饲料中磷的测定

1、 饲料中总磷含量与植酸磷含量的测定一、饲料中总磷含量的测定(钼黄比色法)适用范围本方法适用于配合饲料、浓缩饲料、预混合饲料和单一饲料中总磷的测定。测定原理将试样中有机物破坏，使磷元素游离出来，在酸性溶液中，用钒钼酸铵处理，生成黄色的络合物(NH4)3PQNHVQ16Mo磷-钒-钼酸复合体)，在波长400nm下进行比色测定。此法测得结果为总磷量，其中包括动物难以吸收利用的植酸磷。仪器和设备实验室用样品粉碎机或研钵。分析筛：孔径0.42mm(40目)。分析天平：感量0.0001g。分光光度计：有10mm比色池，可在400nm下进行比色测定。(5)高温炉：可控炉温在(55020)C。坩埚：瓷质。容量

2、瓶：50，100，1000mL刻度移液管：1.0，2.0，3.0，5.0，10mL凯氏烧瓶：250或500mL。可调温电炉：1000W试剂及配制盐酸(GB622，化学纯)溶液，1+1水溶液(V+V浓硝酸(GB626)化学纯。高氯酸(GB623，分析纯)，70%72%。钒钼酸铵显色试剂：称取偏钒酸铵(HG3-941，分析纯)1.25g，加浓硝酸250mL;另取钼酸铵（GB657,分析纯）25g，加蒸馏水400mL,加热溶解，冷却后，将此溶液倒入上溶液，且加蒸馏水定容至1000mL避光保存。如生成沉淀则不能使用。（5）磷标准溶液：将磷酸二氢钾在105C干燥1h,在干燥器中冷却后称0.2195g,溶

3、解于蒸馏水中，转入1000mL容量瓶中，加浓硝酸3mL用蒸馏水稀释到刻度，摇匀，即成50卩g/mL的磷标准溶液。试样的选取和制备取有代表性试样用四分法缩减至200g,粉碎至40目，装入密封容器中，防止试样成分的变化或变质。测定步骤（1）试样的分解。干法（不适用于含磷酸氢钙的饲料）：称取试样25g于坩埚中（准确至0.0002g），在电炉上低温炭化至无烟为止，再将其放入高温炉于（55020）C下灼烧3h（或测灰分后继续进行），取出冷却，在坩埚中加入盐酸溶液（1+1,V+V10mL和浓硝酸数滴，小心煮沸约10min。将此溶液转入100mL容量瓶中，并用热蒸馏水洗涤坩埚及漏斗中滤纸，冷却至室温后，定容

4、，摇匀，为试样分解液。湿法：称取试样0.55g于凯氏烧瓶中（准确至0.0002g）。加入浓硝酸30mL,小心加热煮沸，至二氧化氮黄烟逸尽，冷却后加入高氯酸10mL,继续加热煮沸至溶液无色，不得蒸干（危险！）。冷却后加蒸馏水50mL,并煮沸驱逐二氧化氮，冷却后转入100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，为试样分解液。盐酸溶解法（适用于微量元素预混料）：称取试样0.21g（精确至0.0002g）于100mL烧杯中，缓慢加入盐酸溶液（1+1,V+V10mL使其全部溶解，冷却后转入100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，为试样分解液。（2）标准曲线的绘制。准确移取磷标准溶液0,1.0,2.0,

5、5.0,10.0,15.0mL于50mL容量瓶中，各加入钒钼酸铵显色试剂10mL,用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置10min。以0mL溶液为参比，用10mm比色池，在400nm波长下，用分光光度计测定各溶液的吸光度。以50mL溶液中磷含量(卩g)为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。试样的测定。准确移取试样分解液110mL(含磷量50750卩g)于50mL容量瓶中，加入钒钼酸铵显色试剂10mL用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置10min以上。以0mL溶液为参比，用10mm比色池，在400nm波长下，用分光光度计测定各溶液的吸光度。用标谁曲线查得试样分解液的含磷量。测定结果计算计算公式。样品中总磷质量

6、分数按式(7-4)计算w(p)=6a10m7-4式中：m为试样质量，g；V为试样分解液总体积，mL；V1为比色测定时所移取试样分解液体积，mL；a为由标准曲线查得试样分解液含磷量；10-6为从卩g转化为g的系数。所得结果应精确到两位小数。允许差。每个试样称取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。含磷量在0.5%以上(含0.5%)，允许相对偏差3%;含磷量在0.5%以下,允许相对偏差10%。注意事项比色时，待测液磷含量不宜过浓，最好控制在1mL含磷0.5mg以下待测液在加入试液后应静置10min，再进行比色，但不能静置过久。二、饲料中植酸磷的测定(三氯乙酸法，TCA法)适用范围本方法适用于配

7、合饲料、浓缩饲料和单一饲料中植酸磷的测定。测定原理用30g/L三氯乙酸作浸提液提取植酸盐，然后加入铁盐使植酸盐生成植酸铁沉淀，与氢氧化钠反应转化为可溶性植酸钠和棕色氢氧化铁沉淀，用钼黄法直接测出植酸磷含量。仪器和设备实验室用样品粉碎机或研钵。分析筛：孔径0.42mm(40目)。分析天平：感量O.OOOIg。分光光度计：有10mm比色池，可在400nm下进行比色测定。容量瓶：50，100mL移液管：10，50mL。吸量管：5，10mL卧式振荡机。凯氏烧瓶：100mL具塞三角瓶：250mL离心机。具塞离心管：50mL试剂及配制30g/L三氯乙酸溶液，称取3g三氯乙酸(分析纯)，加水溶解至100mL

8、混匀。三氯化铁溶液(1mL相当于2mg铁):称取三氯化铁(FeCI36HO)0.97g，用30g/L的三氯乙酸溶液溶解至100mL混匀。1.5mol/L氢氧化钠溶液，称取氢氧化钠(分析纯)60g，加水溶解至1000mL混匀。浓硝酸(分析纯)：比重1.4，煮沸起去游离二氧化氮(NQ)，使其成为无色。硝酸溶液1+1，(V+V);硝酸溶液1+3，(V+V)。均用上述浓硝酸(4)配制。混合酸硝酸+高氯酸=2+1,（V+V），按比例配制。（7）显色剂。100g/L钼酸铵溶液：称取分析纯钼酸铵10g,加入少量水，加热至5060C,使溶解。冷却后，再用水稀释至100mL,混匀。3g/L偏钼酸铵溶液：称取分析

9、纯偏钼酸铵0.3g，溶于50mL水中，再加50mL硝酸溶液（1+3，V+V）溶解，混匀。使用时将溶液徐徐倒入溶液中，应边加边搅拌，然后再加入已赶尽二氧化氮的浓硝酸18mL混匀。（8）标准磷溶液（1mL相当于100卩g磷）。准确称取105110C烘干12h的优级纯磷酸二氢钾0.4349g，用水溶解后移入1000mL容量瓶中，并用水稀释至刻度，摇匀。试样选取与制备同饲料中总磷量测定方法。测定步骤（1）磷标准曲线的绘制。准确吸取1mL=100卩g磷的标准溶液0，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，7.0mL，分别盛入50mL容量瓶中，用水稀释至20mL左右，各加硝酸溶液（1+1，

10、V+V）4mL显色剂10mL，再用水稀释至刻度，混匀。此时系列浓度为每50mL中分别含磷量为：0，50，100，200，300，400，500，600，700卩g,静置20min，在分光光度计上在波长400nm处，用10mntt色池，测定其吸光度。最后，以50mL中磷含量（卩g）为横坐标，用相应的吸光度为纵坐标，绘制出磷的标准曲线。（2）试样的测定。称取饲料样本36g（含植酸磷在530mg范围内）于干操的250mL具塞三角瓶中，准确加入30g/L三氯乙酸溶液50mL,浸泡2h，机械振荡浸提30min,离心（或用干漏斗、干滤纸、干烧杯进行过滤）。准确吸取上层清液10mL于40mL离心管中，迅速加

11、入三氯化铁溶液（1mL相当于2mgFe2+）4mL,置于沸水浴中加热45min,冷却后，3000r/min离心10min,除去上层清液，加入30g/L三氯乙酸溶液2025mL进行洗涤（沉淀必须搅散）,水浴加热煮沸10min,冷却后3000r/min离心10min，除去上层清液，如此重复2次，再用水洗涤I次。洗涤后的沉淀加入35mL水及1.5mol/L氢氧化钠溶液3mL摇匀，用水稀释至30mL左右，置沸水中煮沸30min，趁热用中速滤纸过滤，滤液用100mL容量瓶盛接，再用热水6070mL,分数次洗涤沉淀。滤液经冷却至室温后，稀释至刻度，准确吸取510mL滤液（含植酸磷0.10.4mg）于100

12、mL凯氏烧瓶中，加入硝酸和高氯酸混合酸3mL于电炉上低温消化至冒白烟，使余0.5mL左右溶液为止（切忌蒸干），冷却后用30mL水，分数次洗入50mL容量瓶中，加入硝酸溶液（1+I,V+V）3mL,显色剂10mL,用水稀释至刻度，混匀，静置20min后，在分光光度计上在波长400nm处则定吸光值。查对磷标准曲线，并计算植酸磷的含量。测定结果计算试样中植酸磷质量分数按公式（7-5）计算。a103w（植酸磷）=V17-5m式中：a为由磷标准曲线查得的含磷量俱数（此数是比色时50mL容量瓶中所含磷的数）,V为试样分解液总体积，mL;V为比色用吸取的试样消化液体积，mL；m为试样质量，g。允许差每个试样

13、称取2个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。注意事项（1）试样粉碎粒度要求不小于40目。颗粒太粗造成试样浸提不完全，使分析结果波动太大，重现性差。在离心法洗涤植酸铁沉淀过程中，注意不要损失铁沉淀物。显色时的硝酸酸度要求在5%8%(V+V)。显色时温度不能低于15C，否则显色缓慢。三、饲料级磷酸氢钙中磷含量的测定(HG2636-2000)测定原理在酸性介质中，试样溶液中的磷酸根全部与加入的喹钼柠酮形成磷钼酸喹啉沉淀，过滤、干燥、称量，计算出磷含量。仪器和设备玻璃砂坩埚：孔径515卩m电烘箱：温度能控制在(1805)C。试剂及配制(1)盐酸溶液：1十1，V十V。硝酸溶液：1十1，V十V。喹钼柠酮

14、溶液的制备。称取70g钼酸钠溶解于150mL水中。称取60g柠檬酸溶解于150mL水和85mL硝酸中。在搅拌的情况下将溶液倒入溶液中。在100mL水中加入35mL硝酸和5mL喹啉。将溶液倒入溶液中，放置24h后，用坩埚式过滤器过滤，再加入280mL丙酮，用水稀释至I000mL，混匀，并贮存于聚乙烯瓶中。测定步骤(1)试样溶液的制备。称取1g试样(精确至0.0002g)，置于250mL容量瓶中，加10mL盐酸溶液，用水稀释至刻度，摇匀。此溶液为试样溶液A,用于磷含量的测定。空白溶液的制备。除不加试样外，其他加入的试剂量与试样溶液的制备完全相同，并与试样同时进行同样处理的千样/J打（3）测定。用移

15、液管移取的20mL试样溶液和空白溶液分别置于250mL烧杯中，加入10mL硝酸溶液，加水至总体积约I100mL，i加热煮沸r5min，加入50mL喹上表面皿，保温30s（在加入试剂和加热过程中，不得使用明火，钼柠酮溶液，盖I样本的秉集不得搅拌，以免凝结成块.），冷却。在冷却过程中搅拌,吕门4次，用预先在（1805）C下烘干至恒重的玻璃砂坩埚抽滤。先将上层清液过滤,用倾泻法洗涤沉淀舉.讦价总依质蚤所乩姿求桦本蜉処対迫帖性JJ也外锐利特吐具右充分6次，每次用水约i|3Qmb，最后将沉淀移入玻璃砂坩埚中过滤，再用水洗涤沉淀3次，将玻璃砂坩埚连同沉淀置于电烘箱中从温度稳定计时，在（1805）C下干齡杯矗粒血的采岸燥45min，取出稍冷后,5.测定结果计算器中冷于贮右骸号式不岡，乂分为就装.魏及仓載二+K所迪用的腰枠58文fl聯官咸iWft.可魏是有槽的单恃或双昔.具有锐利胸尖竭试样中磷的质量分数按式（7-6）计算。族装的廉料府布n#认笹过程的不时所（山溶云道、供谀幣等张）电样.w戸）母豊001400250町用探样取样.76该理兔因饲料廉料不匀向用灯阴啓m打20式中：m为试样溶液生成磷钼酸喹啉沉淀的质量；g；m为空白溶液生成磷钼方茯星：大惟的探棒.从跆高孙簿Uni和中同