动物实验的基本技术和方法

1、动物实验的基本技术和方法 统一的，标准的操作方法和实验技术，是动物实验结果准确可靠、动物实验顺利进行的重要保证。一、动物抓取和固定二、动物编号、标记方法三、动物被毛的去除方法四、实验动物的麻醉方法五、实验动物的给药方法六、实验动物体液采集方法*七、裸鼠肿瘤接种八、小鼠解剖 一、 动物的抓取和固定 动物的抓取注意点动物的抓取是顺利进行各项动物实验操作最基本的一个环节。应熟练掌握各种实验动物的抓取方法，用轻柔的手法把对动物施加的恐惧和痛苦降到最低。 一般来说动物是不会主动攻击人的1、小鼠的抓取1、小鼠的抓取2、大鼠的抓取2、大鼠的抓取视频一： 小鼠的灌胃及腹腔给药的徒手固定方法视频二：大鼠的灌胃及

2、腹腔给药的徒手固定方法3.豚鼠的抓取4. 兔子的抓取和固定最好戴人造革围裙和袖套，以免爪子抓伤。采用正确的抓取方法。可采用兔固定器固定进行实验操作，或一人抓取固定，一人实验操作。兔子的抓取兔子的固定兔子的固定视频三： 实验兔抓取和固定方法5. 犬抓取和固定实验用犬有专用的比格犬和农村收购来的随意来源犬。犬是通人性的，随意来源犬购入后，饲养人员和实验人员要经常亲近它们，使它放松对你的警惕，容易直接抓取它们。不要轻易使用长柄铁钳，钳伤造成的伤害会使它对你更加恐惧，影响以后实验的进行。抓取后用绳子将嘴绑住。二、动物编号、标记方法适用需要个体识别的实验短期标记染色法：适合白色被毛的动物，如小鼠、大鼠、

3、豚鼠、兔等。 黄色：常用3-5%苦味酸溶液 红色：常用0.5%中性红溶液 咖啡色: 2%硝酸银溶液 黑色：煤焦油酒精溶液 优点：简单、易识别 缺点：长期易退色；不能编大号码。染色法规则2.长期标记：（1） 剪耳（打孔）法：啮齿类小动物（2） 剪趾法：小型动物（3）耳牌法：适用于犬、羊、牛等大家畜，不适用于猴等有爪动物。（4）黔刺法：适用于白化或白毛大动物耳朵标记。（5）电子芯片植入法：适用于所有动物，可重复使用。动物编号永久性标记剪耳（打孔）法示意图（背侧）左耳（十位数）右耳（个位数）402090圆 孔 为1、2、3单缺口为4、5、6双缺口为7、8、973由内侧到外侧100剪耳打孔法举例24号

4、93号多少号?106号别对动物动粗！三、动物被毛的去除方法1. 剪毛法：用弯头剪逆毛方向剪 适用于各种实验动物2. 拔毛法：常用于兔的耳缘静脉注射3. 剃毛法：专用剃毛刀。 适用于大动物。为对动物刺激或可能造成损伤最小的方法。4. 脱毛法：脱毛剂常用脱毛剂配方 配方1：硫化钠8g溶于100ml水中。 配方2：硫化钠:肥皂粉:淀粉的比例为 3:1:7，再加水调成糊状。 配方3：硫化钠10g和生石灰15g溶于 100ml水中。 配方1和2适用于家兔和啮齿类动物的脱毛，配方3适合给犬脱毛。脱毛后用清水将脱毛区清洗干净。 四、实验动物的麻醉方法 对实验动物进行麻醉的目的是：1）消除实验过程中对动物引起

5、的痛苦和不适。2）确保实验动物的安全和动物实验的顺利进行。3）是动物实验伦理的一个重要方面。应结合实验目的、实验动物种类、日龄及健康状况等因素进行综合考虑，决定选用的麻醉剂和麻醉方法。麻醉方法有全身麻醉和局部麻醉两种。在实验动物的麻醉中绝大多数采用全身麻醉。全身麻醉简称全麻，全麻是指麻醉药通过呼吸道吸入、静脉、肌肉、腹腔注射等途径，进入实验动物体内，使其产生短时间意识丧失、痛觉消失、肌肉松弛和反射抑制等中枢神经系统抑制现象。当麻醉药从体内排出或在体内代谢破坏后，实验动物逐渐清醒，不留后遗症。全麻有吸入麻醉法和注射麻醉法两种途径，吸入麻醉法用挥发性麻醉药，注射麻醉法用非挥发性麻醉药。 （1）吸入

6、麻醉法常用药物为乙醚、异氟烷等。吸入麻醉法有开放吸入和气管内插管吸入两种方法。动物实验大都采用开放吸入法开放吸入：适用于啮齿类小动物，可用乙醚、氯仿、异氟烷等。小动物吸入麻醉机已研制成功。气管内插管：适用于犬、猴、羊等大动物，异氟烷是最常用的麻醉药。吸入麻醉的优点： 麻醉平稳、安全可靠、 停止吸入后很快苏醒缺点： 需要一定的仪器设备。（2）注射麻醉法 注射麻醉法是使用非挥发性麻醉药进行全麻的方法。在动物实验中比较常用。 常用麻醉药： 戊巴比妥钠 硫喷妥钠 氯氨酮 水合氯醛 乌拉坦 大动物：静脉注射或腹腔注射 啮齿类动物：腹腔注射* 巴比妥类：种类很多，有巴比妥钠，戊巴比妥钠，硫喷妥钠，苯巴比妥

7、钠等。适用于各种动物。 特点；安全范围广，毒性小，麻醉潜伏期短，麻醉维持时间长。可腹腔或静脉给药。机理：阻断神经冲动传递到大脑。 副作用：过量使用可导致呼吸肌麻痹而死亡，同时抑制末梢循环，导致血压降低，并影响基础代谢，导致体温降低。* 氯胺酮：常用其盐酸盐。 特点：麻醉潜伏期短，麻醉维持期仅10-20min，麻醉浅，安全性高，可重复给药。 机制：阻断大脑联络途径。 副作用：兴奋心血管系统，使血压升高，心率加快，偶尔引起呕吐。* 水合氯醛：作用特点和巴比妥类相似。但安全范围小，麻醉剂量和中毒剂量接近，对皮肤和黏膜有较强刺激。*局麻药物普鲁卡因：是无刺激性的局麻药物。 特点：麻醉速度快，注射后13

8、分钟就可产生麻醉。可以维持3045分钟。对皮肤和黏膜穿透力很弱，需要注射给药才能产生局麻效果。它可以使血管舒张，易被吸收入血液而失去效果。在其溶液中加入肾上腺素（每100ml加入0.1%肾上腺素0.20.5ml）可以使麻醉时间延长12小时。利多卡因：效力和穿透力比普鲁卡因强的卡因：化学结构和普鲁卡因类似，效力和穿透力比普鲁卡因强。实验动物麻醉阶段应注意的事项禁食：麻醉之前应禁食。准确称体重：作为计算麻醉剂用量的依据。正确选择麻醉剂：不同麻醉药对动物的作用是不同的。戊巴比妥钠、硫贲妥钠等能抑制心肌收缩力，使肌肉松弛，氯胺酮则相反。大动物犬、猴、羊等麻醉前半小时应注射麻醉前给药如阿托品和苯巴比妥钠

9、。静脉注射麻醉药时必须缓慢，边注射边观察动物的意识、角膜反射、肌肉紧张性和对疼痛的反应，达到麻醉要求时应停止注射。6.大动物手术时应配备麻醉师，在麻醉过程中密切观察动物的反应，如血压、脉搏、呼吸和体温，及时调节麻醉药剂量，保证手术顺利进行。7. 注意手术室的室温：动物在麻醉期间、手术后至苏醒期体温会下降，应注意手术室的温度。8. 注意术后护理。9.准备好补充麻醉剂和解药。麻醉意外的抢救 原因： 麻醉药速度过快、剂量过大、麻醉过深 后果： 中枢神经系统抑制导致呼吸系统、循环系统功能障碍，引起呼吸、心跳停止。 抢救方法： 要针对具体情况，采取对症治疗的措施。 1.立即停止供给麻醉剂 2.人工呼吸，

10、吸氧 3.苏醒剂(解药) 4.呼吸中枢兴奋剂如可拉明等和心脏和呼吸兴奋剂，如0.1%肾上腺素适量作心内或静脉注射，静脉滴注50%葡萄糖溶液等。 尼可刹米：适用于各种原因的中枢性呼吸衰竭，每次0.25g0.5g，静脉注射。戊四氮：对抗巴比妥类和氯丙嗪过量导致的呼吸衰竭，每次0.1g，静脉注射或心内注射美解眠：对抗巴比妥类和水合氯醛中毒，每次50mg，静脉缓慢注射碳酸氢钠：纠正急性酸中毒。可注射肾上腺素后立即静脉注射5%碳酸氢钠12ml/kg五、实验动物的给药方法一、经口给药法二、注射法三、其它途径给药方法呼吸道给药皮肤给药脊髓腔内给药脑内给药直肠内给药关节腔内给药经口给药拌入饲料或饮水中自由摄取

11、 优点：省人力 缺点：因个体差异，摄入量不等灌胃 优点：能准确定量 缺点：可能给动物造成一定的不适 难度：需熟练掌握技术大小鼠灌胃注意点用灌胃针。从嘴角处插入，到达咽部后改变灌胃针的方向，使其与食管的走向一致，然后顺利插入。成年大鼠由于体型较大，不易保定。办法： 1）一人保定、灌胃 2）两人协作灌胃：一人抓取大鼠后，将大鼠尾部按在自己的胸部，达到固定尾部的目的，另一人灌胃。视频四：小鼠灌胃给药方法视频五： 大鼠灌胃给药方法 兔灌胃法 采用两人操作法。 操作者用左手拇指和中指挤压家兔两颊，将下颌挤开使兔被动张口，右手将开口器从一侧口角插入口腔并固定，用泡在水中的14号细导尿管，经开口器的孔插入，

12、向前推进约15cm，可达胃内，确认泡在水中的导管另一端没有冒气泡，说明没有误入气管，即可注入药液。灌胃量为每只每次80-150mL。 1. 口服给药 用右手将口服药片夹在拇指和食指之间，把左手放在犬的圈套上，用拇指和食指压着犬的上唇，用力使犬的头向后仰，继而把右手中指放在犬的下颌向下压。当犬的嘴张大时，快速把药片放在舌根隆起的部位，合上犬的嘴，维持头后仰姿势，右手在咽喉部轻轻按摩。借助犬本能的吞咽动作服下药片。2. 灌胃给药 在给犬灌胃时，将犬固定于特制的固定架上，实验时将木制开口器从一侧口角放入犬的口腔，用左手或绳子固定，右手持12号胃管由开口器的小圆孔向咽后壁方向不断插入，导管另一端置于一

13、杯清水中，若连续出现气泡，说明插入呼吸道，应立即拔出胃管，重新操作。如无气泡，说明没有插入气管，插至约20cm，即可到达胃内。犬的灌药量为每只每次200-500mL。犬的经口给药法各种动物一次灌胃能耐受的最大容积动物种类体重（g）最大容积（ml）动物种类体重（g）最大容积（ml）小鼠20-240.5豚鼠250-3004-525-300.83006.0301.0兔2kg-2.4kg100大鼠100-1993.02.5kg-3.5kg150200-2494-53.5kg200250-3006.0猫2.5kg-3.0kg50-803008.03.0kg100-050犬10kg-15kg200-500

14、注射法 注射法有皮下注射(s.c)、腹腔注射(i.p)、静脉注射(i.v)、肌肉注射(i.m)以及皮内注射(i.d)、脑内注射等。药物吸收速度：静脉注射腹腔注射肌肉注射皮下注射。皮内注射常用于观察皮肤血管通透性变化或反应，如过敏试验脑内注射常用于病毒学接种静脉注射大小鼠尾静脉注射大鼠、沙鼠、豚鼠后肢浅背侧足中静脉注射兔耳缘静脉注射4. 犬前肢头静脉和后肢小隐静脉注射尾静脉视频六：小鼠尾静脉注射给药方法视频七： 兔耳缘静脉注射给药方法其它途径给药方法呼吸道给药：皮肤给药：脊髓腔内给药：4. 脑内给药：5. 直肠内给药：6. 关节腔内给药：（一）采血法大小鼠剪尾尾静脉切割大鼠后肢足中静脉采血眼眶后

15、静脉丛采血摘眼球采血腋窝动静脉采血心脏采血腹主动脉采血六、实验动物体液的采集方法大小鼠心脏采血眼眶后静脉从采血尾静脉切割采血小鼠摘眼球取血颈静脉采血视频八：小鼠眼底静脉丛采血方法视频九： 大鼠心脏采血方法一个动物到底能采多少血，取决于动物的体重、定期活体采血还是处死采血。动物的全血量为动物体重的8%左右，其中约30%储藏在全身毛细血管内。全血中约50%是有形成分。据此可测算处死后的采血量和血清量。采血为全血量的10%时，两个星期恢复；采血为全血量的30%时，将危及生命。大、小鼠不同采血方法的比较采血方法采血量（ml）应 用小鼠大鼠断头采血法0.2-1.01.5-5.0大批动物集中处死采血，速度

16、快摘眼球采血法0.2-1.51.0-8.0大批动物集中采血，若一次少量采，可反复几次尾静脉切割采血法0.01-0.050.1-0.5用于用血量少的检验，如血常规，能长时期反复多次采血眼眶后静脉采血法0.02-0.10.2-1.0能反复多次采血腋窝动静脉采血法0.5-1.51.0-5.0需处死动物，麻醉后采血心脏采血法-2.0-8.0腹主动脉采血法-5.0-10.0需处死动物，麻醉后采血豚鼠 心脏采血兔兔耳缘静脉采血兔颈动脉采血犬犬前肢头静脉采血犬后肢外侧小隐静脉采血各种实验动物活体安全采血量和致死采血量动物种类最大安全采血量（ml）最小致死采血量（ml）小鼠0.30.5大鼠25豚鼠510兔10

17、40犬50300猴1560常用抗凝剂肝素：抑制凝血酶活力，阻止血小板凝集。纯品肝素1mg125U，10U20U抗1ml血凝集，但通常应用23倍剂量。 用法：可配成1%肝素溶液，用时取0.1ml于试管内，100烘干，每管可抗凝510ml血。或用1%肝素溶液湿润采血注射器。 肝素可改变蛋白质等电点，当用盐析法分离蛋白作分类测定时，不可用肝素抗凝。枸橼酸钠：使凝血必需的钙离子失活。常用35%水溶液，碱性较强。草酸盐合剂：草酸铵1.2g，草酸钾0.8g，福尔马林1.0ml，加蒸馏水至100ml。使凝血必需的钙离子失活。每毫升血加草酸盐合剂0.1ml。氟化钠：每毫升血加6mg。（二）采尿法反射排尿法代谢笼法导尿法膀胱穿刺法*七、裸鼠肿瘤接种（视频十、十一）八、小鼠解剖（视频十二）第九章思考题（1）1.动物的被毛常常会影响实验，被毛的去处方法常用 法、拔毛法、剪毛法和 法。其中对动物