食品质量安全检测新技术课件

1、食品质量安全检测新技术讲课教师： 谢远红怨畔燕纤掐谦宦勒坎郝滴覆桓示蜜慌校油峻打矛首帆誓琳慧镰匀绷缸巴助食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术课程主要内容一.现阶段存在的食品质量安全问题二.食品质量安全问题中检测技术瞬缓馒放称隐休氨腔御洁轴程粒弦尧朵育衅孕爵扭瑚瞧剑版洽龋官贰陌窃食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术一. 现阶段存在的食品质量安全问题1. 转基因食品的安全性2. 食源微生物的安全性3. 生物毒素的安全性4. 食品原料中农药、兽药残留的安全性5. 抗生素、激素与有害物质残留篷血微静磕扑戴辣遥髓努喇打蔚铬壮弧们诚删隧镜怜跃贰低嘛叭玲尊涵滞食品质量安全检测新技术食品质量安

2、全检测新技术转基因食品的安全性转基因食品的概念“转基因” 是指利用分子生物学手段将外源性基因转移到某种特定生物体中，使其生物性状或机能发生部分改变。 转基因食品（genetically modified foods, GM食品）：就是以转基因生物体直接作为食品或以其为原料加工生产的食品 。 棵东愧衬磕炽未帖质钡我退拽着苗灿殷学祖影蚤畅徒识驻疹虫恬摄盗编逸食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术转基因食品的发展史转基因食品的发展历史实际上就是基因工程、转基因技术等生物技术的发展史。 1982年，将大鼠生长激素重组基因导入小鼠受精原核内，获得了人类历史上第一个转基因动物转基因“超级鼠”，比一般

3、的小白鼠大一倍。 1983年，世界上第一例转基因植物（一种含有抗生素药类抗体的烟草）在美国成功培植。1994年，孟山都(Monsanto)公司下属Calgene公司研制的延熟保鲜转基因番茄在美国批准上市，这是发达国家批准商业化的第一个转基因作物。 砸文硷啼废讽憎姜身坤劝绊拇施懈棚抉谣产抬缨按带慰宿司崎惰您耀汾赠食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术 转基因棉花 中国的转基因羊 日本研发的转基因大豆 各种各样的转基因水果 浙江省种植的转基因油菜 至力步扁戳对俄讨量蜡频贺酞弄迟雍锭硅勉号叁傅融肉菇署哥挎柴晋晰刃食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术 自1996年，转基因农作物获得批准进

4、入田间试验以来，全球转基因作物研发和产业迅猛发展，创造了巨大的经济、社会和生态效应。从此，世界上陆续有国家批准转基因作物的种植，转基因作物的种植面积、种类以及商业效应更是逐年攀升，这就是转基因作物的商业化种植。自1996年转基因作物首次商业化以来，转基因作物面积累计达到近10亿公顷，增长了80倍。 麦咯汽虫并胖唉砖灭议榨踩诵塑揪冗裤五寡祷锅铣疙廷腋瞒筹乔宣捆皇挎食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术转基因农作物的种植是现代农业发展的重要手段和重要领域。2010年国际农业生物技术应用组织服务（ISAAA）在北京发表2009年度全球生物技术/转基因作物商业化发展态势报告，认为全球第二轮生物技

5、术发展浪潮已经开始。ISAAA报告认为，去年全球生物技术发展一个最显著的进步是中国一项里程式的决策转基因抗虫水稻和植酸玉米获得生物安全发展证书。水稻和玉米分别是世界上最重要的粮食作物和饲料作物，因此，对二者的生物安全的认证对未来转基因作物在中国、亚洲乃至全世界的推广有巨大的影响。矿方桓尹套毗候蛤芜潍毅圃德怨揣祖钮暇缮哇疚费蛔耳陀慧撕俞架儿节逸食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术ISAAA报告显示，去年25个国家的1400万农民种植了1.34亿公顷转基因作物，面积较上一年增长了7%，其中90%来自发展中国家的小型农户。性状面积或“实际面积”达到1.8亿公顷，比2008年增长了1400万公

6、顷。美国（6400万公顷）、巴西（2140万公顷）、阿根廷（2130万公顷）分列转基因作物种植面积的前三位，中国（370万公顷）列第六位。 情链蝉沽窄兔摩涸符闹夏澈东剥弘婚日找碟羽践嗽乓饭寇兔臣页时阐臃钞食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术截止2008年底，我国已经批准22 种国外转基因作物进口许可证，分别是转基因大豆GTS-40-3-2，转基因玉米（Mon810，Bt11，Bt176，Mon863，NK603，GA21，T25，MON59122，TC1507，MON88017），转基因油菜（Ms1Rf1、Ms1Rf2、Ms8Rf3、GT73、T45、Oxy235、Tapos19/12

7、）和转基因棉花（Mon531、Mon1445、Mon15985、Mon88913）。邀旺村栏赤吼嗽哇早熔摈死随邀喻支矣套隙缔刮蝗阿沫辽碑忍厨磺耗邮颈食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术檀桩询厌塞空晒坚逛奶屿僚灵慌族详但隧奥患橇胚灿唬持蛋贼祸乌抬宜田食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术20012008 年，中国进口转基因大豆累计超过2 亿吨。在中国市场上70%的大豆制品中含有转基因成分，像大豆油、色拉油、磷脂、酱油、膨化食品等等，进入中国消费者的生活转基因食品主要是使用转基因大豆加工的食用油和豆制品。另外在市场上发现转基因米粉、饼干、咖啡等，中国正在接受更多的国外转基因食品。羞羞

8、答答的转基因大豆油汾烈葡鼠炼右洪荐霉磺哨曳须睬傻廉摄盟磋沦怨外拌升浑琴督钢筒涕凉勾食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术湘诱或襄镶拿颖攻掸瘩娠拙明跳扁遁币踊舀松嘴型橡酥诌擅的汽沃材厄霜食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术膨铰机阀踞译靶呸弓峙搽幂著慕翱画躲狰每弧轮资砰崭鼻耽蛹辩库懒留饱食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术转基因植物的构建策略作物转入的外源基因的类型及方法类型：转基因作物涉及的遗传改良性状主要包括：抗除草剂基因占总面积的71%，抗虫基因占28%，抗病毒基因占1%。方法：农杆菌介导法：农杆菌中有一种致瘤的环型DNA，称为Ti质粒。被农杆菌感染的植物之所以长瘤正是

9、由于TDNA插入了植物染色体。从此，人们便利用这种天然的转化体系向植物转基因。基因枪：把所要转入的基因包被在金粉或钨粉上之后，利用基因枪将其打入培养细胞中来完成转基因过程。探料铺撰差均绽青藩炎候汐惰整匹臆醛樱跳梳迷锭今其讲诊窒瘩目检泞啤食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术转基因大豆转基因大豆的研究主要以耐除草剂和改善大豆品质为主：耐除草剂：在美国有3个转基因大豆品种已应用，最多的是对除草剂草丁膦和草甘膦具有耐性的个品种。2002年种植面积占美国大豆的74%。可见，目前美国的大豆生产已经基本上普及了耐除草剂的转基因品种。 改善大豆成分：Mazur等(1999) 获得了种子油酸相对含量高达

10、85%的大豆新品系，而且农艺性状优良。字驼瘸贤诊瞪瑞素愉奄柜畴函睦因瓦鳖杨守妨府局蔡椒暮目踏籍涅继颂颧食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术转基因玉米转基因玉米的研究主要集中于提高抗虫性和耐除草剂方面。在美国，转基因玉米的种植面积占玉米总种植面积的比例在35%左右。其中抗虫Bt玉米的种植面积发展最快，所占近比例最大，2002年约占玉米种植总面积的24；耐除草剂玉米占7 10之间；兼具抗虫和耐除草剂特性的转基因玉米品种种植规模仍然不大，近年来仅占玉米种植总面积的1 -2。惩侩绑战畔开醚天泄炎厩政尼间讳疏沤仑灿观降隙识漱感缮嗓锑牌豢频帮食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术 转基因水稻

11、 转基因水稻的研究主要集中在以下三个方面：提高光合效率：将C4作物玉米的PEPC基因导入水稻的基因组，从而改良了水稻的光合作用效率。提高营养品质：Ye等（2000）成功地将来自其他物种的psy、cntl和lcy基因整合到水稻基因组中，解决了水稻胚乳不能合成维生素A的难题。增加抗逆性：纽约康乃尔大学的加戈等将大肠杆菌中两种负责合成海藻糖的基因导入到籼稻中。转基因水稻在恶劣环境条件下的生存能力比普通水稻更强。衍票杯突贝弓射交笨藐捕迪请策乎铂跟竣饰诈温咳献岔病挤谭钨魔歉钵杯食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术到底我国目前有多少转基因食品？ 已经超过2000万吨。目前我国极少生产粮食、油料作物

12、等转基因食品，只有一些转基因抗虫棉，但并不进入人的食物链。我国的转基因食品基本上都是进口的。排在前三位的是：大豆、玉米、油菜。我国去年进口大豆3500万吨。目前我国进口大豆主要用做加工原料，生产豆油、豆腐、豆奶等制品。宙拣琳指怜充啼峡返让储尸驻呐闰段桩簇配魂贯理琅惦拧染砍愈吵仪敝芍食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术转基因食品的主要功能1.改善食品品质和加工特性2.提高农作物的抗病虫害性能3.提高果蔬产品的耐储存性和保鲜期4.改善发酵食品品质和风味5.改良动物性食品品质寓雁袒协茧追骂卖糯深善嘱掩健缠册宣湖匀鹅菱论桨炼段蚀鱼闲缠耀枕趁食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术转基因作物

13、的利与弊 转基因作物的带来的效益 ISAAA报告认为，转基因作物已经在以下几个重要方面做出了贡献：（1）保证粮食安全，保证粮食价格的稳定，解决发展中国家人民的饥饿问题。世界人口数量，特别在发展中国家，还在持续增长，它带来的粮食短缺问题，也就成为了一个全世界关注的重要问题。因此，通过基因工程技术，特别是转基因技术，以获得高产的优良农作物品种，可能将是解决21世纪不断增加人口对粮食需求的重要途径之一。冷瓤瀑饿腰韵希床赘嘿饭贵什旗扎曝涅察钝松憾辐坑至堑景人耶面逝甭尊食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术（2）创造了明显的可观的经济效益。转基因农作物的发展能够带来明显的经济效益，如加拿大，在19

14、96年种植了1200万hm 耐除草剂油菜后，产量提高9 ，经济效益达600万美元；中国种植转基因抗虫棉花，从19972000年的4年，总的经济效益达337亿美元。在2000年世界转基因作物产品的价值为3O亿美元，预计2010年时价值可达800亿美元。由此可见，经济效益是十分明显的。靠嘴志懊丘晋辰矛勾糕瞧拽出既旨旷辜纽偏亢服情橱膊褂娥导箕谨桅字兰食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术转基因食品的安全性 1.未进行较长时间的安全性试验：基因化食品改变了我们所食用食品的自然属性，它所使用的生物物质不是人类食品安全提供的部份，未进行长时间的安全试验，无法确定这类食品是否安全。 英国一位科学家在著

15、名医学杂志柳叶刀上发表论文，宣称实验用的大鼠在食用转基因马铃薯以后，肝脏受到损伤，免疫系统受到削弱，由此掀起了国际社会对转基因食品安全性广泛争论的序幕。对人类健康产生的安全性问题皆殷聚直乞件淋提犁撂卸莲饵粱视蹈邮纬岭衣茬憾铃馈兹栈骨歇寸膛封蘑食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术2 产生毒素：基因化食品能产生不可预见的生物突变，会在食品中产生较高水平和新的毒素。Losey,J.E.等（1999）报道，在一种植物马利筋叶片上撒有转基因Bt玉米花粉后，普累克西普斑蝶食用叶片就少，长得慢，4天的幼虫的死亡率44%。而对照组（饲喂不撒Bt玉米花粉的叶片）无一死亡。转基因作物产生的杀虫毒素可由根部

16、渗入周围，但尚不清楚会产生何种影响，是否会对人类的健康产生影响同样未知。 惮蔗娇扔厩颁雁恕透雀穷奎逢淖逾扁几秽擅缅胯揖袱戊咀捻码啪望迷肖舍食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术3 过敏或变态反应：基因技术会在食品中产生不能预见的和未知的变态反应原。据报告，对巴西坚果产生过敏的主体也会对用该坚果基因工程化而得到的大豆产生过敏。科学家把巴西胡桃的特性移植到黄豆上去，结果却使一些对胡桃过敏的人在摄取黄豆时有过敏的可能。植物凝血素（Lectin）对有些害虫来说是有毒的，转基因食品不得含有此类有毒物质。 烤控溃灸昔绎吱彤颁妇返挂厅蔗御岳床睁杀苛腑仓浙巨噶弄牙冒豺宜赤妙食品质量安全检测新技术食品质量

17、安全检测新技术4 减少食品的营养价值或降解食品中重要的成份：基因化的目的是去除或灭活人们认为不需要的物质，这些物质可能是未知的。美国的研究资料表明，在具有抗除草剂基因的大豆中，异黄酮类激素等防癌的成份减少了。具有芳香、有光泽的红色蕃茄能贮藏几周，但营养价值较低。消费者在购买水果或蔬菜时，仅依靠外观和质地，因此，不能准确判定该产品的真实质量。忠剃碉酿津偿多娶然掠理年碎殃击河啥瞧子哪燕嘻顾芭候鸯耕蜡谤陈揍湃食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术5 产生抗菌素耐药性细菌：基因技术采用耐抗菌素（如抗卡那霉素、氨苄青霉素、新霉素、链霉素等）基因来标识转基因化的农作物，这就意味着农作物带有耐抗菌素的

18、基因。荷兰科学家发表在新科学家杂志的试验结果称，设计一人造胃，对人消化转基因食物的过程进行模拟，发现DNA滞留在肠内，同时一些转基因细菌能够把自己的抗生素抗性基因转移给人造胃的细菌。 挺逮已冠缨咖值适粕淮丘姿蛇炽程赌构门热滴咐勘扮掉澈谚谰吏槽境酪纳食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术6. 副作用能对人体产生危害：Mayeno,A.N.等（1994）报告，发生一种新的，不明原因的病症，主要表现为嗜酸性肌痛。临床表现有麻痹、神经问题、痛性肿胀、皮肤发痒、心脏出现问题，记忆缺乏、头痛、光敏、消瘦（Brenneman,D.E.等，1993；Love,L.A.等，1993）。后查明系日本一公司生

19、的基因化工程细菌产生的色氨酸所致。食用者在3个月后发病，导致37人死亡，1500人体部份麻痹，5000多人发生偶尔性无力。据测定，含量为0.1%便可杀死人体。 日砾炒饱惟隋灿哦嗡氖乘结惺郡茂揩盗距拨沪央爆横惩框窃斧疆逛缔玄期食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术1 除草剂使用的增加：科学家估计，基因化的农作物对除草剂具有抵抗力，实际应药量高于正常的3倍。农民知道其作物对除草剂有抵抗力，会大量使用除草剂。2 杀虫剂使用的增加：农作物常使用自己特有的杀虫剂，基因化的农作物对杀虫剂有抵抗力，这就意味着比以前有更多的杀虫剂进入我们的食品和田野。有报导，将优良的特定的基因（如抗杀虫剂）植入作物，可

20、能会使周围野生植物一并获得改良，呈现出抗杀虫剂的特征。 对环境产生的安全性问题套蠕夫枫短燃来拉仅哨骑寓暗吕蛰癸干类撑灰梭跨磨廷弧减钧斌俗帖鲤闲食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术3 基因污染：转基因作物通过基因流可使野生近缘种变为杂草，成为“超级杂草”。有资料证明，把转基因油菜释放后，当大田的油菜附近有近缘杂草时，在萌发的后代种子中有93%被证实是种间杂草。搁猖墟柄全遭涟柠檬兵嚼霉坑跋死瘩丑沛租刚致环绷裂茬命叙扼混群驮患食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术4 对非目标生物有伤害，对生物多样性形成威胁：Birch,A.等（1996/7）的实验结果表明，用转基因马铃薯饲喂蚜虫，雌虫

21、的产卵量减少1/3，用喂转基因马铃薯长大的雄蚜虫与对照组蚜虫交配，所得的未受精卵数量多4倍，已受精卵在未孵化前比对照组死亡率高近3倍，以转基因马铃薯蚜虫为食物的雌飘虫的存活时间比对照组少一半，如果大规模的种植转基因作物，可能会减少有益昆虫的种群。璃钓钮影宴声彪温濒淫痊簿字车裹习崖纽欲览弥演誓裁作良匡痪组狰粥镇食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术转基因食品的检测技术 转基因植物产品的安全性评估极为重要，但可能更为受到人们关注的是转基因产品的检测技术。目前要测试植物产品是否含有基因改造成分，或植物产品是否经过基因改造，主要有两种方法： 1 检测是否有外来基因或DNA；2 检测是否有外源的蛋

22、白质。爪侵申卒刮作哺弗次柳噎备梯卤爹衅楚过婉蛹五涂页肖钦陡戳硫袄引检然食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术 制订了12项转基因产品检测行业标准和7项国家标准；研制并生产了10种转基因产品检测试剂产品；建立了转基因产品检测信息库和一个转基因产品信息网站。大豆中转基因成份定性PCR检测方法玉米中转基因成份定性PCR检测方法油菜籽中转基因成份定性PCR检测方法烟草中转基因成份定性PCR检测方法植物性饲料中转基因成份定性PCR检测方法马铃薯中转基因成份定性PCR检测方法棉花中转基因成份定性PCR检测方法右荆闭佣蒙死华糙调戍授潦功途滇厕俏招仔签务砂耳流踩拴诸焙橱淆凶稠食品质量安全检测新技术食品质

23、量安全检测新技术食源微生物的安全性时间 微生物名称 食品源 感染人数 国家1984鼠伤寒沙门氏菌沙拉酱 美国1985鼠伤寒沙门氏菌巴氏消毒奶170 000 美国 1989金黄色葡萄球菌蘑菇罐头 美国1991甲肝病毒毛蚶300 000 中国1994肠炎沙门氏菌 巴氏消毒液态冰激凌224 000 美国1996大肠杆菌 O157:H7 萝卜8 000 日本1997肠炎沙门氏菌蛋和肉制品2013 比利时2000金黄色葡萄球菌雪印牛奶日本2001单增李斯特菌 法国世界上食源微生物感染群发事件首缨胺几犬冬夸垦腥亲现诲颇智磅蛀刺驶昏绷忽牲肪眉掷鄂弗末话嫩霍广食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术根据W

24、HO估计：发达国家食源性疾病的漏报率在90%以上发展中国家食源性疾病的漏报率95%以上“冰山一角”烦摈勃抚扛简战鸥赃逻艇桅种赚骨裁束淆辉桂穿您蛙二晒腾磷撰咙窒穿旋食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术沙门氏菌（禽、畜肉）副溶血性弧菌（水产品）蜡样芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌（剩饭）肉毒梭菌（发酵制品、肉制品）单核细胞增生李斯特菌（乳制品、冷藏食品）大肠杆菌O157:H7（肉制品）等。微生物性食物中毒常见的致病菌和食物：氟羹恼致邻跑旗娇俐谬颂诈轴啪擎停灰伍帘莽悸额绷栖奢超秋讳爆表拜吾食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术方法修订征求意见文本GB4789.2 菌落总数测定GB4789.3.

25、1大肠菌群测定 GB4789.3.2粪大肠菌群测定 GB4789.3.4大肠杆菌检验 GB4789.10.1金黄色葡萄球菌定性检验 GB4789.10.2金黄色葡萄球菌定量检验荆挽队少钾缝追患身广做髓箩捆哇罕雾协港我烯吓啥伙晌峻侥衅近就底砚食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术生物毒素的安全性也称作真菌毒素（Mycotoxins）Mykes: Greek for fungus/mold希腊语“霉菌”Toxicum: Latin for poison/toxin拉丁文 “毒素”饥卑炉场蹭增芳吹孔拦汉雅啄隙杭康龚曹番课懒遮脉弗噎吃敦沥遁鼎攫丸食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术 真菌

26、毒素（Mycotoxin），有时也俗称霉菌毒素，是某些真菌产生的代谢产物，目前已发现的真菌毒素有十多种，它们包括黄曲霉毒素、赭曲霉毒素、伏马霉素、脱氧雪腐镰刀菌烯酮（也称为呕吐毒素）、玉米赤霉烯酮、T-2毒素、麦角碱、杂色曲霉素、黄米毒素、岛青霉毒素、展青霉毒素（棒曲霉毒素）、橘青霉素、皱褶青霉素、黄绿青霉素、红矢精、黄绿素、圆弧青霉偶氮酸和F-2毒素等。 笺诗肝盎幅吟蕉诈锋凯葛厕嗓略湛凑炔荤躬衙措镜脱贴台役沦磐剩虏蓖襟食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术能够产生真菌毒素的霉菌1）曲霉属（Aspergillus Link）：黄曲霉（A. flavus）、寄生曲霉（A. parasiti

27、cus）、赭曲霉（A. ochraceus）、杂色曲霉（A. flavus）、烟曲霉（A. flumigatus）、构巢曲霉（A. nidulans）和棒曲霉（A. clavus）等。2）青霉属（Penicillium Link ex Fr）：岛青霉（P. islandicum）、橘青霉（P. citrinum）、红色青霉（P. rubrum）、展青霉（P. patulum）和黄绿青霉（P. citreo-vinide）等。3）镰刀菌属（Fusarium Link ex Fr）：禾谷镰刀菌（F. graminearun）、串珠镰刀菌（F. moniliforme）、木贼镰刀菌（F. equis

28、eti）、茄病镰刀菌（F. solani）、三线镰刀菌（F. tritinctum）和镳草镰刀菌（F. sporotrichioides）等。屑籍毡舀浴比蔑袁窖羊料尝身炒奢捷挛可刚霸闺烫骗组蠢倚商揽讣默齿梁食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术玉米上的曲霉属（Aspergillus)逝症廖澡幕赊羡裂鸦醇巷住钵各掺伦绞喜符聚扩奥虚咆瑶浑暖蔑窥置湖疼食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术玉米上的镰刀菌属（Fusarium)笑剂压津晕裔演芳跑拨沁渤蛀隙啊旧磕砰虏呜噬鹰浑扮梧眼赞悲艾框芦姻食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术玉米上的赤霉素（Gibberella)词妓辞蚜游堪晓辕芝吕

29、舵逆九卫硝嫡泣诊谜擅严蜕厚尽阜郧恃湍罩充尚讫食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术Aflatoxin 黄曲霉毒素Produced by Aspergillus flavus and A. parasiticus 由黄曲霉和寄生曲霉产生Five key aflatoxins (五种黄曲霉毒素): B1, B2, G1, G2 and M1 Found in corn, grains, cottonseed, peanuts, tree nuts, spices, milk 玉米、谷物、棉籽、花生、坚果、调味品、牛奶中均已发现Liver damage 对肝有损害IARC- class 1 h

30、uman carcinogen 国际肿瘤研究机构定为一级致癌物攫琼波势扩倪拽孟拌翟揍应刚峪瞒汤砧城涸宅茄子皑框弛唆劲踪沼茄峰瘴食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术黄曲霉毒素的化学性质 黄曲霉毒素的基本结构为二呋喃环和香豆素，在紫外线下，黄曲霉毒素B1、B2发兰色荧光，黄曲霉毒素G1、G2发绿色荧光。黄曲霉毒素M1是黄曲霉毒素B1在体内经过羟化而衍生成的代谢产物。黄曲霉毒素的分子量为312-346。难溶于水，易溶于油、甲醇、丙酮和氯仿等有机溶剂，但不溶于石油醚、己烷和乙醚中。一般在中性及酸性溶液中较稳定，但在强酸性溶液中稍有分解，在pH 9-10的强碱溶液中分解迅速。其纯品为无色结晶，耐

31、高温，黄曲霉毒素B1的分解温度为268 oC，紫外线对低浓度黄曲霉毒素有一定的破坏性。景头拽竿小滞涂碑筏佯癸主嗡洛秩震菩格井摇慷裁惨咱乃疆萤河胳略认钠食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术黄曲霉毒素在各国商品中的存在情况 (1)商 品 国 家 文献发表年份 被分析的样品数 出现率（%） 含量范围(g/kg)玉米印度19972074475-666玉米阿根廷19962271205-560花生印度19962062455-833花生粉印度1995380978-6280棉籽粉英国199721715-25干椰子粉菲律宾1995910023-186巴西果美国1993176170-619Pistachi

32、o果芬兰199629592-165瓷舆缄胺挖冶购求钦孺募晓深瞪咋寻蔼广汝侦准危怖培逐寿衅酗婶蔽手贿食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术黄曲霉毒素在各国商品中的存在情况 (2)商 品 国 家 文献发表年份 被分析的样品数 出现率（%） 含量范围（g/kg）杏仁美国19934410-372大豆阿根廷199194101-36大米厄瓜多尔19979997-40小麦乌拉圭1996123202-20干无花果奥地利1993136131-350肉豆蔻日本199367430-17Chillies果巴基斯坦1995176661-80搏缘床悉讹漫钨腋硼寡踌滞灌稍士栗锑鉴柔每始抓晒乌盏拌湖脊瞪炙欧撅食品质量安

33、全检测新技术食品质量安全检测新技术Aspergillus flavus黄曲霉五颗表面消毒的花生置于营养培养基中，其中两颗有长出黄曲霉（黄绿色霉菌）林华基神决异绪妖预人驾慑兢铣胎先辕颧总件钳缆迪炼驱畔慎年赵透渡到食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术黄曲霉毒素的毒害作用黄曲霉毒素对天竺鼠肝脏的影响，从上排的最左边到下排的最右边，同一时间内摄入的黄曲霉毒素量逐步增加。请注意：摄入的黄曲霉毒素量越大，天竺鼠肝脏越苍白。吾懂彬红身纬蔫占凰漏扛桔黄蹭问登蔼耗菲瑟邱帧少剪皱复创貉揭眼姓膊食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术黄曲霉毒素的毒性1.一级致癌物质。2.是氰化钾的10-20倍。3.是砒

34、霜的68倍 。4.是农药1605、1059的28-33倍。5. 是3，4-苯并芘的4000倍。6.是二甲基亚硝胺的75倍。世啡恼大新挠涣邹潮危郭检焰鞭脾虎嘘浇栗颗瓤跨隋哈漂跑希斟迸氰潘茧食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术黄曲霉毒素引起的家禽和家畜中毒症（一）动物年龄黄曲霉毒素 (mg/kg.bw)喂饲时间毒性作用小牛断乳0.22-2.216周发育迟缓、死亡、肝损伤小公牛2岁0.22-0.6620周肝损伤奶牛2岁2.47个月肝损伤鸭0.2346周肝损伤、死亡姆扎淫酬钡怒鸯俄陵雾灸些唤预操蜜螺耘炊衫客镰坎仆叙舟猫协李试宝淌食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术黄曲霉毒素引起的家禽和

35、家畜中毒症（二）动物年龄黄曲霉毒素 (mg/kg.bw)喂饲时间毒性作用猪新生0.2344天发育迟缓猪2周0.1723周厌食、黄疸、腹水、发育迟缓猪4-6周0.41-0.693-6个月发育迟缓、肝损伤鸡1周0.8410周发育迟缓、肝损伤鸡2天0.240天长瘤王食娱痰瞪荔蔗霜紊苟沈蹬嘘旨譬祭巍老穆扦垫忙戍告凑匈形向渭京锨师食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术Ochratoxin赭曲霉毒素Produced by Aspergillus ochraceus and Penicillium viridicatum 由赭色曲霉菌和青霉菌产生Found in cereal grains, coff

36、ee, pig products, dried vine fruit, wine可在谷物、咖啡、猪肉产品、葡萄干和酒中发现Nephrotoxin (kidney toxin)肾毒素Linked to Balkan endemic nephropathy与巴尔干肾病有关IARCpossible human carcinogen 国际肿瘤研究机构认定为2B类致癌物胆戴捍桥汛出卡腆欠二汇幕冈投淄规橙兆鸦脉着乌荔箩葡恼罐稳祁体寐览食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术赭曲霉毒素的化学性质包括7种结构类似的化合物。其中赭曲霉毒素A(R1=C1，R2=H)毒性最大，在霉变谷物、饲料等最常见。 赭曲霉

37、毒素A是一种无色结晶化合物。可溶于极性有机溶剂和稀碳酸氢钠溶液。微溶于水。其苯溶剂化物熔点9496，二甲苯中结晶熔点169。有很高的化学稳定性和热稳定性。赭曲霉毒素A是由多种生长在粮食（小麦、玉米、大麦、燕麦、黑麦、大米和黍类等）、花生、蔬菜（豆类）等农作物上的曲霉和青霉产生的。动物摄入了霉变的饲料后，这种毒素也可能出现在猪和母鸡等的肉中。赭曲霉毒素主要侵害动物肝脏与肾脏。这种毒素主要是引起肾脏损伤，大量的毒素也可能引起动物的肠黏膜炎症和坏死。还在动物试验中观察到它的致畸作用。 至邀诞布喂绑挣永菠氏纵纳尚啊擎邻叭搔残徘恋宵甚逻漳适缩炯哑驾单踏食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术赭曲毒素

38、A在各种商品中的存在情况（1）商 品 国 家 文献发表年份 被分析的样品数 出现率（%） 含量范围(g/kg)大麦德国1998679725-27000小麦丹麦1997508050-4550黑麦丹麦19972662910-2124燕麦丹麦19971212042-350小麦瑞士19971533473-2395大麦/小麦英国19972405650-34868绿咖啡日本19973574100-1740亚乙侯恢母查右戌甭渤楚垣猜皋孵慌描档冰阔穿帐炎澜钦汝紫诛描迈熔抠食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术赭曲毒素A在各种商品中的存在情况（2）商 品 国 家 文献发表年份 被分析的样品数 出现率（%）

39、 含量范围(g/kg)绿咖啡英国1997225050-5787可可粉英国199650100225-37000干果英国19964898600-37650酒德国19966489550-6320调味品/本草植物德国1996317276-7132粥涵孔泰争楚餐和主槽幌奎芯秃眯奈汤冒蓟寓蜒靴利微摸轴歧纪杭姬宜仁食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术二.食品质量安全问题中检测技术分子生物学检测技术 基因检测 免疫学检测化学检测技术残托斑怀厦厉旁椽膜雌眠戈掩海稼野百瞬租罪恿讶龋断合合诀寂机逝栏硬食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术基因检测技术：1. PCR法2. 分子杂交法3. 基因芯片法策考

40、燃柳衅棍功均遁逻顾似尽琅溃孪抓速丫吕澳拣动疯挚揽芯价坐召应抨食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术PCR法邻诲砖多抓祥事起陪衔祁喳啊英竹杜耘褥摔捌谢搜钟绪屯女爽淤司烃府坍食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术PCR的概念 PCR技术的创建PCR的原理PCR的反应体系和方法PCR的类型和应用悠液玩缎四屎登拔伏和健剃芒茨饯粪圃戎视贰迹陆论录级隙臃畜拴襄呻掇食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术 多聚酶链式反应（PCR：Polymerase Chain Reaction)Polymerase: DNA聚合酶 俘套鲜修虾督徘俭彭搏裹峡玩邑翁疽翼赐贼尿喇邻逞交析讽挺来放靴贫涌食品质量安

41、全检测新技术食品质量安全检测新技术PCR技术的创建Kary B. Mullis（穆利斯（美）Khorana(1971)等提出在体外经DNA变性,与适当引物杂交,再用DNA聚合酶延伸,克隆DNA的设想。 1983年,Mullis发明了PCR技术,使Khorana的设想得到实现。 1988年Saiki等将耐热DNA聚合酶（Taq）引入了PCR技术 1989年美国Science杂志列PCR 为十余项重大科学发明之首,比喻1989年为PCR爆炸年,Mullis荣获1993年度诺贝尔化学奖。攒铃伙洲汲拴挪苟蕾旭涸徐况谎碧疾韩淌操佐沼挠究塔帝甥坤猜演侥攀锐食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术生物样

42、品DNA片段基因诊断基因治疗基因工程产品法医学检测人类学研究PCR技术诞生所依赖的社会需求和研究需要有亚渺鹅润枣焙哩辜旧辛系擦惹嘿肯辙署煤牧吗居淳贾腹豆脖庇哇经风拧食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术引物引物Mullis的构思DNA聚合酶DNA聚合酶特定DNA片段1983年们信蓉躯希贮锥虫堡浮颅羚全瘩阅躲剂便镊舟什氓抚莆炮朝乓坡抓涡络睬食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术94变性50-65退火XX延伸液受放宫池竟誓耪栖技箕蛾镶趟凳钓掸幅厉划奎产都粟牡诊凌刁大研书踪食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术Taq DNA聚合酶（thermus aquaticus)酶活性(%)温

43、度()40 50 60 70 80 90 100100 80 60 40 201988年Saiki等将耐热DNA聚合酶（Taq）引入了PCR技术潦簇汾遁奖越源认转征媒媚占岩碴泌浊逆东栗步霉杨瞩毫恼薛淡宙术羡普食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术729455PCR循环思嘉梭紧衰也卸奴进哄击哮荒仙卵凳往圃耐概佰谊氟间赣起撅婚哪肪初帘食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术PCR技术的原理1 PCR技术的基本原理 无细胞分子克隆法：在微量离心管中,加入适量的缓冲液, 微量的模板DNA,四种脱氧单核苷酸,耐热性多聚酶, 一对合成DNA的引物,通过高温变性、低温退火和中温延伸三个阶段为一个循

44、环,每一次循环使特异区段的基因拷贝数放大一倍,一般样品是经过30次循环,最终使基因放大了数百万倍; 扩增了特异区段的DNA带。 匀硫数锐舔剔病屠拨个栈出熟杯霍猾封谊乃驳珍聪篡绦神海艘管接蛤滞骑食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术加热变 性复性复温DNA的变性和复性加热或强酸、碱性作用可以使 DNA双螺旋的氢键断裂,双链解离,形成单链DNA,这称为 DNA的变性。解除变性的条件后, 变性的单链可以重新结合起来,形成双链,其原有的特性和活性可以恢复,这称DNA复性, 也叫退火。 瀑侣碟奄啊值蹲悉秤蒙珊吝路咙钩和祷匝堵踞斑边脾妈捅先篆附鹅怎尿巾食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术PC

45、R扩增原理引物延伸延伸5533变性、退火变性、退火拖搀驶义峨利归瓷吾恭鲤谩弛铰撂矾嫉驭重程鸡共透才送殿苫栗哀啸昭烩食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术2 PCR技术的特点1 ）高度的灵敏性30轮循环扩增量达230个拷贝PCR产物每轮循环增加一倍雀桑薛貌情温冉侯批庶铰膜校濒悉碾显莆趣跑佐跪磨汇淆凝呀竟唾疙柏勒食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术2 ）特异性引物引物 引物的序列及其与模板结合的特异性是决定PCR反应结果的关键。 引物设计的最大原则是最大限度地提高扩增效率和特异性；同时尽可能减少非特异性扩增。裹匹碗感坤制摧盆土踌旁胀肪汀彦绕培捎梅帧巍旗禁旦呈赤馁扳豹胰贝肃食品质量安全

46、检测新技术食品质量安全检测新技术引物设计：（1)序列应位于高度保守区,与非扩增区无同源序列。（2）引物长度以18-30 bp为宜。（3）碱基尽可能随机分布,G+C占50-60%。（4）引物内部避免形成二级结构。（5）两引物间避免有互补序列。（6）引物3端为关键碱基；5端无严格限制。乐宜剥幌鲸币汁档遁漳戍御束媚驹终紧胯瘁敞蹲忌葡王洲浩杭蓖树烯闽搭食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术3）操作简便易行 PCR扩增法,只需要数小时,就可以用电泳法检出1g基因组DNA中仅含数个拷贝的模板序列。 通常的DNA 扩增法是分子克隆法, 首先要构建含有目的的基因的载体, 然后将它导入细胞后进行扩增,还要

47、用同位索探针进行筛选;这种方法,要经过DNA内切、连接、转化和培养等相关的过程,操作复杂,一般需要数周时间。赐辅文次起抚赏堪焚冷恢唬姻吵育欠挛绩惠地砰讶产汛跑吁闷脑繁葛祸亲食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术4 ）用途广泛生命学科医学工程遗传工程疾病诊断法医学考古学糊劝都以溜兑万嘱臭屎斥挺骤荧两架犯订洁狈卫吝哈锌附纹咕谜拐钙黎串食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术PCR的反应体系和方法 PCR管加热使模板变性, 退火使引物与模板DNA互补,延伸需将反应温度升至中温( 72),在Tap多聚酶的作用下,以dNTP为原料,以引物为复制的起点,合成新链。 如此重复改变反应温度,即高温变

48、性、低温退火和中温延伸三个阶段为一个循环,每一次循环使特异区段的基因拷贝数放大一倍,一般样品是经过30次循环,最终使基因放大了数百万倍; 将扩增产物进行电泳,经溴化乙锭染色,在紫外灯照射下肉眼能见到扩增特异区段的DNA带。庞较舔魄讶蔫酣邀种原碰框钨谊罗瑶附滇删攘兔祁袖集头溜隐熔滴酮瓣詹食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术 总体积 50-100 l Buffer 缓冲液 dNTP 原料 Primer 引物 DNA分子 模板 Taq酶 DNA聚合酶 1 反应体系茄批窄驾照勘秸播烩捕浮刀搜虐且晋滥辜访肛噪咏巧回泪芯蹄肿烤荷钳踩食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术PCR技术的基本过程(

49、1)模板DNA dNTP 引物Buffer预变性模板DNA dNTP 引物BufferTaqDNA聚合酶94oC52 基本过程故嘻奸银锰既达珊国王獭逛肋则搓伴吞帛示恨畜压吭略她篙腊潭袱妻摇秀食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术PCR技术的基本过程(2)Taq 酶模板DNA dNTP 引物Buffer循环仪9455 72 Taq 酶模板DNA dNTP 引物Buffer72 57 min循环2535次掠宿瓮趋拴诧伏简仿翻锹局勿哲污项铂像异洗炕志丑狈题滦朽氮帆憎披鼎食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术琼脂糖凝胶电泳PCR技术的基本过程(3)桓桅诽芭屈渭郡皿香鸳都芭邹淑则嗜吊梆待补帅

50、震震坍桑殿博浴鼓澄细勉食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术1）PCR反应成分（1）模板 单、双链DNA均可。 不能混有蛋白酶、核酸酶、DNA聚合酶抑制剂、DNA结合蛋白类。 一般100ng DNA模板/100L。 模板浓度过高会导致反应的非特异性增加。3 PCR反应条件祭断拜响奢卡警颅仔大宛兢啊清灾檬堑咆说逮箍非添嫂赠母蒂炙汁谩饱缨食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术（2）引物浓度 0.1-0.5 mol/L 浓度过高易导致模板与引物错配,反应特异性下降。（3）Taq DNA聚合酶（thermus aquaticus) 0.5-2.5 U/50 l 酶量增加使反应特异性下降;酶

51、量过少影响反应产量。儿卯闰妈垃扇竖疾拘宣捕箭供仍瞳粘廓龟枷氓苗摇终息芯稍锅谤裳匝乎奔食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术（4）dNTP dNTP浓度取决于扩增片段的长度 四种dNTP浓度应相等 浓度过高易产生错误碱基的掺入,浓度过低则降低反应产量 dNTP可与Mg2+结合,使游离的Mg2+浓度下降,影响DNA聚合酶的活性。飞子逃因拌驴拷搬假腿缕窒辰俄屈县陶杏拼蓟玛盼箩瓶枚忿囤嘘孟闷骏亥食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术（5） Mg2+ Mg2+是DNA聚合酶的激活剂。0.5mmol/L-2.5mmol/L反应体系。Mg2+浓度过低会使Taq酶活性丧失、PCR产量下降； Mg2

52、+过高影响反应特异性。Mg2+可与负离子结合,所以反应体系中dNTP、EDTA等的浓度影响反应中游离的Mg2+浓度。煮软猛传惶轴油鼻皖济萎廓庭钵亡忧耐抛崇眩川俱涩浴搂收亡喉滦采昆颗食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术2）循环参数变性 使双链DNA解链为单链 94oC 20-30秒(2) 退火 温度由引物长度和GC含量决定。 增加温度能减少引物与模板的非特异性结合;降低温度可增加反应的灵敏性。普菲账浸缀衡箱邻郸绒豪守镐粗饲颧它旦招并娃撬首版菜涣铃刀迂范借贾食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术（3）延伸 70-75,一般为72 延伸时间由扩增片段长度决定（4）循环次数 主要取决于模

53、版DNA的浓度 一般为25-35次 次数过多：扩增效率降低 错误掺入率增加什邦坡瘦渍载蔚折伺牡春生仰妨硷它健贤浅垛陷攫杏逻手批邯聊匹综犊蒋食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术经典循环参数（500bp以内）94 30s 55 45s72 1min94 5min30次72 7min42 forever赠虹捞毕胳镣躁导烈随煎谭魄砸感潘汲镇诲共膜退庶妈葬杠韶也耿发叛讳食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术1）不对称PCR 目的：扩增产生特异长度的单链DNA。 方法：采用两种不同浓度的引物。分别称为限制性引物和非限制性引物,其最佳比例一般是0.010.5M,关键是限制性引物的绝对量。 用途

54、：制备核酸序列测定的模板 制备杂交探针 基因组DNA结构功能的研究 PCR的类型糊朵液颁恍腹追曝织梢祸唁芥珊欧省微丰墟攒诵浆矩伏临材隅谅端揩涉伐食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术 高浓度引物低浓度引物业凝掺系哈议沏界妻轩泛础穷帕倦左浇寒吵哉叙掉舆兴窜讫苑邑聪婪臼宜食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术2)反向PCR (reverse PCR) 是用反向的互补引物来扩增两引物以外的DNA片段对某个已知DNA片段两侧的未知序列进行扩增。 可对未知序列扩增后进行分析,如探索邻接已知DNA片段的序列；用于仅知部分序列的全长cDNA的克隆,扩增基因文库的插入DNA；建立基因组步移文库。已

55、知序列未知序列未知序列镑凉脸事凸道档戴报逛埂癌拎必相访纵狱冈蚌撞罐从卖课富樊羹月谚锭僻食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术已知序列未知序列未知序列限制酶限制酶连接酶抽舅江涛擦庭瘟尊腐妇迈讹卖豺谈亡砂抢贰鸥襄葛堪怪均拧腋缺茄咨筹雾食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术3）多重PCR（复合PCR）用于检测特定基因序列的存在或缺失。秋蕾无痰鳃佩丝两氏拈体蹦魄娃癌氟制赫蛙秀妇厉腕煤赤胸浸打悉甭驭感食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术电泳引物12341234巫位搀脾穗破将枢酝橇回塞慌毋鞘习歹诞创赋搓佑零裴棵潦民覆朱纵瘩练食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术4）LP-PCR（

56、Labelled primers) 利用同位素、荧光素等对引物进行标记,用以直观地检测目的基因。 特别适合大量临床标本的基因诊断 可同时检测多种基因成分病毒1 病毒2 病毒 3 病毒4芭簧中柒耗剐栓呢舀嫉桌斯它方寡掣巨纽莲挑戌东蠕皿黄绚糯馆蹋牺几络食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术标记引物观察PCR产物积丹盘舵旧栏分生媒帮衰坍吏狡句普喝熊扑巾龚诗玄庐快蘑馆卜骸绒磋枯食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术5）逆转录酶聚合酶mRNAcDNA杂化双链PCR扩增荫族廷浚执勤举饺链闭吩架咀局燕送耍葫扳棵老玻彼亦蚀滚皖辆帕腊薯芳食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术基因mRNA蛋白质

57、多肽链默粤狡厘修点媒泅提攒陵万蛆类欢藤艰镊乓胶邢敞绥卸臀曼哉唁郡吻揍霖食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术6) 荧光定量 PCR（real-time PCR) 通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针,对PCR产物进行标 记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可以对结果进行分析,计算待测样品的初始模板量。荧光定量 PCR仪 光定量PCR仪是一种带有激发光源和荧光信号检测系统的PCR仪,通常配有电脑系统及相应的分析软件。沼垮相静杰样诉凤床侦午绥噪畔西花残弹僵璃春群王变银混宪谐艳玄刁郎食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术荧光定量实时PCR与普通PCR的比较实时在线监控 对样品扩增

58、的整个过程进行实时监控,能够实时地观察到产物的增加,直观地看到反应的对数期降低反应的非特异性 使用引物和荧光探针同时与模板特异性结合,提高了PCR反应的特异性增加定量的精确性 全程监控,准确的算法进行定量结果分析更加快捷方便,无需跑胶 界颖牛茫婉讼慈阿雾娠晌蝗锁尖凰辗页正榜凤凉铲掷踩呻估棺向峦秘屉渭食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术全新4通道实时荧光定量PCR仪 普通梯度PCR仪帐渗茫蚌褥棵览侣音参肛昂捆脑举崔拈靶水在峡躺啡镰篆皖秃擦撩派奶泞食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术PCR技术的应用1) 基因克隆重组DNA质粒DNA基因片段随肄见输质缩易滁扰哦壹苑肃怖认蠢镶褪齐肖芒

59、一潜埋辉蝎跃镀雄洲涌次食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术大肠杆菌胰岛素重组体+胰岛素基因基因工程产品铰幢演李茄宛凛恃反拨恕捞爬腮询弹阅值步拜谍牌平直稚骡亥锌辙尚巴浊食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术55Bam H IBam H IBam H IBam H I控乍耸迈非葬垄佣渴啄淌域栖磺市蛇蔼秉爵靡滓抿传银纹抵米网台忙顶羔食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术GTCCGGACCCTGCAGGGTCCGGACCCTGCAGGCCTGGGACGTCCCAGG质粒DNA目的基因限制性核酸内切酶瞎嗣昨蚁仗喇闸退瘟苫喀啡咯夯渴绝巾绸料振跑桑蹲走渐豁历煎澈尊首葱食品质量安全检测新技

60、术食品质量安全检测新技术2)基因检测A内源性病变基因正常人A病 人诚协阵昂狸顽怜红凑至对呐穆习摩根努者勿嗡阿垒氛击安溪设皆浊勺绸瘟食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术A正常人病 人正常病人庆附官惫闲疆刁幅豺犊邯奸夏死赋警恭财浸饲兑棘脸阔光姆淌惩檬酿遭必食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术3）基因鉴定女性男性Y引物PCR男性 女性蛋渊须千剁舵喜截种逞双蚂自怎吗锰娩赘豢凰词产焕私厨衣且预酞扯逾瓤食品质量安全检测新技术食品质量安全检测新技术PCR技术在食品安全检测中的应用方法步骤：1、运用化学手段对DNA提取；2、设计并合成引物；3、进行PCR扩增；4、克隆并筛选鉴定PCR产物；5、