药品卫生与微生物学培训

1、药品卫生与微生物学培训PEKING PHARM FIRST1什么是微生物微生物是广泛存在于自然界的一群体形微小（直径小于1mm）、结构简单、肉眼看不见，必须藉助光学或电子显微镜放大数百至数万倍才能观察到的生物。 2微生物具有以下特点：1.体积小，面积大2.吸收多，转化快（2000倍体重/h）3.生长旺，繁殖快（20min分裂一次）4.易变异，适应强5.分布广，种类多（10万种以上）3微生物如何分类？微生物按其生理结构及化学组成差异可分成三大类：1.真核细胞型细胞核的分化程度较高，有核膜、核仁和染色体；胞质内有完整的细胞器（如内质网、核糖体及线粒体等）。真菌属于此类型微生物。4微生物如何分类？2

2、.原核细胞型细胞核分化程度低，仅有原始核质，没有核膜与核仁；细胞器不很完善。这类微生物种类众多，有细菌、支原体、衣原体、立克次体、螺旋体和放线菌。5微生物如何分类？3.非细胞型没有典型的细胞结构，亦无产生能量的酶系统，只能在活细胞内生长繁殖。体积微小，能通过除菌滤器。病毒属于此类型微生物。6微生物的分布微生物在自然界里分布非常广泛土壤：土壤具有保温性，土壤环境适合微生物的生长水环境：水中溶解和悬浮有机、无机物，流动水有氧渗入可供微生物生长环境空气：空气不是微生物生长繁殖的主要场所，但是空气中飘浮着许多微生物。7在一般空气中，微生物达8003500个/m3，在土壤中达1500108个/g，在严重

3、污染的水中可达107个/ml。人的头皮上有140万个/cm2，两手上约有440万个，1g指甲污垢有38亿个，1g粪便可达101000亿个。可以说微生物是无处不在，无处不有。 微生物的分布8中等大小的细菌，1000个叠加在一起只有句号那么大。想像一下一滴牛奶，每毫升腐败的牛奶中约有5千万个细菌。细菌繁殖速度之快是惊人的。大肠杆菌的代时为20分钟，以此计算，在最佳条件下8小时后，1个细胞可繁殖到200万上，10小时后可超过10亿，微生物的大小与繁殖速度91细菌（原核单细胞生物）细菌按形状可分为：球菌（0.52m）、杆菌（长15m，宽0.31m）和螺形菌（大小与杆菌相似）。按革兰氏染色法染色的不同，

4、分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。微生物的形态结构102霉菌（丝状真菌的通称，真核多细胞生物）霉菌是真菌的一部分。在培养基上长成绒毛状或棉絮状的菌丝体的真菌统称为霉菌。霉菌细胞呈狭长的管状，称为菌丝。菌丝直径比细菌、放线菌大，约210m。菌丝分枝连接，交错集合在一起的总体称为菌丝体。113酵母菌（真核单细胞生物，属真菌）酵母菌以单细胞存在，呈圆形、卵圆形和香肠形，比细菌大，细胞长530m，宽15m。酵母菌是重要的工业微生物，用于酿酒，生产单细胞蛋白、B族维生素、核酸、辅酶A、细胞色素C等。一般对人体无害124放线菌（原核单细胞生物）放线菌有生长发育良好的菌丝体，呈分枝状，菌丝宽为0.21.2m，

5、革兰氏阳性。菌落常呈幅射状，因此称放线菌。135病毒病毒是一类体积十分微小，结构简单，只含一种核酸（DNA或RNA），没有产生能量的酶系统，只能在活细胞内以复制方式增殖的非细胞型微生物。病毒是最常见的致病微生物，人类传染病中大约75%是由病毒引起的。141营养物2pH值：大多数细菌最适pH为6.87.43温度：一般细菌最适温度为3040，真菌为2030。细胞生长的温度极限为-790微生物生长的影响因素 154氧气：大多数细菌和所有霉菌都是需氧菌，少数细菌是厌氧菌，有些细菌和酵母菌是兼性需氧厌氧的5渗透压：微生物细胞膜和所有生物膜一样是一种半透膜，可让水自由通过，对溶质则有选择性。6表面张力：表

6、面活性剂可降低表面张力，它是影响细菌生长的因素之一161热原质（Pyrogen）:热原质即菌体中的脂多糖，大多是革兰氏阴性菌产生的。注入人或动物体内能引起发热反应，故名热原质。热原质耐高热，高压蒸汽灭菌（121，20）不能使其破坏，加热（1804h;25045;6501）才使热原质失去作用。热原质可通过一般细菌滤器，但没有挥发性，所以，除去热原质最好的方法是蒸馏。微生物的产物：172毒素：细菌可产生内、外毒素，与细菌的致病性密切相关。内毒素（Endotoxin）即革兰氏阴性菌细胞壁的脂多糖，其毒性成分为类脂A。菌体死亡崩解后释放出来。外毒素(Exotoxin)是由革兰氏阳性菌及少数革兰氏阴性菌

7、在生长代谢过程中释放至菌体外的蛋白质。具有抗原性强、毒性强、作用特异性强的突出特点。3.抗生素18人是洁净室最大的污染源，占90%左右。一般男性每人每分钟向周围排放1000个以上的含菌粒子，女性为750个以上。穿无菌服时，静止时的发菌量为10300个/min，一般活动时发菌量为1501000个/min，行走时发菌量为9002500个/min。咳嗽一次发菌量为70700个/min，喷嚏一次为400060000个/min。所以在洁净室中，人的数量和活动应有特别严格的限制。人是最大的污染源？19为什么GMP中要控制微生物？微生物种类繁多，有的对人有益，有的有害，有的无益也无害。但在药品生产过程中，不

8、可能对环境中的各种微生物加以区别对待，为保证药品的安全有效，需要对其进行控制。空气中的微生物多数附着在灰尘上，或以芽孢形式悬浮于空气中，1m以下者处于悬浮状态，10m以上者会逐渐沉下来而形成菌尘。所以也要对尘粒进行控制。20大量临床资料表明，注射剂（尤其是静脉注射剂）如污染了712m的尘粒，可导致热原反应、肺动脉炎、微血栓或异物肉芽肿等，严重的还会致人死命。而如果污染了细菌，轻则局部红肿化脓，重则引起全身细菌性感染。21“欣弗事件” 反映了我国一些企业在微生物控制方面存在的严重问题；而更为严重的是一些企业普遍存在的无菌检查认识误区 ！22药品生产洁净室（区）空气洁净度等级药品生产质量管理规范（

9、2010年修订)23水和一些物料的卫生学（法定）标准注：#：包括有乳糖、药用炭、淀粉、葡萄糖、糊精。%：XX胶囊属中药制剂，含胎盘粉，按中国药典2005版一部规定，还不得检出沙门菌。*：XX霜属中药制剂，用于创伤、烧伤，故要求细菌总数100个/g、霉菌数10个/g。说明：表示每1g或每1ml不得检出。 NC：表示无规定。可不检查。24Disinfection杀死物体上病原微生物的方法,并不一定能杀死含芽胞的细菌或非病原微生物杀灭物体上所有微生物的方法。 不存在活菌的意思。 防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法。消毒：灭菌：无菌：防腐：AsepsisSterilizationAntisepsis消毒

10、与灭菌的基本概念25无菌制剂不存在活的微生物的制剂（GMP指南）。非无菌制剂所含活的微生物量符合卫生学标准的制剂（GMP指南）。26热力灭菌法 常用灭菌方法高温杀灭細菌焚烧-最彻底的灭菌方法烧灼-直接用火焰灭菌方法干烤-加热160-180 2小时干热灭菌法27湿热灭菌法加压蒸汽灭菌法最有效的灭菌方法121，20-30分钟煮沸消毒法水煮100 5分钟(繁殖体)-2小时(芽胞)流通蒸汽消毒法巴氏消毒法间歇蒸汽灭菌法水蒸汽100，15-30分钟(繁殖体)反复多次流动蒸汽间歇加热灭菌较低的温度（61 30分钟）杀灭致病菌28湿热灭菌与干热灭菌的比较同一温度下，湿热灭菌比干热灭菌效果好1、湿热中细菌菌体

11、蛋白较易凝固2、湿热的穿透力比干热大3、湿热的蒸汽有潜热29化学消毒灭菌法 利用化学试剂杀灭微生物的方法类别作用机制常用种类酚类蛋白变性，细胞膜损伤石炭酸醇类蛋白变性乙醇氧化剂氧化、蛋白沉淀高锰酸甲、过氧乙酸、碘酒重金属盐氧化、蛋白酶变性红汞、硫柳汞表面活性剂蛋白变性，细胞膜损伤新洁而灭染料干扰氧化、抑制繁殖龙胆紫常用消毒剂种类30消毒剂常 用 量用途乙醇 70%75%水溶液 0.5%洗必泰溶于70%乙醇，再加入2%甘油用于皮肤、器具等消毒供洗手用消毒异丙醇75%水溶液用于皮肤、器具等消毒甲醛37%40%甲醛液89ml，再加入45g高锰酸钾每m3熏蒸量，密闭1224h。刺激性强戊二醛2%水溶液

12、用于空气、器具等消毒。广谱、高效、低毒，可杀芽孢和病毒。刺激性较轻。常用消毒剂用量及用途31 新洁尔灭（苯扎溴铵）0.1%水溶液用于皮肤、粘膜、器具等消毒，有清洁和消毒双重功效。抗菌谱较窄。 杜灭芬（消毒宁）0.05%0.1%水溶液用于皮肤、器具等消毒 过氧乙酸 0.2%0.5%水溶液 新配0.5%水溶液 1g/m3用于器具等消毒抗菌谱广，可用于皮肤消毒杀灭某些病毒熏蒸，但性质不稳定 乳酸 0.331mol/L 11.5ml/m3熏蒸或与等量苯酚合用熏蒸喷雾，用于空气消毒，有强杀菌作用熏蒸，密闭12h以上 麝香草酚5%麝香草酚溶于50%乙醇喷洒墙面、地面，杀霉菌32消毒剂使用注意 长期使用同一

13、种消毒剂，往往会使细菌产生耐药性，达不到应有的效果所以，在实际生产使用中， 应定期更换不同的消毒剂。 33辐射有两种类型：一种是电磁波辐射，如紫外线、红外线、微波；一种是电离辐射，如可引起被照射物电离的X射线、射线。辐射灭菌法34辐射灭菌法紫外线 紫外光波长在136390nm之间，其中260nm左右能破坏核酸，杀菌作用最强。紫外线消毒的效果与光源的功率、光源与被照射物的距离、照射时间、温度和湿度等因素有关。紫外灯的输出功率随使用时间增加而降低。国产紫外灯的平均寿命一般为2000h，超过平均寿命时必须更换。紫外线的穿透力很弱，不能穿透一般包装材料，如玻璃、塑料薄膜、纸等。35红外线 通过加热碳化

14、硅板产生的辐射热能，由空气传导加热灭菌。如红外线烤箱，温度可达180左右。热效应特点是由表及里。微波 微波灭菌主要是因其热效应。微波加热升温快，温度高且均匀，杀菌作用强。热效应特点是由里及表。不同性质的物品吸收微波的能力不同，其热效应和消毒效果也不同。3660Co灭菌 放射性同位素60Co（或137Cs）衰变时可放射出射线，射线的能量高、穿透力强，可使细胞内各种活性物质发生化学变化，从而使细菌损伤或死亡。经60Co辐射灭菌的物品温度升高很少，一般仅约5，故又称“冷灭菌”。37滤过除菌法 用物理阻留的方法将液体或空气中的 细菌除去,以达到除菌目的。滤菌器含有微细小孔0.22微米,只允许液体或气体

15、通过,而大于孔径的细菌等颗粒不能通过 。适用范围血清、毒素、抗生素以及空气等的除菌 38滤菌过程39臭氧是一种高效广谱杀菌剂，对细菌、病毒、霉菌、芽孢、真菌和微生物等都具有极强的杀灭力。臭氧的杀菌能力比紫外线高20%，且在空气中自行扩散，杀菌无死角，在水中的杀菌速度比氯快600倍。它灭活病毒机理是通过直接破坏其RNA或DNA物质来完成的，而杀灭细菌、霉菌类微生物，则是臭氧首先作用于细胞核，继而破坏膜内组织，直至杀死。由于臭氧最终还原为氧气，所以它对人体和环境没有任何副作用，没有二次污染。它不但对大肠杆菌、绿脓杆菌及杂菌等有消毒能力，而且对霉菌也很有效。臭氧灭菌40 GMP所制定的条款主要是针对

16、消灭任何药品生产中的隐患，这种隐患是无法靠对成品检验完全预防的。这里指的隐患基本上有两个方面：即生产过程中的交叉污染和混药差错 进入洁净室(区)的空气必须净化，并根据生产工艺要求划分空气洁净级别。洁净室(区)内空气的微生物数和尘粒数应定期监测，监测结果应记录存档。GMP相关预防微生物污染措施41 洁净室(区)的窗户、天棚及进入室内的管道、风口、灯具与墙壁或天棚的连接部位均应密封。 洁净室(区)内安装的水池、地漏不得对药品产生污染。 不同空气洁净度级别的洁净室(区)之间的人员及物料出入，应有防止交叉污染的措施。 厂房必要时应有防尘及捕尘设施。GMP相关预防微生物污染措施42与药品直接接触的设备表面应光洁、平整、易清洗或消毒、耐腐蚀，不与药品发生化学变化或吸附药品。设备所用的润滑剂、冷却剂等不得对药品或容器造成污染。洁净工作服的质地应光滑、不产生静电、不脱落纤维和颗粒性物质