鸡胚流感疫苗的制备课件

1、 项目7 鸡胚流感疫苗的制备 解决的问题：我们为什么要制备鸡胚流感疫苗？我们什么设备和物料制备鸡胚流感 疫苗？我们怎么制备鸡胚流感疫苗？我们怎么证明制备的鸡胚流感疫苗 质量合格,可以应用于临床？还有什么其他相关知识需要拓展?问题一我们为什么要制备鸡胚流感疫苗 ？项目7鸡胚流感疫苗的制备 接收到工作任务 你所在的工作组是生物制品公司的一个研发助理或生产一线员工，你们接到的任务就是在12月20日要研发或生产一种鸡胚流感疫苗，并需要协助质量管理部门,确保制备的疫苗是合格品,可应用于临床。项目背景甲型h1n1流感疫苗主要应用专门用于预防甲型H1N1流感 病毒（此前也曾被称为猪流感）的疫苗。 主要操作单

2、批疫苗生产需经历病毒接 种、病毒培养、病毒灭活、纯化、裂解 、配比、分包装及批签发等步骤。 主要剂型 鼻腔喷雾剂、肌肉注射剂项目7鸡胚流感疫苗的制备 病毒性疫苗基本概念定义： 用病毒制成，进入人体后，使机体自身产生抵抗相应病毒能力的生物制品，称为病毒类疫苗。项目7鸡胚流感疫苗的制备 培养的组织来源和制造方法动物培养疫苗基因重组疫苗鸡胚培养疫苗细胞培养疫苗理化性质灭活与减毒活疫苗液体与冻干全病毒、裂解、亚单位 佐剂与无佐剂疫苗用途狂犬疫苗流行性感冒疫苗脊髓灰质炎疫苗乙肝疫苗问题二我们什么设备和物料制备鸡胚流感疫苗？设备和材料 设备或材料数量设备或材料数量流感弱毒毒种1支（共用）10日龄鸡胚2个（

3、每组）孵化器1个（共用）照蛋箱1个（共用）蛋架1个（共用）打孔器1套（每组）注射器（1mL)3支（每组）镊子3个（每组）碘酊1瓶（每组）酒精棉若干（每组）酒精灯3个（每组）剪刀3把（每组）眼科镊3把（每组）灭菌疫苗瓶5个（每组）灭菌吸管10支（每组）固体石蜡1瓶（共用）菌种 培养基 项目7鸡胚流感疫苗的制备 器具 问题三我们怎么制备鸡胚流感疫苗 ？鸡胚接收前处理 打开孵化机设定温度37.8，湿度为70%。第一步 鸡胚的接收拆盘 观察鸡胚是否干净，有无裂痕，把合格的摆放到空盘上，气室向上。照检 在照检灯下，将照蛋器罩压在鸡胚气室上，沿气室边缘画弧线。项目7鸡胚流感疫苗的制备 消毒 浸泡消毒槽内1

4、-2min，捞出放在桌子上。再由消毒人员摆放到蛋车上，推入37.8的孵化器中。鸡胚的消毒 将10日龄合格胚从孵化器中运到层流罩的入蛋口前，用除菌的0.1%新洁尔灭均匀喷洒消毒后，用5%碘酒消毒鸡蛋的接种点，接种点在划线上方0.1至0.2处。消毒后转入层流罩交给打孔人员。第二步 鸡胚的接种打孔 用打孔器在每个鸡胚接种点处打一个小孔，以可以看清楚为准，打孔的顺序为由上到下，由左到右，打孔时力度要适中，如有打破将其放在事先准备好的空盘上。项目7鸡胚流感疫苗的制备 接种 将连续流注射器的针头垂直插向已打好的接种孔内（即鸡胚尿囊内）。第二步 鸡胚的接种项目7鸡胚流感疫苗的制备 接种后将卵壳外的钻孔用石蜡

5、封好，置于37.8孵化器内孵化。处理立瓶 安装时把5升立瓶口包装纸松开，打开管道灭菌袋，取出管道，一手拿管道，一手掀开5升立瓶包装纸，把管道放进立瓶中按紧塞子。第三步 鸡胚液的收获灭菌 用0.1%新洁尔灭均匀喷洒鸡胚表面,再用75%酒精喷洒表面，由入蛋口交给层流罩内负责削壳人员。项目7鸡胚流感疫苗的制备 削壳 用大镊子上部三分之一处敲击鸡胚壳气室部位。沿气室边缘敲出一道长缝后，用镊子尖沿气室边缘剥开，注意不要将气室弄破，剥下的蛋壳让其掉入大平皿中。收获 第一步，连接管道：取一单根管道的进气口，一端连接真空泵，另一端连接空气过滤滤器，空气过滤滤器的另一端连接管道的进气口，用止血钳卡住出液口，打开

6、收获头处的包装，开始收获。第三步 鸡胚液的收获 第二步，收获：先握住小镊子插进尿囊腔中，松开小镊子把尿囊膜划开一个小口，把收获头插进去吸干尿囊液。项目7鸡胚流感疫苗的制备 第三步，收获的顺序是由下到上、由左到右逐一收取，收到3.6L刻度后换取另一瓶，安装同上 物品处理 将连有硅胶管道的传液盖、滤器、止血钳、西林瓶、西林瓶塞、蠕动泵、电子天平，所需灭活剂等放入层流罩内。第四步 鸡胚收获液的灭活灭活 将连有硅胶管道的传液盖安装在盛灭活剂的桶上，盛1M柠檬酸三钠溶液的桶与蠕动泵连接，桶放在电子天平上。盛1：200福尔马林溶液的桶与计量泵连接，用量筒进行校准泵的速度调节为280ml左右/分钟。项目7鸡

7、胚流感疫苗的制备 第五步 无菌分装观看Flash问题四我们怎么证明制备的鸡胚流感疫苗质量合格,可以应用于临床？质量检查项目7鸡胚流感疫苗的制备 疫苗的安全性 疫苗的有效性 问题五还有什么其他相关知识需要拓展?拓展知识一、细菌性疫苗各种细菌图片项目7鸡胚流感疫苗的制备 鼠疫杆菌霍乱弧菌炭疽杆菌拓展知识一、细菌性疫苗项目8鸡胚流感疫苗的制备 工艺流程及环境区域划分质量控制要点生产管理要点其他疫苗举例项目8鸡胚流感疫苗的制备 项目8鸡胚流感疫苗的制备 项目8鸡胚流感疫苗的制备 项目7鸡胚流感疫苗的制备 （一）工艺流程及环境区域划分 菌种筛选* 种子批的建立和检定* 菌种接种* A B C原液合并 杀

8、菌 原液收获* G F E半成品配制# 分装# I扩大培养D原液保存H包装检定* 100级或局部100级 10 000级区 100 000级区# 生物安全柜 为局部100级 返回包装项目7鸡胚流感疫苗的制备 （二）质量控制要点-工序A 菌种筛选* 种子批的建立和检定* 菌种接种* A B C原液合并 杀菌 原液收获* G F E半成品配制# 分装# I扩大培养D原液保存H包装检定* 100级或局部100级 10 000级区 100 000级区# 生物安全柜 为局部100级 工序A：菌种与菌种鉴定用的诊断血清应经过国家食品药品监督管理局的批准，由国家的药品检定机构或国家指定单位分发。项目7鸡胚流

9、感疫苗的制备 参照书上26页图3-1 菌种筛选* 种子批的建立和检定* 菌种接种* A B C原液合并 杀菌 原液收获* G F E半成品配制# 分装# I扩大培养D原液保存H包装检定* 100级或局部100级 10 000级区 100 000级区# 生物安全柜 为局部100级 工序B：项目7鸡胚流感疫苗的制备 （二）质量控制要点-工序B工序B: （1）应建立原始种子批：记录种子的历史、来源及生物学特性。 （2）种子批制度建立： （传代、扩增） （传代、扩增）原始种子批 主代种子批 工作种子批要求：各种子批间要保持：生物学特性一致。 （3）种子批检定：培养特性、血清学特征、毒力试验、免疫力试验

10、、抗原性试验项目7鸡胚流感疫苗的制备 （二）质量控制要点-工序B 菌种筛选* 种子批的建立和检定* 菌种接种* A B C原液合并 杀菌 原液收获* G F E半成品配制# 分装# I扩大培养D原液保存H包装检定* 100级或局部100级 10 000级区 100 000级区# 生物安全柜 为局部100级 工序C：微生物鉴别，包括菌型、纯度及其他特殊鉴别试验项目7鸡胚流感疫苗的制备 （二）质量控制要点-工序C 菌种筛选* 种子批的建立和检定* 菌种接种* A B C原液合并 杀菌 原液收获* G F E半成品配制# 分装# I扩大培养D原液保存H包装检定* 100级或局部100级 10 000

11、级区 100 000级区# 生物安全柜 为局部100级 工序D：微生物纯度检查，浓度检查项目7鸡胚流感疫苗的制备 （二）质量控制要点-工序D 菌种筛选* 种子批的建立和检定* 菌种接种* A B C原液合并 杀菌 原液收获* G F E半成品配制# 分装# I扩大培养D原液保存H包装检定* 100级或局部100级 10 000级区 100 000级区# 生物安全柜 为局部100级 工序E：微生物纯度检查项目8鸡胚流感疫苗的制备 （二）质量控制要点-工序E项目7鸡胚流感疫苗的制备 （二）质量控制要点-工序E 菌种筛选* 种子批的建立和检定* 菌种接种* A B C原液合并 杀菌 原液收获* G

12、F E半成品配制# 分装# I扩大培养D原液保存H包装检定* 100级或局部100级 10 000级区 100 000级区# 生物安全柜 为局部100级 工序F：无菌试验项目7鸡胚流感疫苗的制备 （二）质量控制要点-工序F 菌种筛选* 种子批的建立和检定* 菌种接种* A B C原液合并 杀菌 原液收获* G F E半成品配制# 分装# I扩大培养D原液保存H包装检定* 100级或局部100级 10 000级区 100 000级区# 生物安全柜 为局部100级 工序G：原液检查，包括镜检查杂菌、效价或活性测定、无菌试验、浓度测定、免疫力试验。项目7鸡胚流感疫苗的制备 （二）质量控制要点-工序G

13、 菌种筛选* 种子批的建立和检定* 菌种接种* A B C原液合并 杀菌 原液收获* G F E半成品配制# 分装# I扩大培养D原液保存H包装检定* 100级或局部100级 10 000级区 100 000级区# 生物安全柜 为局部100级 工序H：原液保存在2-8 。项目7鸡胚流感疫苗的制备 （二）质量控制要点-工序H 菌种筛选* 种子批的建立和检定* 菌种接种* A B C原液合并 杀菌 原液收获* G F E半成品配制# 分装# I扩大培养D原液保存H包装检定* 100级或局部100级 10 000级区 100 000级区# 生物安全柜 为局部100级 工序I：半成品及成品的坚定按有关

14、标准进行 。项目7鸡胚流感疫苗的制备 （二）质量控制要点-工序I返回（1）符合现行的中华人民共和国药典、 中国生物制品主要原辅材料质量标准（2）用到的化学试剂必须为化学纯以上。 （3）对供应商要有审查请问：对原料药的供应商我们要审查什么？对提供直接接触药品的包装材料的供应商我们要审查什么？对提供包装材料印刷的供应商我们要审查什么？ 项目7鸡胚流感疫苗的制备 （三）生产管理要点-原料及辅料应严格清洗，经高压灭菌方可使用。桌式高压灭菌锅 全自动蒸汽高压灭菌锅 项目7鸡胚流感疫苗的制备 （三）生产管理要点-生产用器具问题: 生产及检定用的动物应符合： 级？ 答：清洁级问题：请回忆清洁级动物的定义和简

15、写？项目7鸡胚流感疫苗的制备 （三）生产管理要点生产及检定用动物（1）疫苗的菌株应具有典型的形态、培养和生化特性。（2）菌株的培养和接种要在专门的设备中进行，严格操作和防止污染。（3）冷干菌种在开启时，应作全面鉴定。项目7鸡胚流感疫苗的制备 （三）生产管理要点-制造疫苗的菌株生产用的培养基应适合所培养细菌的生长，严禁在培养基中添加对人体有害的物质。项目8鸡胚流感疫苗的制备 （三）生产管理要点-生产用培养基项目7鸡胚流感疫苗的制备 （三）生产管理要点-生产用培养基（1）收集的原液应作纯菌试验，合格后杀灭细菌，杀菌后通过试验检验是否有杂菌生长。试验如下：取样接种不含琼脂的硫乙醇酸盐培养基及普通琼脂

16、斜面各一管，至37培养5天，如有活菌，可加倍量复试一次，如有杂菌生长应废弃。（2）无菌试验合格的合并原液 添加防腐剂为：适量苯酚或其他防腐剂 储存温度：2-8 储存时间：采集之日至用于疫苗稀释不得少于4个月。项目7鸡胚流感疫苗的制备 （三）生产管理要点-原液返回1、简介：流行性脑脊髓膜炎：分为A、B、C三种流脑，A群流脑为我国主要致病菌群，B、C群流脑为欧美主要致病菌群。A群脑膜炎球菌多糖灭活疫苗主要预防：A群脑膜炎球菌引起的流行性脑脊髓膜炎。（四）细菌疫苗举例A群脑膜炎球菌多糖灭活疫苗2、历史：1944年Kabat开始用流脑多糖抗原进行志愿者试验。1969年Gotschlich提取流脑A群多

17、糖抗原接种人群免疫力可达数年。1967年开始研究-197年我国制备出符合WHO的A群流脑多糖疫苗，一次注射反应轻微，免疫效果良好，流行病学效果达90%以上。（四）细菌疫苗举例A群脑膜炎球菌多糖灭活疫苗流脑疫苗生产用菌株 启开菌种、扩大培养Co2罐培养18-20h转种于50 000ml发酵罐，同期培养3-4h种入500 000ml发酵罐、通气培养6-8h培养物用甲醛或加热杀菌，上清加入Cetavlom，离心去上清，收集沉淀复合物加等量2mol/LCaCl2，使多糖解离加25%乙醇，提取多糖抗原原液用无水乙醇及丙酮洗涤各2次，收集沉淀多糖用冷酚提取2-3次，透析，再用无水乙醇及丙酮洗涤各2次，进行

18、多糖精制加入乳糖作保护剂，冷冻干燥，使每人份含多糖抗原30g、乳糖2.5mg（四）细菌疫苗举例A群脑膜炎球菌多糖灭活疫苗（四）细菌疫苗举例A群脑膜炎球菌多糖灭活疫苗返回拓展知识二、病毒性疫苗项目7鸡胚流感疫苗的制备 工艺流程及环境区域划分质量控制要点生产管理要点其他疫苗举例 原代细胞的制备或传代细胞复苏毒种筛选* 种子批的建立和检定* 毒种接种* A B 筛选细胞C （灭活疫苗） 病毒原液 病毒灭活 病毒的收获过滤# （减毒活疫苗） G F E半成品配制# 分装# I 扩大细胞培养D病毒原液保存H包装检定* 100级或局部100级 10 000级区 100 000级区# 生物安全柜 为局部10

19、0级 （一）工艺流程及环境区域划分项目7鸡胚流感疫苗的制备 返回 原代细胞的制备或传代细胞复苏毒种筛选* 种子批的建立和检定* 毒种接种* A B 筛选细胞C （灭活疫苗） 病毒原液 病毒灭活 病毒的收获过滤# （减毒活疫苗） G F E半成品配制# 分装# I 扩大细胞培养D病毒原液保存H包装检定* 100级或局部100级 10 000级区 100 000级区# 生物安全柜 为局部100级 工序A：菌种与菌种鉴定用的诊断血清应经过国家食品药品监督管理局的批准，由国家的药品检定机构或国家指定单位分发。项目7鸡胚流感疫苗的制备 （二）质量控制要点-工序A 原代细胞的制备或传代细胞复苏毒种筛选*

20、种子批的建立和检定* 毒种接种* A B 筛选细胞C （灭活疫苗） 病毒原液 病毒灭活 病毒的收获过滤# （减毒活疫苗） G F E半成品配制# 分装# I 扩大细胞培养D病毒原液保存H包装检定* 100级或局部100级 10 000级区 100 000级区# 生物安全柜 为局部100级 工序B：项目7鸡胚流感疫苗的制备 （二）质量控制要点-工序B工序B: （1）应建立原始种子批：记录种子的历史、来源及生物学特性。 （2）种子批制度建立： （传代、扩增） （传代、扩增）原始种子批 主代种子批 工作种子批要求：各种子批间要保持：生物学特性一致。 （3）种子批检定：培养特性、鉴别试验、毒力试验、免

21、疫力试验、病毒滴度、病毒外源因子检测、无菌试验项目7鸡胚流感疫苗的制备 （二）质量控制要点-工序B 原代细胞的制备或传代细胞复苏毒种筛选* 种子批的建立和检定* 毒种接种* A B 筛选细胞C （灭活疫苗） 病毒原液 病毒灭活 病毒的收获过滤# （减毒活疫苗） G F E半成品配制# 分装# I 扩大细胞培养D病毒原液保存H包装检定* 100级或局部100级 10 000级区 100 000级区# 生物安全柜 为局部100级 工序C：病毒鉴定、包括细胞病变、滴度及其他特殊鉴别试验项目7鸡胚流感疫苗的制备 （二）质量控制要点-工序C 原代细胞的制备或传代细胞复苏毒种筛选* 种子批的建立和检定*

22、毒种接种* A B 筛选细胞C （灭活疫苗） 病毒原液 病毒灭活 病毒的收获过滤# （减毒活疫苗） G F E半成品配制# 分装# I 扩大细胞培养D病毒原液保存H包装检定* 100级或局部100级 10 000级区 100 000级区# 生物安全柜 为局部100级 工序D：细胞的来源、历史明确，细胞形态观察，细胞鉴定及外源因子检测。项目7鸡胚流感疫苗的制备 （二）质量控制要点-工序D 原代细胞的制备或传代细胞复苏毒种筛选* 种子批的建立和检定* 毒种接种* A B 筛选细胞C （灭活疫苗） 病毒原液 病毒灭活 病毒的收获过滤# （减毒活疫苗） G F E半成品配制# 分装# I 扩大细胞培养

23、D病毒原液保存H包装检定* 100级或局部100级 10 000级区 100 000级区# 生物安全柜 为局部100级 工序E：细胞形态观察，细胞鉴定及外源因子检测。项目7鸡胚流感疫苗的制备 （二）质量控制要点-工序E 原代细胞的制备或传代细胞复苏毒种筛选* 种子批的建立和检定* 毒种接种* A B 筛选细胞C （灭活疫苗） 病毒原液 病毒灭活 病毒的收获过滤# （减毒活疫苗） G F E半成品配制# 分装# I 扩大细胞培养D病毒原液保存H包装检定* 100级或局部100级 10 000级区 100 000级区# 生物安全柜 为局部100级 工序F：病毒纯度检查，病毒滴度测定、无菌试验。项目

24、7鸡胚流感疫苗的制备 （二）质量控制要点-工序F 原代细胞的制备或传代细胞复苏毒种筛选* 种子批的建立和检定* 毒种接种* A B 筛选细胞C （灭活疫苗） 病毒原液 病毒灭活 病毒的收获过滤# （减毒活疫苗） G F E半成品配制# 分装# I 扩大细胞培养D病毒原液保存H包装检定* 100级或局部100级 10 000级区 100 000级区# 生物安全柜 为局部100级 工序G：病毒原液检查，包括：病毒滴度测定、无菌试验。项目7鸡胚流感疫苗的制备 （二）质量控制要点-工序G 原代细胞的制备或传代细胞复苏毒种筛选* 种子批的建立和检定* 毒种接种* A B 筛选细胞C （灭活疫苗） 病毒原

25、液 病毒灭活 病毒的收获过滤# （减毒活疫苗） G F E半成品配制# 分装# I 扩大细胞培养D病毒原液保存H包装检定* 100级或局部100级 10 000级区 100 000级区# 生物安全柜 为局部100级 工序H：原液保存在-20 。项目7鸡胚流感疫苗的制备 （二）质量控制要点-工序E 原代细胞的制备或传代细胞复苏毒种筛选* 种子批的建立和检定* 毒种接种* A B 筛选细胞C （灭活疫苗） 病毒原液 病毒灭活 病毒的收获过滤# （减毒活疫苗） G F E半成品配制# 分装# I 扩大细胞培养D 病毒原液保存H包装检定* 100级或局部100级 10 000级区 100 000级区#

26、 生物安全柜 为局部100级 工序I：半成品及成品的鉴定按有关标准进行 。项目7鸡胚流感疫苗的制备 （二）质量控制要点-工序I返回（1）符合现行的中华人民共和国药典、 中国生物制品主要原辅材料质量标准（2）用到的化学试剂必须为化学纯以上。 （3）对供应商要有审查 项目7鸡胚流感疫苗的制备 （三）生产管理要点-原料与辅料生产及检定用的动物应符合：清洁级 小鼠、豚鼠、鸡胚等 项目7鸡胚流感疫苗的制备 （三）生产管理要点-生产及检定用动物细胞株：生产用的细胞株应在一定的代次之内，据有明显的该细胞生物学特性，无污染。毒种：生产用的毒种经过生物学鉴定应无外源因子污染。毒种的接种和培养应在专门的设备内进行，有些在国家认可的P2、P3病毒储存：冻干病毒保存在-20，液体病毒保存在-60以下。项目7鸡胚流感疫苗的制备 （三）生产管理要点-生产