重组人白细胞介素2课件

1、基因工程药物之 重组人白细胞介素-2基因工程药物 定义：先确定对某种疾病有预防和治疗作用的蛋白质，然后将控制该蛋白质合成过程的基因取出来，经过一系列基因操作，最后将该基因放入可以大量生产的受体细胞中去，这些受体细胞包括细菌、酵母菌、动物或动物细胞、植物或植物细胞，在受体细胞不断繁殖过程中，大规模生产具有预防和治疗这些疾病的蛋白质，即基因疫苗或药物。一、基本信息 （一）白细胞介素： 是由多种细胞产生并作用于多种细胞的一类细胞因子。由于最初是由白细胞产生又在白细胞间发挥作用，所以由此得名，现仍一直沿用。白细胞介素interleukin 缩写为IL。 现在是指一类分子结构和生物学功能已基本明确，具有

2、重要调节作用而统一命名的细胞因子，它和血细胞生长因子同属细胞因子。两者相互协调，相互作用，共同完成造血和免疫调节功能。白细胞介素在传递信息，激活与调节免疫细胞，介导T、B细胞活化、增殖与分化及在炎症反应中起重要作用.（二）白细胞介素-2为多肽类免疫增强剂。是一种淋巴因子，能刺激T细胞增殖分化，诱导产生细胞毒性T淋巴细胞（CTL），增强自然杀伤（NK）细胞活性，激活产生淋巴因子的杀伤（LAK）细胞和肿瘤侵润淋巴细胞（TIL），刺激B细胞增殖分化和分泌抗体，诱导干扰素和多种细胞因子的分泌。用于肿瘤辅助治疗和癌性胸、腹水的治疗il-2分子：il-2分子量为15kd，是含有113个氨基酸残基的糖蛋白，

3、在人类由第4号染色体上的一个基因编码。il-2具有一定的种属特异性，人类细胞只对灵长类来源的il-2起反应，而几乎所有种属动物的细胞均对人的il-2敏感。il-2受体(il-2r)：il-2的靶细胞包括t细胞、nk细胞、b细胞及单核-巨噬细胞等。这些细胞表面均可表达il-2r。il-2r包含3条多肽链：1条为链，分子量55kd;1条为链，分子量75kd;另1条为链，分子量64kd。链的胞内区较短，不能向细胞内传递信号，而链和链的胞内区较长，具有传递信号的能力。3种肽链单独与il-2结合亲和力较低，只有同时表达才能产生高度亲和力。二、生产制备生产制备的方式主要有两种：1、传统工艺制备2、基因工程

4、制备其中以第二种方法为主基因工程制备流程IL-2 cDNA 文库的构建IL-2表达利用mRNA杂交筛选IL-2 cDNA克隆与质粒载体pLY-4连接，并转入大肠杆菌纯化的IL-2制备包涵体，并用凝胶过滤层析纯化cDNA文库的构建IL-2 mRNA逆转录酶逆转录成单链cDNA末端脱氧核苷酸转移酶DNA聚合酶I双链cDNA蔗糖密度梯度离心G-C加尾法插入到pBR322质粒的PstI位点粒转化大肠杆菌得到IL-2 cDNA文库cDNA末端连接dCMP残基，寡聚（dG）1218为引物cDNA片段重组质三、药物信息 药典中有以下三种药物含有重组人白细胞素介素-2：1.注射用重组人白细胞介素-22.重组人

5、白细胞介素-2注射液3.注射用重组人白细胞介素-2（ ）注射用重组人白细胞介素-21.性状及功效高效表达人白细胞介素-2的大肠杆菌，经过发酵、分离和高度纯化后获得的重组人白细胞介素-2冻干制成，含有适宜稳定剂，不含添加剂和抗生素。外观为白色或者微黄色疏松体，加灭菌注射水后迅速溶解为澄明液体。用于治疗成人转移性肾细胞癌（RCC）及黑色素瘤等恶性肿瘤，也适用于癌性胸腹水的控制 2.用法用量（1）. 全身用药静脉滴注：10万一80万国际单位；皮下注射：50万100万国际单位；介入动脉灌注：40万l00万国际单位（2）.区域与局部给药 胸腹腔注射：30万l00万国际单位；肿瘤灶局部给药：根据瘤体大小决

6、定用药剂量。一般剂量为一次20万国际单位(IU)。注：药物采用氯化钠溶解。重组人白细胞介素-2注射液1.性状及功效(1).性状高效表达人白细胞介素-2的大肠杆菌，经过发酵、分离和高度纯化后获得的重组人白细胞介素-2制成，含有适宜稳定剂，不含添加剂和抗生素。外观为无色或者微黄色澄明液体。(2).功效1.用于肾细胞癌、乳腺癌、膀胱癌、肝癌、直肠癌、淋巴癌、肺癌等恶性肿瘤的治疗，用于癌性胸腹水的控制，也可以用于淋巴因子激活的杀伤细胞的培养。2.用于手术、放疗及化疗后的肿瘤患者的治疗，可增强机体免疫功能。3.用于先天或后天免疫缺陷症的治疗，提高病人细胞免疫功能和抗感染能力。4.各种自身免疫病的治疗，如

7、类风湿性关节炎等。5.对某些病毒性、杆菌性疾病、胞内寄生菌感染性疾病，如乙型肝炎、麻风病、肺结核等具有一定的治疗作用。 2.用法用量（1）.全身用药：1)皮下注射：重组人白介素-2（125 Ala）60100万IU/m2，皮下注射3次/周，6周为一疗程。2) 静脉注射：4080万U/m2加生理盐水500ml，滴注时间不少于4小时。3) 介入动脉灌注50100万IU/次，24周一次，24次为一疗程 。(2).区域与局部用药： 1)胸腔注入：用于癌性胸腔积液，重组人白介素2（125 Ala）100200万IU/m2次，尽量抽去腔内积液后注入。2)肿瘤病灶局部给药：根据瘤体大小决定用药剂量，每次用量

8、不少于10万IU，隔日一次,46次为一疗程。 注射用重组人白细胞介素-2（ ）1.性状及功效高效表达人白细胞介素-2 （ ）基因的大肠杆菌，经过发酵、分离和高度纯化后获得的重组人白细胞介素-2 （ ）冻干制成，含有适宜稳定剂，不含添加剂和抗生素。外观为白色或者微黄色疏松体，加灭菌注射水后迅速溶解为澄明液体。人白细胞介素-2 （ ）基因是人白细胞介素-2基因序列中原125位编码半胱氨酸的序列突变为编码丝氨酸的序列后的突变基因2.用法用量1.全身用药：1)皮下(或肌肉)注射：重组人白介素-2()20-100万国际单位/次，加2毫升无菌生理盐水溶解，皮下(或肌肉)注射，1-2次/天。2)静脉注射：6

9、0-200万国际单位/次，加无菌生理盐水500毫升，滴注时间不少于4小时。3)介入动脉灌注：100-200万国际单位/次。2.区域与局部给药：1)胸腹腔注入：用于癌性胸腹腔积液，重组人白介素-2()100-300万国际单位/次，尽量抽去腔内积液后注入，2-3次/周。2)心包积液：心包内注射，200万国际单位/次， 尽量抽去心包积液后注入，1次/周。3)肿瘤病灶局部给药：根据瘤体大小决定用药剂量，10-20万国际单位/次，隔日一次。四、注意事项不良反应：各种不良反应中最常见的是发热、畏寒、疲乏等，多与用药剂量有关；个别患者可出现恶心、呕吐、类感冒症状；皮下注射者局部可出现红肿、硬结、疼痛；使用较

10、大剂量时，可能会引起毛细血管渗漏综合征，表现为低血压、体重增加等。神经系统受到影响，可发生行为变化、认知障碍禁忌1、对本品成份有过敏史的病人。2、高热、严重心脏病、低血压者 严重心肾功能不全者、肺功能异常或进行过器官移植者。3、重组人白细胞介素-2既往用药史中出现过与之相关的毒性反应五、发展前景目前研究是对其在用药前进行化学修饰，主要采用PEG修饰：1.具体有三聚氯氰活MPEG修饰2.MPEG 硝基苯基碳酸盐修饰。3.修饰物和rhlu-2的投入比、反应环境的PH、修饰反应的时间、1%PEG4000的加入都会影响到修饰产物的活性。修饰后的产物经过疏水层析和凝胶过滤即可被提纯。目前已经证明rhIL

11、-2 经不同的 PEG 化处理后，其循环半衰期均有不同程度的提高。其水溶性也得到极大提高，可不用 SDS 助溶在常温下保持长期稳定。谢谢观赏！一.白细胞介素1与白细胞介素2的区别？IL-1：又称淋巴细胞刺激因子。1、细胞来源：主要由活化的单核巨噬细胞产生。2、存在形式：IL-1和IL-1。3、主要生物学功能：（1）、局部低浓度免疫调节：协同刺激APC和T细胞活化，促进B细胞增殖和分泌抗体。（2）、大量产生内分泌效应：诱导肝脏急性期蛋白合成；引起发热和恶病质。IL-2：又称T细胞生长因子，TCGF。1、细胞来源：主要由T细胞产生。2、作用方式：以自分泌和旁分泌方式发挥效应。3、主要生物学功能（1

12、）、活化T细胞，促进细胞因子产生；（2）、刺激NK细胞增殖，增强NK杀伤活性及产生细胞因子，诱导LAK细胞产生；（3）、促进B细胞增殖和分泌抗体；（4）、激活巨噬细胞。二.白细胞介素2对自身免疫疾病的作用机理?IL-2除可作为T细胞生长因子(TCGF) 促进T细胞的增殖分化外，还能限制T细胞的反应并产生免疫耐受.因而可用于自身免疫性疾病的防治。白细胞介素-2本身就是许多免疫抑制剂的作用靶点, 白细胞介素-2受体亚单位也是重要的治疗靶点。因此, 应用特异的白细胞介素-2受体抗体进行选择性治疗可以最大程度地杀伤病原细胞,而对非亚单位细胞的不良反应限制到最小,因此用于治疗系统性红斑狼疮和类风湿性关节炎。三.IL-2受体怎样与IL-2结合？白细胞介素-2通过与效应细胞膜上的专属性受体( IL - 2R )结合而发挥作用。白细胞介素-2通过效应细胞膜上的白细胞介素-2受体发挥作用。白细胞介素-2受体由链、链和链3种亚基组成, 只有三者的聚合体才能构成完整的高亲和力的IL - 2R。可溶性白细胞介素-2受体( sIL- 2R )是活化淋巴细胞膜表面白细胞介素-2受体链成分的Tac抗原。当IL- 2R从细胞膜上经酶解脱落后进入血液，就形成了可溶性IL-2R( sIL-2R) ，在体液中，s1L-2R 可以与细胞膜