液体沿固体表面移动的现象。

3、电渗流 HPLC(塞流) (层流) 8/4/20226电渗与固液界面的双电层有着密切的关系 在毛细管壁双电层的扩散层中的阳离子，相对于毛细管壁的负电荷表面，形成一个圆筒形的阳离子鞘，在电场作用下，溶剂化了的阳离子，沿滑动面与紧密层作相对运动，携带着溶剂一起向阴极迁移，便形成了电渗流（electroosmotic flow ,EOF）。 CE所用的石英毛细管柱，在pH3时，石英毛细管壁上的硅醇基( SiOH）在水溶液中发生电离，产生的SiO负离子使毛细管壁内表面带负电，和溶液接触时相应的缓冲液带正电，形成了双电层。8/4/20227 带电粒子的迁移速度=电泳+电渗流；两种速度的矢量和。 正离子：

4、两种效应的运动方向一致，在负极最先流出； 中性粒子无电泳现象，受电渗流影响，在阳离子后流出； 阴离子：两种效应的运动方向相反。电渗流 电泳时,阴离子在负极最后流出,在这种情况下,不但可以按类分离,除中性粒子外,同种类离子由于受到的电场力大小不一样也同时被相互分离。动画2动画38/4/20228进样系统无死体积进样进样方法电动法，压力法，扩散法装填缓冲液对毛细管进行清洗是保持CE高效和重现分离 的条件之一毛细管电绝缘，紫外/可见光透明和富有弹性 塑料管，玻 璃管，石英管等。弹性熔融石英毛细管使用普遍毛细管电泳仪基本结构8/4/202291.高压电源（1）030 kV 稳定、连续可调的直流电源；（

5、2）具有恒压、恒流、恒功率输出；（3）电场强度程序控制系统；（4）电压稳定性：0.1%；（5）电源极性易转换；2. 毛细管柱 （1）材料：石英：各项性能好；玻璃：光学、机械性能差； （2）规格：内径2075m，外径350400m；长度电泳时,阴离子在负极最后流出,在这种情况下,不但可以按类分离,同种类离子由于差速迁移被相互分离。 最基本、应用广的分离模式；（capillary zone electrophoresis ，CZE）毛细管区带电泳8/4/202216分离依据： 基于试样组分质荷比的差异。分离对象： 特别适合分离带电化合物，包括无机阴离子、无机阳离子、有机酸、胺类化合物、氨基酸、蛋白

6、质等，不能分离中性化合物。（capillary zone electrophoresis ，CZE）毛细管区带电泳8/4/202217毛细管区带电泳的应用8/4/2022188/4/2022198/4/2022208/4/2022218/4/2022228/4/202223二、毛细管凝胶电泳 capillary gel electrophoresis ，CGE 将聚丙烯酰胺等在毛细管柱内交联生成凝胶。 其具有多孔性，类似分子筛的作用，试样分子按大小分离。能够有效减小组分扩散，所得峰型尖锐，分离效率高。 蛋白质、DNA等的电荷/质量比与分子大小无关，CZE模式很难分离，采用CGE能获得良好分离，

7、DAN排序的重要手段。 特点：抗对流性好，散热性好，分离度极高。 无胶筛分技术：采用低粘度的线性聚合物溶液代替高粘度交联聚丙烯酰胺。柱便宜、易制备。8/4/202224 1.缓冲溶液中加入离子型表面活性剂，其浓度达到临界浓度，形成一疏水内核、外部带负电的胶束。三、 胶束电动毛细管色谱（MECC ，MEKC）micellar electrokinetic capillary chromatography，MEKC 在电场力的作用下，胶束在柱中移动。8/4/202225 2. 电泳流和电渗流的方向相反，且电渗流 电泳 ，负电胶束以较慢的速度向负极移动； 5.色谱与电泳分离模式的结合。 3.中性分子

8、在胶束相和溶液（水相）间分配，疏水性强的组分与胶束结合的较牢，流出时间长； 4.可用来分离中性物质，扩展了高效毛细管电泳的应用范围；8/4/202226 1. 根据等电点差别分离生物大分子的高分辨率电泳技术； 2. 毛细管内充有两性电解质（合成的具有不同等电点范围的脂肪族多胺基多羧酸混合物），当施加直流电压（68V）时，管内将建立一个由阳极到阴极逐步升高的pH梯度； 3. 氨基酸、蛋白质、多肽等的所带电荷与溶液pH有关，在酸性溶液中带正电荷，反之带负电荷。在其等电点时，呈电中性，淌度为零；四、毛细管等电聚焦 capillary isoelectric focusing，CIEF8/4/2022

9、27 4. 聚焦：具有不同等电点的生物试样在电场力的作用下迁移，分别到达满足其等电点pH的位置时，呈电中性，停止移动，形成窄溶质带而相互分离； 5. 阳极端装稀磷酸溶液，阴极端装稀NaOH溶液； 6. 加压将毛细管内分离后的溶液推出经过检测器检测； 7. 电渗流在CIEF中不利，应消除或减小。8/4/202228 1. 将两种淌度差别很大的缓冲液分别作为前导离子(充满毛细管)和尾随离子，试样离子的淌度全部位于两者之间，并以同一速度移动。 2. 负离子分析时，前导电解质的淌度大于试样中所有负离子的。所有试样都按前导离子的速度等速向阳极前进，逐渐形成各自独立的区带而分离。阴极进样，阳极检测。五、毛

10、细管等速电泳 capillary isotachophoresis ，CITP8/4/202229 3. 不同离子的淌度不同，所形成区带的电场强度不同(=E)，淌度大的离子区带电场强度小； 沿出口到进口，将不同区带依次排序1、2、3、4 电场强度依次增大。假设“2”号中离子扩散到“3”号，该区电场强度大，离子被加速，返回到“2”区；当“2”号中离子跑到“1”号区，离子被减速使之归队； 4. 特点：界面明显，富集、浓缩作用；8/4/202230第二节 超高效液相色谱法（UPLC）UltraPerformance LC (UPLC ) technology starts with unique 1

11、.7 m small-particle chemistries. Chromatographers no longer need to choose between speed and resolutionwith UPLC you get both.8/4/202231超高效液相色谱法 超高效液相色谱（ultra performance liquid chromatography, UPLC) 综合了小颗粒填料、非常低死体积，快速检测手段等全新的检测技术。 需要耐压，稳定的小颗粒填料，耐压的色谱系统，最低交叉污染的快速进样器，快速检测器及优化系统体积等多方面的保障。8/4/202232UPL

12、CVan Deemter方程式说明使色谱峰扩张而降低柱效的因素。对于分离条件的选择具有指导意义。可以说明填充均匀程度、载体粒度、载气种类、载气流速、柱温、固定液层厚度对柱效的影响。 HAB/uC uH为塔板高度(cm)，u为载气的线速度(cm/s)。uL/t , L为柱长(cm), t 为死时间(s)。 A：反映颗粒度和柱床填装的优良程度B：轴向扩散C：传质8/4/202233技术耐压，稳定的小颗粒填料新型填料及装填技术： 小颗粒填料的合成，粒度分布范围窄，且需要更严格的筛分技术，使1.7m填料分布更窄 二代杂化有机填料耐压的色谱系统 密封，高压动力，解决超高压下溶剂的压缩性和绝热升温最低交叉

13、污染的快速进样器 针内针样品探头，压力辅助进样，一强一弱的双容积进样针清洗步骤快速检测器更快的数据采集频率，减小检测池体积8/4/202234优点1 高分离度8/4/2022352 高速度8/4/2022363 高灵敏度8/4/2022374 简便的方法换算8/4/2022385 易与质谱串联8/4/202239第三节 手性HPLC技术 1 手性药物具有不同的药动学和药效学 2 药物活性，毒性，副作用差别大，因此建立快速灵敏的分离和测定对映体药物的方法十分必要。8/4/202240对小鼠镇静作用相近。R体有镇静作用，但是S-对映体对胚胎有很强的致畸作用。正是有了60年代的这个教训，所以药物在研

14、制成功后，都要经过严格的生物活性和毒性试验，以避免其中所含的另一种手性分子对人体的危害。8/4/202241第三节 手性HPLC技术可用于：（1 ）手性药物纯度检查（2）体液中对映体研究，探索血药浓度与疗效关系（3）评价单个对映体效价，毒性，不良反应，药动学（4）手性对映体拆分，制备8/4/202242三点手性识别模式手性HPLC拆分：直接法，间接法间接法-手性试剂柱前衍生（CDR法）直接法使用手性流动相（CMP法）或手性固 定相（CSP法）拆分8/4/202243柱前衍生（CDR法）、手性流动相（CMP法）和手性固定相（CSP法）比较：CDR应用条件简易，采用普通HPLC即可， 缺点：化合物

15、需预分离，需衍生化试剂CMP不必柱前衍生化，固定相无要求 缺点：添加剂不够稳定，可拆分的化合物有限CSP制备方便，可靠性高 缺点：适用性不如普通HPLC固定相广泛8/4/202244Mass spectroscopy MSNuclear magnetic resonance spectrometry NMRX-ray diffraction methodNear infrared spectrometry NIRS现代光谱法及其应用Modern spectroscopy & its application in pharmaceutical analysis8/4/2022458/4/2022

16、468/4/2022478/4/2022488/4/202249一、 质谱分析原理8/4/202250质谱仪需要在高真空下工作：离子源（10-3 10 -5 Pa ）质量分析器（10 -6 Pa ）(1) 大量氧会烧坏离子源的灯丝；(2) 用作加速离子的几千伏高压会引起放电；(3) 引起额外的离子分子反应，改变裂解模型，谱图复杂化。8/4/202251电子轰击电离 Electron Impact Ionization, EI化学离子化 Chemical Ionization, CI场电离，场解吸 Field Ionization FD, Field Desorption FD快原子轰击 Fas

17、t Atom Bombardment, FAB基质辅助激光解析电离 Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization, MALDI电喷雾电离 Electrospray Ionization, ESI大气压化学电离 Atmospheric Pressure Chemical Ionization, APCI离子化的方法8/4/202252原理与结构电离室原理与结构仪器原理图8/4/202253质量分析器原理在磁场存在下，带电离子按曲线轨迹飞行； 离心力 =向心力；m 2 / R= H0 e V曲率半径： R= (m ) / e H0 质谱方程式：m/e =

18、(H02 R2) / 2V离子在磁场中的轨道半径R取决于： m/e 、 H0 、 V改变加速电压V, 可以使不同m/e 的离子进入检测器。质谱分辨率 = M / M （分辨率与选定分子质量有关）加速后离子的动能 :(1/2)m 2= e V = (2V)/(m/e)1/28/4/202254质量分析器8/4/202255离子阱质量分析器8/4/202256四极质量分析器 四极质谱计 8/4/202257四极杆质量分离器8/4/202258二、仪器与结构8/4/202259triplequadrupolemassspectrometer8/4/2022608/4/2022618/4/202262

19、8/4/202263飞行时间质量分析器8/4/202264GC-FTIRGC-MSUPLC-MSHPLC-NMRHyphenated Techniques in Chromatography 现代联用技术及其应用HPLC-MSCE-MS+ 样品与溶剂脱离及电离 EI ESI APCILC/MS接口 离子源质量分析器检测离子HPLC数据系统质谱离子识别 Quadrapole Time of Flight Fourier Transform +离子检测+-+-+液质联用技术与应用8/4/202266离子化方式8/4/2022678/4/2022688/4/2022698/4/2022708/4/2

20、02271离子分离与测定模式8/4/2022728/4/202273Full-Scan Mass SpectrometryAdvantageProvides MW Information8/4/202274Full-Scan MS of BuspironeBuspirone (丁螺环酮)C21H31N5O2MW = 385150200250300350400450500m/z255075100Relative Abundance386408(M+H)+(M+Na)+8/4/202275Single Ion Monitoring (SIM)AdvantagesTargeted Analyte M

21、onitoringHigh Duty CycleSimpleDisadvantagesCan suffer from interferencesNot as sensitive or selective as SRM (see below)Fixed m/zPass AllPass All8/4/202276Product Ion Scanning: A Tandem MS MethodAdvantageProvides Structural InformationDisadvantageLow duty cycleFixed m/zPass AllScanningProduct Ion Sp

22、ectrumQ3Q2Q18/4/202277Product Ion Spectrum of Buspirone100150200250300350400m/z255075100Relative Abundance122386222150265180(M+H)+8/4/202278Precursor Ion ScanningAdvantageID compounds producing specific fragment ion (e.g., PO3 for phosphopeptides)DisadvantageLow duty cycleFixed m/zPass AllScanningPr

23、ecursor Ion SpectrumQ3Q2Q18/4/202279Precursor Ion Scan Mode for Buspirone MetabolitesPrecursor Ion Scan: Q3 set to m/z 122100200300400500m/zRelative Abundance402386910111213141516Time (min)255075100Relative Abundance11.6213.8413.1614.4012.1310.4515.458/4/202280Neutral Loss ScanningAdvantageScreen fo

24、r compounds producing specific neutral loss (e.g., loss of 176 for glucuronide conjugates)DisadvantageLow duty cycleScanningPass AllScanningNeutral Loss SpectrumLinkedQ3Q2Q18/4/202281Neutral Loss Scan of Buspirone MetabolitesNeutral Loss Scan: Q1/Q3 difference set to 121 Da100200300400500m/zRelative

25、 Abundance402386910111213141516Time (min)255075100Relative Abundance13.9211.6913.2115.5010.588/4/202282Selected Reaction Monitoring (SRM)AdvantagesTargeted Analyte MonitoringHigh Duty Cycle“Simultaneous” Monitoring of Multiple TransitionsDisadvantageNo “advanced” structural informationFixed m/zPass

26、AllFixed m/zQ1Q2Q38/4/202283MS/MS Selectivity in Complex Matrices息斯敏阿斯咪唑(astemizole)8/4/202284Chlroamphenicol(氯霉素，CAP)残留测定黄杨生物碱成分鉴定苯甲酸利扎曲普坦人体药代动力学研究药物分析中的典型应用8/4/202285研究背景 紫花地丁，堇菜科堇菜属植物光瓣堇菜(Viola yedoensis Makino) 的干燥全草，具有清热解毒、消痈散结的功效。 黄酮、香豆素、萜类、有机酸类。抗菌、抗病毒、抗炎、降脂、抗凝血。UV测总黄酮，HPLC测单一组分。品种严重混乱；质控指标不明；

27、现代药理活性报道较少；药效物质基础不清楚；体内代谢不明确。分析药理化学8/4/202286研究背景 水蔓菁，别名勒马回，为玄参科婆婆纳属植物水蔓菁（Veronica linariifolia Pall. ex Link subsp. dilatata (Nakai et Kitagawa) Hong ）的干燥全草，具有清热解毒，利尿，止咳化痰的功效。成分的全面分析，特别是代表性成分鉴定尚未有报道。分析药理化学黄酮、酚酸、环烯醚萜、苯乙醇苷类。镇咳、抗炎、保肝、抗肿瘤、抗疟。指纹图谱8/4/2022871.1 紫花地丁HPLC-Q-TOF/MS研究 1 秦皮甲素(esculin)；2 菊苣苷(c

28、ichoriin)； 3 七叶内酯(esculetin)；4 早开堇菜苷(prionanthoside)；5 芦丁(rutin)；6 东莨菪素(scopoletin)；7 双七叶内酯(euphorbetin)；8 槲皮素-3-O-D-葡萄糖苷 (quercetin-3-O-D-glucoside)；9 山奈酚-3-O-D-葡萄糖苷 (kaempferol-3-O-D-glucoside)；10 芹菜素-7-O-D-葡萄糖苷 (apigenin-7-O-D-glucoside)；11 双聚七叶内酯(dimeresculetin)；12 槲皮素(quercetin) 。对照品：实验内容供试品：紫花

29、地丁干燥全草，75%甲醇超声提取。8/4/202288HPLC-Q-TOF/MS：准确分子量信息；二级质谱碎片信息；灵敏度高，分辨率好，采集速度快。获得丰富的多级裂解碎片信息， 给出化合物的平均分子量，但属于低分辨率仪器。ESI-MSn属于高分辨率仪器，能给出化合物的准确分子量和较少结构信息。TOFTOFQ-TOF1.1 紫花地丁HPLC-Q-TOF/MS研究8/4/202289液相条件： 色谱柱： Agilent Zorbax SB-C18柱 (4.6150 mm id, 5m)； 流速：0.8mL/min； 进样量：1L。 检测波长：354 nm； 流动相：A: 0.1%甲酸-水; B:乙

30、腈。梯度洗脱：1-10min,5-16% B;10-35 min,16-17% B; 35-42min,17-22% B; 42-50 min,22-45% B；50-58 min,45-60% B.质谱条件： 6530 Q-TOF型离子阱质谱仪，ESI 离子源。离子源参数：正离子模式； N2流速：10 L/min； 毛细管温度：300 ； 毛细管电压：3500V； N2压力：25 psi。 全扫描范围：m/z 100 到m/z 1200。 碰撞能量：30和50V。 仪器控制、数据采集、处理:由Masshunter workstation software version B.02.00 (A

31、gilent Technologies)完成。1.1 紫花地丁HPLC-Q-TOF/MS研究 实验内容8/4/2022901.1 紫花地丁HPLC-Q-TOF/MS研究 AB离子模式的选择： Positive mode二级碰撞电压 ： 15 V，30 V和50 V- 50 V。（1）质谱条件的优化实验结果8/4/2022911.1 紫花地丁HPLC-Q-TOF/MS研究 （2）紫花地丁中化合物鉴定实验结果 共鉴定12个化合物，包括9个香豆素，3个黄酮。11762435891011128/4/2022921.1 紫花地丁HPLC-Q-TOF/MS研究 （3）简单香豆素类成分裂解规律实验结果-16

32、2 (Glc) 133.0279-162 (Glc)-28(CO)-18(H2O)-162 (Glc)-28(CO)-28 (CO)-18(H2O)-162 (Glc)-28 (CO)cichoriin 8/4/202293（3）双香豆素类裂解规律实验结果1.1 紫花地丁HPLC-Q-TOF/MS研究 133.0290 161.0244179.0339253.0467M+H-CO-CO-CO-H2O+M+H-CO-CO+M+H-C9H4O4+M+H-C9H4O4-H2O+M+H-C9H4O4-H2O-CO+dimeresculetin 8/4/2022941.1 紫花地丁HPLC-Q-TOF/

33、MS研究 （3）黄酮类裂解规律实验结果 M+H-Glu+M+H-Glu-H2O-CO+M+H-Glu-H2O+M+H-Glu-H2O-C8H4O2+M+H-Glu-C7H5O3+M+H-Glu-H2O-C7H5O3-CO+109.0287 M+H-Glu-H2O-C7H5O3-CO-CO+quercetin-3-O-D-glucoside 8/4/2022951.1 紫花地丁HPLC-Q-TOF/MS研究 实验结果8/4/202296研究内容1.1 紫花地丁HPLC-Q-TOF/MS研究 堇菜属植物成分分析研究 11.2 堇菜属植物HPLC-Q-TOF/MS研究 8/4/2022971.2 堇

34、菜属植物HPLC-Q-TOF/MS研究 实验内容 堇菜属另10种常见植物的基本离子流图早开堇菜心叶堇菜长萼堇菜 紫花地丁（V. philippica）戟叶堇菜毛果堇菜紫花堇菜斑叶堇菜白花地丁蔓生堇菜8/4/202298C11H12Cl2N2O5FMW=323.13【类别】酰胺醇类抗生素【适应症】本品是治疗伤寒、副伤寒的首选药物，外用可治疗沙眼。因脑脊液浓度高，故常用于治疗细菌性脑膜炎和脑脓肿。此外，尚可外用治疗痤疮、酒糟鼻、脂溢性皮炎等。 被农业养殖滥用！ 肉食品中严格检查。Chlroamphenicol(氯霉素，CAP)残留测定8/4/202299HPLC analysis was perf

35、ormed on the Finnigan Surveyor HPLC module with MS Pump and AutosamplerColumn: Thermo Hypersil Gold C18 (1002.1 mm, 5)Mobile Phase: A: Water; B: AcetonitrileColumn Temperature: 40 oCGradient Program: 0.25 mL/minInjection: 20 uL with loopTime (min)% A% B080202.520803.020803.180205.080208/4/2022100Ope

36、ration Conditions for CAPIon source:ESIIon polarity:NegativeSpray voltage:4000 VSheath gas pressure:45Auxiliary gas pressure:15Ion transfer capillary temperature:300 oCSource CID:8 VScan Type:SRM, 3 transitions of M-H-(m/z: 321)(321152, 321 194 and 321 257)Q1 peak width0.7 Da in SRM or 0.2 Da in H-S

37、RMQ3 peak width0.7 DaCollision Pressure:Ar at 1.3 mTorr8/4/2022101Q1 peak width and H-SRM experiment Enabling the H-SRM experiment Highly Selective Selected Reaction Monitoring (H-SRM) Reduces “isobaric” chemical noise Increases confidence of analysis & improved LOQQ1 peak width0.7 Da in SRM or 0.2

38、Da in H-SRMQ3 peak width0.7 Da8/4/20221028/4/2022103CAP SRM Result: CAP Standard Q1 peak width = 0.7 DaTIC321-152321-194321-257CAPPeak Area Counts = 2.4E48/4/2022104CAP SRM Result: Kidney Blank TIC321-152321-194321-2578/4/2022105CAP SRM Result: Kidney Spiked (0.5ng/g)TIC321-152321-194321-257CAPNot a

39、ccurate for confirmationCAP detected8/4/2022106CAP H-SRM Result: CAP Standard Q1 peak width = 0.2 DaTIC321-152321-194321-257Peak Area Counts = 7.3E38/4/2022107CAP H-SRM Result: Kidney BlankTIC321-152321-194321-257No CAP detected8/4/2022108CAP H-SRM Result: Kidney Spiked (0.5ng/g)TIC321-152321-194321

40、-257CAP8/4/2022109黄杨宁生物碱HPLC-MS联用鉴定黄杨科植物小叶黄杨Buxus microphlla Sieb. et. Zucc. var. sinica Rehd.et Wils中含有具有较强心血管疾病治疗活性的孕甾烷生物碱，主要含环维黄杨星D、环黄杨碱D和环常绿黄杨碱C等生物碱成分。 8/4/2022110黄杨生物碱HPLC-ELSD色谱图 色谱条件色谱柱：Lichrospher SiO2 (250mm4.6mm,5 m)流动相：四氢呋喃-甲醇-乙腈-氨水 ( 32:50:13:3)流速：1mLmin -1柱温：30ELSD参数：漂移管温度70 雾化气体（N2） 流速

41、：1.5 Lmin -18/4/2022111环维黄杨星D和有关生物碱含量测定结果次数环维黄杨星D含量% 峰1生物碱含量%峰2生物碱含量%峰4生物碱含量%峰5生物碱含量%有关生物碱总含量% 186.853.578.090.790.9213.37287.083.848.540.800.9814.15385.833.468.820.810.9514.03485.703.548.760.870.9314.10585.053.528.640.740.8513.75684.843.749.030.790.9714.53Mean85.893.618.650.800.9313.99RSD%1.073.653

42、.384.624.632.88/4/2022112环维黄杨星D及其有关生物碱的鉴别 质谱条件 电喷雾离子化正离子检测 喷口电压5000V 雾化气压35psi 辅助气压力5psi 毛细管温度350 碰撞气氩气压力1.5mTorr 色谱条件 色谱柱：Lichrospher SiO2 (250mm4.6mm,5 m) 流动相：四氢呋喃-甲醇-乙腈-氨水 ( 32:50:13:3) 流速：1mLmin -1 柱温：308/4/2022113黄杨宁LC-MS/MS全扫描色谱图 黄杨宁LC-MS/MS全扫描色谱放大图 1234567898/4/2022114峰1母离子质荷比峰1二级质谱图M+H+=3708

43、/4/2022115可能为峰1的黄杨宁有关生物碱Cyclobuxomicreine KCyclobuxosuffrine KBuxenone MCyclobuxoviridine B8/4/2022116峰2母离子质荷比峰2二级质谱图M+H+= 4318/4/2022117可能为峰2的黄杨宁有关生物碱Cyclomicrophylline BBuxazidine BCyclobuxoxazine CCyclomicrophylline C8/4/2022118峰3母离子质荷比峰3二级质谱图M+H+= 4158/4/2022119可能为峰3的黄杨宁有关生物碱Cycloprotobuxine ACy

44、clokreanine BCyclovirobuxeine B16-deoxybuxidienine C8/4/2022120峰4母离子质荷比峰4二级质谱图环常绿黄杨碱CM+H+= 4178/4/2022121峰5母离子质荷比峰5二级质谱图M+H+= 401383.348/4/2022122可能为峰5的黄杨宁有关生物碱Cycloprotobuxine CBuxaminol EBuxocyclamine ACyclobuxine B8/4/2022123峰6母离子质荷比峰6二级质谱图环黄杨碱DM+H+= 3878/4/2022124峰7母离子质荷比峰7二级质谱图环维黄杨星DM+H+= 4038/

45、4/2022125峰8母离子质荷比M+H+= 3758/4/2022126 357.15峰8二级质谱图峰9二级质谱图 371.178/4/2022127m/z=375m/z=357m/z=344m/z=326m/z=309 357.158/4/2022128峰9母离子质荷比M+H+= 3898/4/2022129峰9二级质谱图 371.178/4/2022130m/z=389m/z=371m/z=358m/z=340m/z=309 371.178/4/2022131峰位号tR(min)M+H+(m/z)特征碎片离子(m/z)可能生物碱名称13.92370339，325，283，135，70，5

46、8Cyclobuxomicreine K, Cyclobuxosuffrine K,Buxenone M, Cyclobuxoviridine B24.03431413，382，323，86，70，58Buxazidine B, Cyclomicrophylline B,Cyclobuxoxazine C, Cyclomicrophylline C35.35415384，84，58Cycloprotobuxine A,Cyclokreanine B,Cyclovirobuxeine B, 16-deoxybuxidienine C45.92417399，386，368，84，58Cylcycl

47、ovirobuxine C56.11401370，352，326，171，58Cycloprotobuxine C, Buxaminol E,Buxocyclamine A, Cyclobuxine B67.03387369，356，338，171，58Cyclobuxine D77.63403385，372，354，70，58Cyclovirobuxine D88.28375357，344，326，309，58未有相关文献报道99.77389371，358，340，173，70，58可能为Cyclobuxine D双键加氢还原产物HPLC-ELSD法黄杨宁有关生物碱归属表8/4/202213

48、2苯甲酸利扎曲普坦 (Rizatriptan Benzoate) MW: 391.47 分子式：C15H19O5C7H6O25-HT受体拮抗剂2.3.3 苯甲酸利扎曲普坦人体药代动力学研究8/4/2022133药理作用刺激大脑血管壁的后接点5-HT1B受体收缩血管，降低颅内血管通透性；刺激三叉神经前突触5-HT1D受体，调节神经递质的释放，抑制硬膜的神经原性炎症反应和血浆外渗；阻止血管肽的释放，使血管口径正常化，通过收缩颅内血管并抑制神经炎症； 刺激脑干5-HT1B或5-HT1D受体，抑制三叉神经核兴奋； 减少颈动脉血流； 透过血脑屏障，增加脑血流量。 8/4/2022134实验内容建立苯甲酸利扎曲