沙门菌属和志贺菌属检验

1、沙门菌属和志贺菌属检验创作：欧阳史时间:2021.02. 10步骤和方法形态观察革兰染色：沙门菌属细菌为革兰阴性细长杆菌。，忐贺菌属细菌为革兰阴性杆菌，散在分布。观察鞭E染色标木片镜下可见沙门菌属细菌具有周腹毛志贺菌属细菌无礙毛。菌落观察沙门菌属：将木菌接种在SS. MAC平板上经35*孵育1824h。由干木菌不分解乳糖并产碱， 故在SS和MAC平板上形成无色、半透明、光滑湿润.凸起的小菌落.产生H2S的菌落可在SS平板上形 成中心带黑褐色的小菌落。志贺菌属:将本菌接种在SS和MAC平板上经35C孵育1824h由于志贺菌不分解乳糖,宋 内吉贺菌某些菌株可迟缓发酵乳糖.故其在SS平扳和MAC平板

2、上形成无色透明的.中等大小的菌落。 除宋内志贺菌菌落外均为光滑型菌落。3生化反应氧化酶试验：方法同大肠埃希菌。沙门菌屈和忐贺菌属细菌氣化酶试验均为阴性。初步试验鉴定：挑取志 贺菌和沙门菌的讥个菌落分别接种在KIA MIU和硝酸盐培养基上，经359孵育1824h,同时做触酶试 验。其结果见表2-4.表2-4，忐贺菌属和沙门菌属的基木生化反应IA KIu MIT触酶讎原斜面底层产 气SH2动力酶菌 贺 志KA/+1-/-+KAEE+副菌KA+L-+最终鉴定：须做全面生化反应和血淸学试验。血淸学试验(1)吉贺菌属的分型鉴定：凡生化反应符合，忐贺菌屈者均需做血清学鉴定。取1环，忐贺菌四种女价血 淸于戦

3、玻片一端，再取少许待测菌与之混合.同时在玻片另一端取待测菌与生理盐水混合对照。结果：对 照呈均匀混浊，待检菌与吉贺菌四种参价血淸混合后，数分钟内出现肉眼可见的颗粒状凝集物即为阳性。 继之用A、B. C、D群最常见的的价血淸凝集定种。结果判断.解釋和报告：分离培养未见可疑菌落或经鉴定不符合总贺菌属鉴定依据者可报告“未分离到总贺菌属细菌二经分离鉴定后符合鉴定依据者，可报告分离出XX也贺菌S若进一步做多种生化反应及因子血淸分型 后，可报告：“分离出xx志贺菌X型二(2)沙门菌属的分型鉴定：如果生化反应及形态学检査疑为沙门菌，可选用沙门菌的女价诊断血清进 行玻片凝集。首先选用AF组笋价0“诊断血淸做玻

4、片凝集试验。在试验时应以生理盐水作对照。血清 凝集试验在5lOmin内不出现凝集者可确定为阴性但若生化反应比较典型，应考虑选用Vi凝集试验。 若凝集,则用无菌生理盐水将菌洗下.制成浓厚的悬液,加热1009、30min,再与AF组多价9”诊断 血淸做凝集试验。若与AF组笋价CT血淸发生凝集，应再与沙门菌柬价因子血淸分别做玻片凝集试 验，以确定该菌株属干哪一组。一般先选用木地区检出率最高菌型的相应血淸做玻片凝集反应。若已确定哪一沙门菌种后.再分别先用H因子血淸检査第I相抗原，然后检查第II相抗原，最后确 定该菌种属于哪一型沙门菌。结果判断、解释和报告：分离培养未发现可疑菌落或经鉴定不符合沙门菌屈细

5、菌鉴定依据者.可报告“未分离出沙门菌二生化反应符合沙门菌.玻片凝集试验结果阳性，可初步报告为：分离到xx沙门菌二或群沙门菌二肥达试验原理：用已知的伤寒沙门菌0、H抗原甲.乙型副伤寒沙门菌的H抗原(PA、PB)与肠热症患 者血淸做定虽试管凝集试验，以出现凝集的最商血清稀释度为效价测定相应抗体含虽用以辅助诊 断肠热症。试验方法：为单管稀释法。准备4排小试管.每排7支并标记，另取中号试管1支，加生理盐水 38ml及被检血清02ml,混匀，即为h 20稀释，总址为4mh然后取出2ml按每管0.5ml分别放人 各排小试管中的第1支试管中。再于上述中号试管内加生理盐水2ml混匀此种血清即为h 40稀释吸

6、取此稀释度血清2ml,按每管0.5ml分别加到各排小试管中的第2支试管中。以此类推连续稀释到各排小 试管第6支试管为止，第7支小试管只加入0.5ml生理盐水做阴性对照。然后按表25操作。表2-5血清学试验(肥达试验)方法试验管(每管0. 5ml稀释血清)对照管1：201：401： 801:1601:3201： 640生理盐水0抗原0. 50.50.50.50.50. 50.5H抗原0. 50. 50.50.50.50. 50. 5PA抗原0. 50.50.50.50. 50. 50.5PB抗原0. 50.50.50.50.50. 50.5血清最终稀 释1:401:801:1601:3201:6

7、401:1280振荡片刻，宜干45C水浴箱中2h或37C水浴箱4h取出習室温或放冰箱中过夜次日观察并记 录结果。结果判断解释和报告：先观察对照管，正确结果应无凝集反应，再分别与对照管比较观察试管 凝集情况。根据液体透明度和凝集块多少.以4+、3+. 2+、+. 符号记录。4+：上清液完全澄清细菌凝集块全部沉干管底。3+：上淸液澄淸度达75%.大部分细菌凝集成块沉于管底。2+：上淸液澄淸度达50%,约50%细菌凝集成块沉干管底。+：上清液体混浊，管底仅有少部分细菌凝集成块，上清液澄淸度仅有25%。-：液体均匀昆浊.无凝集块。以呈现2+凝集现彖的血淸最商稀释倍数作为该血清的凝集效价。一般认为.伤寒沙门菌0抗体凝 集价在1： 80以上，H抗体在1： 160以上，甲、乙、丙型副伤寒沙门菌凝集价在1： 80以上才有诊断意 义。注意事项1.加入诊断菌液时，由对照管开始往前，每管各加O5mlo2结果观察时不翌振荡试管.先观察，必要时再轻摇试管使凝块从管底升起.最后按液体的淸浊，凝 块的大小进行记录.对照管（不