凝胶柱使用手册

1、凝胶柱使用手册TSK-GELSW系列填充柱是用于水溶液的高性能凝胶柱。该色谱柱被研发用于分析和分离各种可溶于水的物质包括蛋白质，酶以及核酸预先测量在柱子安置好了之后，测量就开始了。应当避免以上提到的溶液的进样或者过快的压力增长，这些情况可能会导致柱效下降。防止流速的波动这种类型的柱子很容易受到流速波动的影响，所以最好能使用没有压力波动的泵，如果必须使用有压力波动的泵，那么必须在泵的出口处必须连接一个脉冲节气门以防波动，并且节气门应非常耐受腐蚀。每日常规使用如果柱子每天都要被使用的话，不需要将柱子从设备中移出，缓冲液可以在柱子中过夜。短时间保存如果柱子在几天只能会被使用，那么从设备中将柱子移出，

2、用螺帽将两头密封。长期保存当柱子在一段时间内不会被使用时，那么以上的保存方法就不会很理想，一旦微生物或者腐蚀性缓冲液侵蚀将会导致柱子损耗。对于长时间的保存，用水溶液或者是含有0.05%的叠氮化钠的缓冲液按照0.5ml/min的流速作溶液置换。柱子的保存环境按以上的短期保存和长期保存方法来保存将色谱柱保存在4C到30C的环境中，不要放在低于四度的环境或者让柱中溶剂结冰的环境。柱子应避免阳光的照射。柱子英放在远离腐蚀性气体的环境。溶剂溶剂的置换SW类型的柱子内部充满着含有0.05%叠氮化钠和0.1mol/L的硫酸钠的0.1mol/LPH6.7的磷酸盐缓冲液。选择一种适当的溶液以一种适当的流速(0.

3、5ml/min)置换出原有溶液。如果频繁的跟换置换溶液会加速柱效的下降，尽量使用同种溶液置换。溶剂的选择在溶剂的选择时应充分考虑到柱子的稳定性，样品的溶解性，样品与凝胶之间的反应，这些因素都很重要。温度范围当硅酸盐被用于基本材料时，SW类型的柱子在高PH的环境中会溶解。由于凝胶的稳定性以及钢柱的原因，所以低PH的溶液应被限制使用。因此溶液的PH范围应当维持在2.5到7.5之间。含盐的水溶液和缓冲液溶液SW类型的柱子在含盐的水溶液中和缓冲液溶液中很稳定，对凝胶分离色谱柱来说，分离机制是基于分子量的大小，与样品和凝胶的关系不大。由于大部分的样品中都含有离子，所以当使用含盐的水溶液或者缓冲液作溶液时

4、可以在测量执行的时屏蔽样品和凝胶之间离子的影响。含盐的水溶液中盐的浓度应控制在0.5mol/L以下，盐浓度的增加会导致溶液黏度的增大，温度的改变也会导致盐的析出，还有钢的柱子应该尽可能的避免卤化物，会降低柱子的寿命。有机溶剂SW类型的柱子不仅仅适用于水溶液中，也可以用于含有有机溶剂的水溶液，比如甲醇和乙腈以及它们的水溶液。然而，溶液的黏度时决定流速的很重要的因素。当以有机溶剂作为流动相分离样品时，首先应该用蒸馏水置换，然后用含有机溶剂的水溶液置换。当改变含有及溶剂的溶液时，应当降低流速，而且尽可能的变换梯度。有机溶剂的快速改变会导致柱效下降，尽量避免在有机溶剂中加入盐的话，这样的话会导致盐的析

5、出。增溶剂和蛋白质变性剂SW类型的柱子可以用于含有增溶剂或者蛋白质变性剂的水溶液中，比如十二烷基磺酸钠，氢氯化胍和尿素。上述物质在测定蛋白质在水溶液中溶解度很小的样品很有效果。当然这种流动相比标准的水溶液会更加缩短柱子的寿命。避免柱子刚在一个系统中被使用，很快又被另一个系统使用。测量不同蛋白质时，应谨慎选择柱子的孔径大小，因为分子的大小比实际的天然状态要大。不溶解引起的问题由于溶液中某些不溶解性物质导致的问题，比如压力的上升（柱子的过滤器堵塞）或者峰形分裂（柱塞板缝隙被堵）。为避免这种问题的发生，我们的溶液应该过滤。通过0.45um的除菌过滤器过滤溶液或者在进泵的前端安装一个在线过滤器。脱气在

6、溶液进行更换的时候会产生气泡，特别是转换到含有有机溶剂的溶液中。那么溶液应该进行脱气处理避免气泡产生影响。流速的选择选择流速的时候诸多因素比如分辨率，分析时间，柱子寿命等都应该考虑进去。高流速会导致寿命的缩短；低流速可以提高分离效果，特别是对含有大量蛋白质一类的高分子物质样品。更多的是较低的流速会延长柱子的寿命和减少柱子出现裂缝。G2000SWxl型号的柱子应该在0.51.0ml流速下工作，一定不能高于1.2ml。溶液的流速当使用黏度很低的溶液时，流速可以提高，但如果溶液黏度过大，那么应该使用较低的流速。当使用含有酒精的溶液，胍或者尿素的说溶液时，流速应该降低。工作温度SW系列的色谱柱在分析或

7、者分离时工作温度应控制在10c30C,当低于10C时，使用一个较低的流速以保护柱子。储藏温度在室温下保存即可，不能低于4C以防溶液结冰。样品的准备将样品溶解在溶液中。样品溶解之后用0.45um的滤膜进行过滤，尽管我们肉眼看不到溶液中的东西，但不溶解的东西还是可能存在的。调节样品溶液的PH,含盐的浓度以及有机溶剂的比例。当进样的体积很大的时候，样品溶液进入色谱柱与流动相混合会析出引起问题。柱效通过分析的图谱计算出柱子的理论塔板数以及不对称因子来判断柱子的柱效。死体积当死体积和进样量增大的话，理论塔板数会减少。保护柱使用保护柱的话，由于材料的特殊性，会导致其对样品的吸附从而降低柱效和理论塔板数。但

8、是保护柱对样品进入色谱柱之前有一个预平衡时间，对样品溶液起到了一定的过滤作用。对于应付以上问题，应尽可能多的使用保护柱。总而言之，保护柱应用于阻止各种问题发生。保护柱安置的效果阻止吸附性物质进入色谱柱，阻止不溶解的物质进入柱子，防止由于压力波动导致柱子出现裂缝。保护柱的更换由于保护柱有吸附强吸附性物质的作用，那么它会有一个使用寿命，要在保护柱坏点之前更换。更换的频率不能规定出来，因为这取决于不同的原因（分离或分析的结果，样品的性质，样品的量，溶液，流速等）。在使用期间，当压力上升时应清洗保护柱末端或凝胶的内容物，压力上升时应及时更换保护柱。一般来讲，当测量参数有变化时，应立即更换保护柱。问题处

9、理当我们使用凝胶柱时，按照以下操作很多问题都是可以解决的。但时某些问题比如柱子寿命缩短，强吸附性物质，样品的气泡，干枯的凝胶，结冰的溶液等发生了就不能恢复。末端的清洗当压力上升时，或者流速降低时，改变流向冲洗。如果堵塞物不能被冲走，那么硬更换新的末端。更换末端将旧的末端移除装上新的末端，要小心不能让柱中的凝胶流出。当凝胶不小心流出的话应该安装相同柱子的型号的凝胶然后排走气泡。柱头的裂缝裂缝可能由于压力快速的上升，使用超过限度的流速，溶液的改变等，裂缝的出现会降低理论塔板数（会降低70%以上的理论塔板数，使峰形拖尾）。当以上现象出现的话，把柱子的末端移除，如果发现柱头有空洞的话，用TSK凝胶填充柱子。在这种情况下，特别对于玻璃柱子，末端必须在压力2.9的压力N下用扳手转动。这些高级的问题应该可以恢复的，如果是在未知的环境下通过以上程序不能恢复的话，就换一个新的柱子。清洗柱子经过重复长时间的使用之后，清洗时间是经常不时的改变的。在这种情况下，用不同的溶液清