实验诊断实验课课件

1、实验(shyn)一白细胞计数 共五十二页一目的：熟悉白细胞计数方法，掌握(zhngw)白细胞计数参考值及临床意义。二原理：用2%稀醋酸(冰乙酸)作白细胞计数稀释液，可使红细胞溶解，留下白细胞，用血细胞计数板计数一定体积中的白细胞数，计算出每升血液中白细胞的总数。三器材：白细胞稀释液、显微镜、计数板、采血针、小玻棒、小试管、试管架、微量吸管、小纱布、75酒精棉球、消毒干棉球共五十二页四步骤：1.以2冰乙酸溶液为白细胞计数稀释液，用吸管准确吸取稀释液 0.38ml，置于清洁干燥的小试管中。2.毛细血管采血法:用微量吸管采血至20微升处，擦去管尖外围多余的血液，将管内血液迅速注入试管底部，并用上清液

2、将管内残存血液洗净，立即混匀。待液体呈褐色后，再振荡均匀，用小玻棒取此液注入计数池内，静置23分钟。3.用低倍镜计数四角(s jio)的四个大方格内的白细胞数(N)。压线细胞计数原则：数上不数下，数左不数右。共五十二页五 计算： 四个大方格(fn )内白细胞数（N）(N)/41020106白细胞数/升 式中：四个大方格内白细胞总数/4，算出每个大方格（即0.1微升）内白细胞平均数。 10 把0.1微升换算为1微升。 20 为血液稀释倍数。 106 将1微升换算为1L。六 参考值 ： 成人 （410）109/L 6个月至2岁婴儿（1112）109/L 新生儿 （1520）109/L共五十二页八注

3、意事项：1稀释倍数一定要准确（包括(boku)采血量和加稀释液量）。2小试管、计数板一定要清洁，以免杂质、微粒等被误认为细胞。3.一定要待稀释液转化为棕褐色后方可进行计数，此时红细胞已完全破坏，否则可因红细胞残留而干扰计数，使结果偏高。 九思考题： 白细胞总数增多的临床意义？ 共五十二页共五十二页共五十二页共五十二页实验(shyn)二红细胞计数共五十二页一 实验目的：掌握红细胞计数原理和方法，熟悉红细胞参考值及临床意义。 二 实验原理：用红细胞稀释(xsh)液将血液稀释(xsh)一定倍数，置于血细胞计数板内，于显微镜下计数一定体积内的红细胞数，然后 再计算出每升血液内的红细胞数。 三 实验器材

4、和试剂： 红细胞稀释液（0.85%NaCl）、显微镜、 小试管、 细胞计数板、盖玻片、微量吸管、试管架、采血针、小 玻棒、75%酒精棉球、小纱布、消毒干棉球、报告单。 共五十二页四 实验步骤：1.取试管1支，加红细胞稀释1.99ml。 2.消毒(xio d)皮肤，用采血针刺破皮肤，使血液自动流出，拭去第一滴血，用一次性微量吸管准确取血10微升。 3.去管尖外部余血，轻轻注入红细胞稀释液底部，再吸取上层稀释液清洗吸管2-3次，立即摇匀。 4.倾斜试管用小玻棒沾取红细胞悬液，注入血细胞计池内，要求一次充好，不要产生气泡。静置2-3分钟，使红细胞完全沉降。 5.将计数板置于显微镜下用 高倍镜计数中央

5、大方格红细胞计数区四个角和中间的一个中方格共5个中方格内 的红细胞。凡压在中方格边缘上的红细胞，以数上不数下，数左不数右的原则进行计数。共五十二页共五十二页五 计算R（五个中方格内RBC数） R510106200= .1012个/升式中：5：5个中方格内红细胞数换算为1个大方 格内红细胞数10：1个大方格容积（0.1微升）换算成1微升106：1微升换算为1升200：血液稀释倍数六 实验报告方式：.1012/L七 正常(zhngchng)参考值： 成年男性：4.00-5.501012/L 成年女性：3.50-5.001012/L 新生儿：6.00-7.001012/L共五十二页 八 注意事项：1

6、.显微镜物镜接近计数板时应注意，勿损坏计数板及镜头。2.计数时进入显微镜的光线要适中，否则不易找到方格。计数池内的细胞分布要均匀，各中方格的细胞相差(xin ch)不应超过10%，否则重新计数。3.试管、计数板须清洁，以免杂质、微粒等被误认为红细胞。4.稀释倍数要准确。5.计数完毕后，用清水将计数盘和盖玻片冲洗干净，待干后备用。 九 思考题：1.计数不准确的常见原因有哪些？2.红细胞数增多减少的临床意义？共五十二页 实验(shyn)三 白细胞分类计数共五十二页 一 实验目的(md)：掌握白细胞分类计数原理和方法，熟悉白细胞分类计数的参考值及临床意义。 二 实验原理：白细胞的胞质、胞核和胞桨颗粒

7、等含有不同的化学成分，其与各种染料的亲和力不同。经染色后能着上不同的颜色，根据颜色的差异，可将白细胞区别并进行分类计数。 三 实验器材和试剂：显微镜 擦镜纸 75 酒精 推玻片 吸水纸 消毒干棉球 载玻片 染色架 瑞氏染色液 采血针 香柏油 缓冲液 吸球 二甲苯 共五十二页四 实验步骤：1.血涂片制备- 取末梢血一滴，置于载玻片一端，将推片的一端，放在血滴前面，逐渐后移接触血滴，血滴好沿推片散开，然后使推片与载玻片间成3045夹角，平稳向前推动至载玻片的另一端，玻片上便留下一均匀薄层(bo cn)血膜，自然干燥。2. 染色-将干燥后的血膜片置于染色架上。用瑞氏染液35滴，覆盖整个血膜，固定细胞

8、0.51min。滴加等量或稍多的缓冲液于血膜上，用吸球将其吹匀，染色510min。平放玻片，用流水从玻片的一侧冲去染液，待血片自然干燥或用滤纸吸干，即可镜检。3.镜检-在低倍镜下观察细胞着色情况，然后选择血涂片体尾交界部染色良好的区域滴加一滴香柏油，在油镜下按一定的方向顺序对所见到的每一个白细胞进行分类，既不得重复亦不遗漏，共计数100个白细胞。求出各类白细胞所占的百分率。共五十二页 瑞氏染色外周血五种白细胞形态(xngti)特征： 细胞类型大小（m）外形细胞核细胞质核形染色质着色颗粒中性杆状核粒细胞1015圆形弯曲呈腊肠样，两端钝圆深紫红色粗糙淡橘红色量多，细小，均匀布满胞质，浅紫红色中性分

9、叶核粒细胞1015圆形分为25叶，以3叶为多深紫红色粗糙淡橘红色量多，细小，均匀布满胞质，浅紫红色嗜酸性粒细胞1116圆形分为2叶，呈眼镜样深紫红色粗糙淡橘红色量多粗大，圆而均匀，充满胞质，鲜橘红色嗜碱性粒细胞1012圆形核结构不清，分叶不明显粗而不匀淡橘红色量少，大小和分布不均，常覆盖核上，蓝黑色淋巴细胞615圆形或椭圆形圆形或椭圆形，着边深紫红色块粗糙透明淡蓝色小淋巴细胞一般无颗粒，大淋巴细胞可有少量粗大不均匀，深紫红色颗粒单核细胞1020圆形或不规则形不规则形，肾形，马蹄形，或扭曲折叠淡紫红色，细致疏松呈网状淡灰蓝色量多细小，灰尘样紫红色颗粒弥散分布于胞质中共五十二页中性(zhngxng

10、)杆状核粒细胞 中性(zhngxng)分叶核粒细胞淋巴细胞 单核细胞嗜碱性粒细胞嗜酸性粒细胞共五十二页 外周血各类白细胞的百分率及绝对值共五十二页血涂片(t pin)的制备共五十二页 五 注意事项：1.所制血膜片一定要均匀，厚薄适宜，头、体、尾分明。2.玻片需清洁，血膜干透后才可固定染色。3.染色时间的长短与染液的浓度、室温高低及有核细胞多少有关。染液浓度愈小、室温愈低、细胞愈多、所需时间愈长。必要时可增加染液量或延长时间。4.染液不宜过少，以免蒸发干燥，导致染料沾着于血膜上不易冲掉。5.冲洗时不可先倒掉染液，应让流水从血膜一端缓缓将染液冲去，以免染料残渣(cn zh)附在血膜上。六 思考题：

11、 白细胞分类计数的临床意义？共五十二页实验(shyn)四网织红细胞计数共五十二页一 实验目的： 熟悉网织红细胞计数的原理(yunl)和测定方法，掌握网织红细胞参考值及临床意义。二 实验原理： 网织红细胞是尚未完全成熟的红细胞，其胞质中含有核糖体、核糖核酸等嗜碱性物质，经新亚甲蓝活体染色后呈浅蓝或深蓝色的网状结构，可区别于完全成熟的红细胞。三 实验器材和试剂：显微镜、10g/l新亚甲蓝染液，试管、载玻片、香柏油共五十二页四 实验步骤：1. 取小试管1支加10g/l新亚甲蓝染液1滴。2. 加入(jir)血液1滴于上述试管中，混匀。3. 室温下放置1015分钟后，取1滴制成血膜片。 4. 在低倍镜下

12、选择细胞分布均匀，着色清晰的部位，用油镜计数1000个红细胞内网织红细胞数。五 计算：网织红细胞百分数网织红细胞数/1000 六 参考值： 成人：0.005-0.015 (0.5%1.5%) 新生儿：0.03-0.06 (3% 6% )共五十二页 七 注意事项：1.网织红细胞必须用新鲜血液活体染色(rns)才能显示，染液与血液的比例1：1为宜2. 血膜制备技术很重要。红细胞应均匀散开，如有重叠则影响结果的准确性。网织红细胞体积较成熟红细胞体积稍大，多分布于涂片的尾部及两侧，故进行计数时应巡视整个血涂片中网红细胞分布情况再进行计数。3.染料配制前必须过滤，放置保存过程中应防止有任何沉淀出现以影响

13、计数结果。4. 为便于计数，可使用米勒窥盘进行计数。5.血液与染液混合时间必须足够长。八 思考题：网织红细胞的临床意义？共五十二页Miller窥盘为一厚1 mm，直径19mm的圆形玻片，玻片上的微细刻线划分成大小两个正方形。B为小正方形，A为大正方形。B位于A之内， 如附图(f t)所示。其中B的边长为A的边长的13，故其面积为A的19。将Miller窥盘置于接目镜内检测网织红细胞涂片。用小正方形（B）计数红细胞,大正方形（A）计数网织红细胞数,再接下式计算:网织红细胞 %= A格内网织红细胞/ （B格内红细胞数9 ）100% 共五十二页实验(shyn)五凝血酶原时间（PT）测定凝血酶时间（T

14、T）测定共五十二页一 实验目的：掌握PT,TT实验的原理、操作方法和临床意义。二 实验原理： PT原理：在受检血浆中加入足量的凝血活酶和钙离子，测定血浆凝固所需的时间，即为血浆凝血酶原时间。本试验是外源性凝血系统常用的筛检试验，此外，常利用本试验对口服抗凝剂治疗进行监控(jin kn)。 TT原理：受检血浆中加入标准化的凝血酶溶液后，测定血浆凝固所需要的时间，即为血浆凝血酶时间，TT主要用于检测血浆纤维蛋白原的减少或抗凝物质的增多。三 实验试剂和器材：待测血浆、37度水浴箱、硅化试管、秒表、加样枪、氯化钙凝血活酶试剂、凝血酶溶液。共五十二页四 实验步骤：PT: 取待测血浆0.1ml，37 孵育

15、3分钟，加入(jir)37 预温PT试剂0.2ml,记录凝固时间，即为PT值。TT：取37 预温待测血浆0.2mL,加入TT试剂0.2ml，记录凝固时间，即为TT值。注意：TT试剂不需37 预温，15-25 室温直接使用。五 参考值：PT 10-14秒 TT 10-16秒共五十二页六注意事项：1.采血必须使用一次性塑料注射器或硅化玻璃注射器，贮血必须使用塑料试管或硅化玻璃管。2血浆分离(fnl)后应尽快测定。3血浆预温不宜超过10分钟。4凝血活酶预温不可超过30分钟。5待测血浆应使用 0.109mo 1L枸橼酸钠抗凝。6手工操作时，凝血酶原和凝血酶时间的终点计算以出现混浊的 初期凝固为准。 7

16、. 测定温度365385，过低或过高温度均使PT、TT延长。共五十二页七 临床意义：1.PT延长 ： 见于先天性凝血因子异常，如因子、缺乏症；后天性凝血因子异常，如弥漫性血管内凝血、原发性纤溶、维生素K缺乏症、严重肝病；血循环中有抗凝物质，如口服抗凝剂、肝素和FDP等。 2PT缩短 :见于高凝状态和血栓性疾病、先天性因子增多症、口服避孕药等。3.TT延长：以DIC时纤维蛋白原消耗为多见，也有部分属于先天性低（无）纤维蛋白原血症、原发性纤溶及肝脏病变。也可见于肝素增多或类肝素抗凝物质增多。 4.TT缩短：极为罕见，主要见于某些异常蛋白血症或巨球蛋白血症时，此外较多是技术原因，如标本(biobn)

17、在4度环境中放置过久，组织液混入血浆等。共五十二页实验(shyn)六尿常规检查共五十二页尿液的常规检查包括：物理学检查：尿量、气味、颜色、透明度化学检查：蛋白、糖、PH、酮体、尿胆红素、尿胆原、尿亚硝酸盐、尿隐血(ynxu)、白细胞、比密、维生素C尿沉渣（显微镜）检测：尿液细胞、管型、结晶、上皮等一般性状检查：1、尿量： 正常尿量 1000-2000ml/24hr平均1500ml 少尿：400ml/24hr或持续17ml/hr 无尿：2500ml/24hr共五十二页2.尿液外观：正常(zhngchng)尿的颜色：多为澄清透明至淡黄色或琥珀色，颜色常受食物、药物、尿色素（尿胆原、尿胆素、尿卟啉）

18、的影响。病理性尿液外观1.血尿：尿中含有一定量红细胞，可呈淡红色云雾状、水洗肉样（量少时）、红色血凝块（量多时）。2.肉眼血尿：每升尿中含血量超过1ml，即可出现淡红色。3. 显微镜血尿：尿外观无明显变化，离心沉淀后镜检，平均3RBC/Hp4.血红蛋白尿 ：可使尿液呈浓茶色、红葡萄酒色或酱油色。隐血试验为阳性（正常尿液试验隐血为阴性）血红蛋白尿：见于严重的血管内溶血：阵发性血红蛋尿、蚕豆病、血型不合的输血反应。共五十二页5.胆红素尿：尿就中含有(hn yu)大量结合胆红素，呈豆油样改变，振荡后出现黄色的泡沫且不易消失。 常见：阻塞性黄胆和肝细胞性黄疸。6.脓尿和菌尿：新鲜排出的尿液呈白色混浊（

19、脓尿）或云雾状（菌尿）加热加酸不溶解，内含脓细胞、炎性渗出物或细菌。 常见：泌尿道感染：肾盂肾炎、膀胱炎尿中红细胞尿中白细胞共五十二页脓细胞(xbo)共五十二页7.乳糜尿和脂肪尿：乳糜尿：乳糜液逆流进尿中所致外观呈不同程度乳白色，当含有较多血液时呈乳糜血尿。常见：肿瘤、结核、丝虫病及周围淋巴管梗阻。 脂肪尿：尿中出现脂肪小滴。常见：脂肪挤压损伤、骨折、肾病综合征，可通过乙醚(y m)等有机溶剂提取乳糜颗粒、脂肪小粒使尿液变清，可与其他混浊尿鉴别。气味：来自尿中的挥发性酸和酚类，新鲜的尿特殊微弱芳香气味氨臭味：久置尿、但尿液新鲜时可为慢性膀胱炎、慢性尿潴溜苹果样气味：糖尿病、酮症酸中毒蒜臭味：有

20、机磷中毒进食葱、韭菜、蒜和某些药物可呈相应气味。共五十二页干化学(huxu)检查共五十二页试剂带原理绒制层：包括碘酸盐层和试剂层：碘酸盐层：可以破坏维生素C等干扰物质，试剂层：含有试剂成分(chng fn)，主要与尿液中测定物质发生化学反应，产生颜色变化；吸水层：可使尿液均匀快速的浸入，并能抑制尿液流到相邻的反应区；塑料底层：作支持体。共五十二页各项目测定(cdng)原理项目 缩写符号 反应原理 PH PH PH指示剂（甲基红和溴麝香草酚兰） 蛋白质 PRO PH指示剂的蛋白质误差法 葡萄糖 GLU 葡萄糖氧化酶法 隐血 BLD Hb类过氧化酶法 共五十二页各项目(xingm)测定原理项目 缩

21、写符号 反应原理 胆红素 BIL 偶氮反应法 尿胆原 URO 醛反应法，重氮反应法 酮体 KET 硝基铁氢化钠法 亚硝酸盐 NIT 亚硝酸盐还原法 白细胞 LEU 脂酶法 比密 D(SG) 多聚电解质离子解离法 共五十二页 尿沉渣（显微镜）检测 尿液沉渣检测是对尿液离心沉淀物中有形成分的鉴定。 传统的尿液沉渣检测：显微镜对尿液沉渣进行定性、定量检查及有形成分的记数。 现在用尿液分析仪、尿沉渣分析仪。对有形成分检测细胞、管型和结晶(jijng)等进行自动检测。 尿沉渣检测的标准方法： 取新鲜混匀的尿液10ml于离心管内，以1500rmin离心5min，弃去上清液，留取0.2ml沉渣液，混匀后用下列方法检查： 玻片法：尿沉渣定量分析板法：本法是用特制的尿沉