TCR细胞通路研究进展

1、tcr信号通路研究新进展t细胞相关免疫疗法在近期的癌症研究中大放异彩，“主力部队”是car-t和tcr-t这两种技术。相对于car-t细胞疗法，tcr-t疗法的关注度相对低些，但是这两种细胞疗法都属于利用患者自身的t淋巴细胞治疗癌症的前沿基因疗法。研究发现，在实体瘤治疗方面,tcr疗法可能比car疗法更有优势。t细胞在免疫系统中具有重要作用，可以攻击病原体和肿瘤细胞。t细胞受体（tcr）能识别不同的广泛亲和力的配体，参与激活多种生理过程tcr细胞疗法定制功能性tcr，具有最佳的抗原识别特性，利用人体免疫系统来对抗癌症。那么，这种疗法的分子机制是什么呢？与之相关的TcR信号通路的分子调控机制有怎

2、样的研究进展呢？本文将对这些问题进行综合性讲述。TCR蛋白结构oQLTAM5recognitionI图一TcR复合物结构t细胞作为适应性免疫应答的主要组成部分，其抗原识别受体结构以被证实，克隆获得的tcr由a-链和B-链构成异源二聚体。tcr异源二聚体主要与CD3的多个信号转导亚基结合，如图所示，CD3Y、CD35和CD3&异源二聚体以及CD3Z同源二聚体。在CD3的不同亚基含有免疫受体酪氨酸的活化基序-ITAM,但是每个亚基的数量不同，CD3Y、CD35和CD3&分别含有一个，而CD3Z含有三个串联的ITAM,这样就使的每个T细胞受体可以产生10个ITAM。酪氨酸磷酸化的ITAM可以使TCR

3、与胞内信号转导通路发生偶联，向TCR募集含有SH2结构域的蛋白质，如酪氨酸激酶ZAP70。但是现在还没有解决为什么TCR复合物包含这么多的信号转导亚基和ITAM的问题，主要有两种假说，一种是CD3分子或单独的ITAM可能通过募集独特的效应分子，执行不同的信号转导功能；另一种是多个ITAM的主要功能是放大TCR信号。TCR识别与抗原递呈细胞（APC）呈递的可以结合MHC分子（pMHC）的肽。单独的TCR能够识别具有广泛亲和力的不同配体（自身肽和外来肽）。TCR参与触发不同的功能输出。在胸腺中，pMHC与TCR信号结合强度决定了细胞发育与分化过程。当结合力在最小值到最大值之间时，促进胸腺细胞的存活

4、，并转化成CD4+CD8-或CD4-CD8+的成熟阶段；如果TCR与pMHC太低或太高，细胞会发生凋亡。在外围，自体pMHC对TCR的低亲和力结合提供了维持初始T细胞所必需的强直性存活信号，并且还可以促进其与外来抗原高亲和力遭遇时的完全激活。THYMUS(1TCFIDP4+&+liindiny+LOWwfflnityPosOivesectionCta!tlMHGMHCH=IGHatitnliyNdbindingApoploaisEgrvs$j占toperipheryEpripfisMudul：aEn-r!iChcniokineOthrGproteiniripkdTCEtpHinAdhelium

5、muleculexEtira-elluhrmatrixpreieinNeuroen-iJetcnn=efavioii图二TCR结合强度对胸腺细胞的影响TCR信号强度对于产生合适的应答T细胞至关重要。TCR信号传导应答指导CD4+T细胞分化成功能不同的T辅助细胞亚群，对特定T细胞亚群（如调节性T细胞）也起着关键作用。TCR细胞的强度和持续时间与记忆T细胞分化相关，也是诱导T细胞无能或耗竭的基本决定因素。TCR信号受到生化及分子机制的调控，导致信号放大或衰减。调控TCR的机制复杂多样，不过可以分为三个基本层面：早期信号转导效应分子（如关键激酶和磷酸酶的调节）；信号分子发育阶段（特异性表达调控）；以

6、及TCR信号强度的动态调控。TCR信号通路概述AFCElIIKTMZAP?DZiMr70PK匚0GAC/CDC42RfliS/RAFCalcinturin)AjctinpoLymerizdiiortiGenetFanaoiptinnMHCclarwIIl-.-jPicn.Cewkl/erkS)/MIEKEiZ-.WKKS&.z-CellnienibraneCRACcNinneLCD4farCD8JpMHCTCRNuderrlMiYibrdniTi=i=?i=lt=t=|UN)iuDAG_rt_SGRP?)图二：TCR信号通路概述TCR与抗原呈递细胞(APC)上表达的MHC复合物结合，进而激活T

7、CR信号通路。SRC家族蛋白酪氨酸激酶LCK与CD4和CD8共同受体的胞质结构域结合，并分别通过CD8或CD4与MHCI类或MHCII类复合物的共结合募集至TCR。LCK磷酸化，使蛋白酪氨酸激酶ZAP70结合到CD3链中。T细胞活化衔接因子LAT被磷酸化，激活T细胞，募集多个衔接因子和效应分子，形成LAT信号传导体。LAT相关效应分子的活化导致信号通过三种主要信号通路进行传导：钙调蛋白、MAPK和NF-kB信号通路。钙调蛋白信号传导会活化T细胞核因子(NFAT)发生核移位；MAPK信号传导导致肌动蛋白聚合以及转录因子FOS、JUN、AP-1的激活；NF-kB信号传导使REL和NF-kB转录因子

8、核移位；这些转录因子协同作用引起T细胞增殖、迁移、细胞因子产生和效应功能oTCR还通常与其共同受体CD28或细胞因子受体(如PI3K、TCR信号通路关键节点的调节主要以LCK、ZAP70和LAT三个关键节点为中心对TCR信号通路进行调节。LCK节点的调节5HJPX7Akcredligandbidding时知斗pt192InsKliveLCKZAP?OPhnphnryliitionA-ctiveLCKPtitHphorylffiiQft|DpliOiipharylIrCn.teredIngandbindingInhibitionkinaseactlvli.DephospharfetioiPrim

9、edLCKT5H3/八-JPhDphary|?itionPhaphoryhtiun、.FRKGlkinEurln、OephosphorylaicloAPTPN2.PTPNI2,一PTPN22andXJ5P22图五：LCK关键节点的调节最近的研究发现，LCK定位和构象变化是TCR信号转导的重要决定因素。LCK激酶活性受两种关键调节性酪氨酸Y394和Y505的磷酸化和去磷酸化控制（图五）。Y394位于LCK激酶环中，自磷酸化可以稳定催化结构域的活性构象。另一方面，蛋白酪氨酸激酶CSK对羧基末端Y505残基的磷酸化，促进Y505与SH2结构域的分子相互作用，稳定了使催化结构域失活的折叠构型。跨膜酪氨

10、酸磷酸酶CD45使pY505和pY394去磷酸化，因此，CD45可能潜在地调节控制LCK活性。研究发现，有多种细胞质磷酸酶可以使Y394去磷酸化，抑制LCK活性，比如PTPN2、PTPN12、PTPN22、SHP1、DUSP22等。近期的研究还报道一个意外的LCK调节剂：钙调磷酸酶。钙调磷酸酶能促进NFAT的激活和核转运，募集到LCK后使S59去磷酸化。钙调磷酸酶抑制ZAP70、LAT和SLP76的磷酸化，但不影响LCK的磷酸化（Y394），表明LCK的磷酸化（S59）不直接调节LCK的催化活性，而是改变其连接到ZAP70和下游信号通路oS59的去磷酸化对LFAK淋巴细胞功能相关抗原1）介导的

11、ICAM1响应TCR黏附是必需的，确定S59磷酸化在控制LCK配体相互作用和细胞黏附中的作用。蛋白质组学研究发现LCK的负反馈调节主要受ZAP70影响。抑制ZAP70催化活性导致LCK（Y394）磷酸化增加,Y192磷酸化降低。Y192磷酸化导致LCK对CD3Z链的ITAM磷酸化减少，改变SH2结构域对特定配体的特异性，抑制LCK催化活性并减弱下游信号激活。UnactiveInerdomalinBZAPJ0STS!,S752and5HP1(?)*IIAMhindingKiruiEdloindinaccessibilhvPhosphorylationLCKPrimedZAP70SIS,ST52a

12、nd5HP1(?)ActiveZAPTOLCK.aridZAP70ST.S1,STS2andSHP1mReducedITAMbind-ngIDehosphoryLatioriZAP70节点的调节图六：ZAP70关键节点的调节ZAP70与TCR的ITAM结合，通过磷酸化Y493而激活，而位于SH2和激酶结构域之间的Y315和Y319磷酸化促进ZAP70从无活性到有活性的转变,是激酶活性所必需的。有研究发现Y315和Y319的磷酸化不影响ZAP70激酶活性，而是稳定ZAP70-ITAM结合并增加其在TCR的存在时间。这种稳定的复合物导致Y126磷酸化，而磷酸化的Y126可以与ATP结合，降低ZAP

13、70对磷酸化的ITAM的亲和力,使活性ZAP70释放到质膜中，可以磷酸化一些下游反应物如LAToZAP70和其它几种TCR信号效应物的稳定受到泛素介导的翻译后修饰的调控。新研究结果显示,ZAP70催化活性受NRDP1和0TUD7B调节NRDP1对ZAP70泛素化修饰招募STS1和STS2，使ZAP70去磷酸化并失活。另一研究显示，去泛素化酶0TUD7B通过阻止泛素介导的STS1和STS2的募集，可以促进或延长ZAP70活化。LAT节点调节LAT与TCR结合后形成微团簇。这种微团簇的形成是有顺序的，可以影响TCR信号传导GRB2和SOS1形成复合物，促进LAT在细胞膜上寡聚化，促进ERK-MAP

14、K激酶信号转导。LAT微团簇保留ZAP70,但不保留CD45,有助于信号分子在细胞膜上分离，从而促进TCR信号传导。通过分析表达突变的SOS1的转基因小鼠，证明SOS1介导的LAT微团簇是正常T细胞发育所需的。同样的研究表明LAT寡聚化对于PLCY1的磷酸化和活化也是必需的。TCR信号调节新机制如上所示，最近在分子水平上鉴定了几种调节TCR信号传导的新机制。在胸腺细胞发育期间，TCR与MHC相互作用，激活信号传导。在双阳性胸腺细胞中，CD4+和CD8+T细胞完全激活，尽管TCR表面表达较低，但双阳性胸腺细胞对pMHC作用比成熟T细胞敏感。GolgicomplexMHC也狛II（圳間HI：chs

15、sl|iSelf-pMHCIzp?oriPNJiPPTPZ22、MHCcidshll匸D4orCMTHEMIS、TESPA1、VGSC、TCR、TRAF3IP3、PKD2、PKD3和miR-181a在CD4+CD8+双阳性胸腺细胞中强阳性表达，在成熟T细胞中下调。在TCR参与之后，THEMIS与GRB2相互作用与SHP1起被募集到LAT接头。SHP1活性在胸腺细胞中也受到PKD2和PKD3的抑制。VGSC是在胸腺细胞阳性选择期间维持Ca2+稳态的关键钠通道。TESPA1是一种蛋白质衔接子，能够结合并激活IP3R1,通过内质网控制Ca2+的释放TRAF3IP3向高尔基复合体募集MAPK/ERK激

16、酶（MEK）,促进其通过BRAF激活并导致细胞外信号调节激酶（ERK）激活。除了一些特殊的磷酸酶（如CD45和SHP2），大多数在细胞信号传导中主要起抑制作用，直接或间接抑制蛋白激酶活性。miR-181a抑制DUSP5、DUSP6和PTPN22的翻译，增强TCR信号传导。T细胞中的TCR信号也诱导PTPN22，通过miR-181a调节，导致胸腺细胞中PTPN22表达低和成熟T细胞中PTPN22表达高，在抗原刺激后T细胞中进一步诱导PTPN22。PTPN22在人类中的突变与自身免疫性疾病的风险增加相关。最近研究结果表明，PTPN22的关键功能是抑制TCR信号传导，从而防止自体pMHC或弱激动剂完

17、全激活和扩增T细胞。TCR信号转导主要通过SHP1的去磷酸化来抑制。THEMIS在最近的研究中被鉴定为胸腺细胞阳性选择所需的T系特异性蛋白质。THEMIS缺陷的胸腺细胞中，SHP1磷酸酶活性增加，表明THEMIS抑制SHP1。THEMIS缺陷型胸腺细胞的发育阻滞通过缺失SHP1获得。另有研究发现，PKD2和PKD3通过磷酸化S557,抑制SHP1对TCR信号的影响。PKD2和PKD3的T细胞特异性缺失，胸腺细胞发育阻滞。总之，这些研究表明THEMIS、PKD2和PKD3的调节胸腺细胞发育，促进其阳性选择，抑制SHP1磷酸酶活性。CD5在TCR信号通路中具有重要的协调功能。CD5募集CBL和CB

18、L-B至细胞膜。响应TCR刺激,促进泛素化。CD5遗传缺失影响单一的TCR胸腺细胞的阳性选择，对多克隆胸腺细胞的阳性选择影响不显著。TCR-pMHC相互作用的亲和力及亚活化稳态TCR信号的强度决定CD5表达程度，推测CD5提供负反馈调节TCR信号传导，促进T细胞存活，不会触发自体配体的细胞激活。CD6与CD5在结构上相似，CD6表达缺失的小鼠外周T细胞对TCR刺激增强，与CD5相似，对TCR信号传导具有抑制作用。总结在本文，我们总结了近期在TCR信号通路关键点新的分子调控机制的研究。TCR参与激活的信号传导涉及多个复杂的信号通路，利用细胞成像、流式细胞技术和单细胞分析极大的促进TCR信号及其控制机制的进一步阐述，尤其是蛋白质组学技术的发展，为未被检测到的潜在调控机制提供了可能，有望揭示T细胞活化、发育和功能等新理论。参考文献：GuillaumeGaud,RenaudLesourneandPaulE.Love.RegulatorymechanismsinTcellreceptorsignaling.Natureimmunology,1-13(2018).Philipsen,L.etal.Denovophosphorylationandconformationalo