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文档简介
1、关于技术与质谱仪的使用第一张,PPT共三十四页,创作于2022年6月MALDI技术离子化技术:MALDIMatrix-Assisted Laser Desorption/ IonizationMALDI技术的原理样品与基质,在样品靶表面形成的共结晶薄膜激光照射,基质吸收能量基质把能量传递给样品分子,将电荷转移给样品,样品电离。第二张,PPT共三十四页,创作于2022年6月MALDI技术中基质的作用基质的作用把样品分子彼此分开(基质:样品=10,000:1),削弱样品分子之间的相互作用。基质吸收激光的能量,并将部分能量传递给样品。帮助样品离子化。第三张,PPT共三十四页,创作于2022年6月常用
2、基质及选择基质样品HCCA蛋白,多肽,糖,小分子,极性聚合物DHB蛋白,多肽,糖,小分子,极性聚合物HPA核苷酸Dithranol非极性聚合物IAA非极性聚合物第四张,PPT共三十四页,创作于2022年6月LaserSample TargetDetectorClockTime-of-FlightMolecular MassTOF的基本原理 第五张,PPT共三十四页,创作于2022年6月Enabling Life Science Tools Based on Mass SpectrometryTMEk = zqU Ek = 1/2mV2V2 = 2qU z/m = 2qU / (m/z)第六张,
3、PPT共三十四页,创作于2022年6月triggerdiode laservariableattenuator250 l/sturbo250 l/sturbo3.4 m reflector1.8 m linearMALDI TOF MS的构成检测器1:线性模式检测器2:反射模式第七张,PPT共三十四页,创作于2022年6月反射模式下TOF的分辨率高于线性模式第八张,PPT共三十四页,创作于2022年6月线性模式和反射模式优缺点所选方法(即flexcontrol methods)反射模式(linear)一般测试分子量小于4000的样品分辨率高,单同位素清晰准确线性模式(reflection)一般
4、测试大分子量样品(M4000)分辨率低,得到是平均分子量的质荷比第九张,PPT共三十四页,创作于2022年6月样品和标准品点靶标准品的作用:对仪器参数进行校准,使样品测试的质量准确度更高。注意:样品和标准品,必须点靶方式一致,所选基质一样。第十张,PPT共三十四页,创作于2022年6月内标法和外标法内标法: 样品与标准品点在同一靶点。优点:样品和标准点条件一致,质量准确度更高,质荷比可准确到0.02。缺点:标准品干扰样品出峰。外标法: 样品与标准品点在不同靶点。优点:无标准品干扰缺点:质量准确度低,质荷比准确到0.1。第十一张,PPT共三十四页,创作于2022年6月MALDI常用点靶方法干滴法
5、(Dried Droplet)样品和基质充分混合,点样样品靶上。注意:以HCCA和DHB为基质的样品,一般用干滴法点靶薄层法先将基质点于靶上,带基质结晶后,再把样品溶液点于基质的层上。注意:以HPA为基质的样品,都要采用薄层法。第十二张,PPT共三十四页,创作于2022年6月点样方法: Dried Dropletmatrixanalytesample solutionsample depositionAnalyte dispersed throughout matrix crystalsEnabling Life Science Tools Based on Mass Spectrometry
6、TM第十三张,PPT共三十四页,创作于2022年6月MALDI-TOF质谱仪的使用标准品点靶;样品点靶;进样品靶;质谱测试和图谱保存:flexcontrol软件;图谱读取和分析:flexanalysis软件第十四张,PPT共三十四页,创作于2022年6月点靶注意事项移液枪的使用取不同试剂,需要更换一次性枪头。点靶注意事项防止基质污染,防止标准品污染,防止样品靶污染,防止试剂污染防止样品靶跌落点靶时,枪头请勿接触样品靶(悬点)点完靶,请在靶表相应位置标明样品名第十五张,PPT共三十四页,创作于2022年6月进靶和退靶点击仪器右侧面的绿色按钮(load and eject按钮)。在flexCont
7、rol软件里,点击carrier后面按钮进退靶按钮第十六张,PPT共三十四页,创作于2022年6月质谱测试和图谱保存质谱测试的软件是:flexcontrol打开软件选择方法校准仪器的参数(与ESI-MS(LCQ)差别)扫描样品保存数据上传数据至大型仪器管理平台文件系统第十七张,PPT共三十四页,创作于2022年6月打开桌面Flexcontrol软件双击打开flexcontrol第十八张,PPT共三十四页,创作于2022年6月选择方法选择方法第十九张,PPT共三十四页,创作于2022年6月方法的选择根据分子量大小选择相应的方法方法路径:D:methodsflexcontrolmethodsusu
8、al method一般样品正离子都能出峰;对于正离子模式不出峰的样品,改换为负离子模式的方法扫描。更换方法时,对以前的方法不要保存。第二十张,PPT共三十四页,创作于2022年6月选择方法L: 线性模式R: 反射模式P: 正离子模式N: 负离子模式PepMix: 多肽混合物,适合范围700-4000 DaProtMix: 蛋白混合物,适合范围5000 20000 DaClinProt: 多肽/蛋白化合物,适合范围1000 20000Da66kDa: 大分子蛋白,适合范围20000-100000 DaProteomics_HPC: 高精度校正,适合范围700-4000 DaRP_lowmolec
9、ular_HPC高精度校准,适合范围100-1000Da第二十一张,PPT共三十四页,创作于2022年6月2. 反射模式;正离子;高精度;700-4000Da;与RP_PepMix.par差别不大1. 反射模式;正离子;700-4000Da3. 线性模式;正离子;700-4000Da4. 反射模式;负离子;700-4000Da5. 线性模式;正离子;5000-20000Da6. 线性模式;负离子;700-4000Da7. 反射模式;正离子;100-1000第二十二张,PPT共三十四页,创作于2022年6月Flexcontrol的按钮检测范围,可微调扫描区放大表峰显示单次扫描显示叠加图第二十三张
10、,PPT共三十四页,创作于2022年6月保存数据的按钮第二十四张,PPT共三十四页,创作于2022年6月校准仪器的参数第二十五张,PPT共三十四页,创作于2022年6月扫描标准品时,出峰太弱,多叠加几次。点击Calibrate,选中叠加图,点击自动校准(automatic assign),点击apply,即完成自动校正。如果自动校准通过不了,进行手动校准。注意:必须有三个以上的点匹配上,匹配点越多越好第二十六张,PPT共三十四页,创作于2022年6月手动校准第二十七张,PPT共三十四页,创作于2022年6月扫描样品和保存数据找到样品点的位置扫描样品,叠加并保存数据 注意:数据要保存到课题文件夹
11、内,例如:刘育课题组数据保存到D:dataLiuyu201106第二十八张,PPT共三十四页,创作于2022年6月在flexAnalysis打开保存的路径样品的名字保存的是叠加图FlexAnalysis方法,可不选择第二十九张,PPT共三十四页,创作于2022年6月数据的上传找到所保存的数据文件右键点击发送到压缩文件夹(zipped)打开大型仪器管理系统网站()文件系统,上传压缩后的数据文件夹。第三十张,PPT共三十四页,创作于2022年6月第三十一张,PPT共三十四页,创作于2022年6月MALDI质谱图解析常见离子峰:正电荷模式:加质子峰;加合碱金属峰(加Na+峰;加K+峰);减e-峰负电荷模式:加e-峰,加Cl-多出现单电荷分子离子峰,双电荷和多电荷峰弱或几乎不出现。第三十二张,P
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