果胶酶活力的测定

1、生物产品检验技术课程单元教学设计卡一、教案头课程单元果胶酶活力的测定授课对象生物技术专业单元学时2授课教师授课地点授课时间教 学 目 标能力（技能）日标知识目标素质目标掌握分光光度法测 定的果胶酶活力的操 作流程；掌握果胶酶酶液、 底物母液、缓冲液的 配制方法；掌握分光光度计的 使用方法；能够精确完成半乳 糖醛酸标准曲线绘 制；酶活力的计算。掌握还原法测定果胶 酶活力的原理；掌握还原法测定果胶 酶活力的方法；养成认真主动学习的习 惯；能掌握常用仪器的使用 和保养方法；养成完成实训后及时整 理实训场所的良好职业 素养；养成良好的团队合作精 神。能力训练任务还原法测定果胶酶活力教 学 重 占 八、

2、 与 难 点重点难点分光光度法测定的果胶酶活力 的操作流程；酶活力的计算方法。1.半乳糖醛酸标准曲线绘制；教 学任务一1.果胶酶的性质2.果胶酶的生产流程任务二还原法测定果胶酶活力的原理还原法测定果胶酶活力的操作流程还原法测定果胶酶活力的操作要点酶活力的计算过程设计时间教 学 设 计 与 组 织（一）导入新课通过阐述果胶酶组成、特性、应用，使同学们认识到果胶酶 活力测定的重要性。组成：含酯酶、水解酶和裂解酶三种成分，分别对果胶质起 解酯、水解、裂解作用，生成半乳糖醛酸和低聚半乳糖醛酸、不 饱和半乳糖醛酸和低聚半乳糖醛酸等。特性：热稳定性较差，以果胶为底物，60C保温15min,酶 活力剩余23

3、%O酶作用的最适温度为4550C,若低于此温度， 作用时间要相应延长。Fe Ca Zn、Sn等离子对酶有抑制作用， 在应用时应注意容器的选择。应用：果汁澄清、橘子去囊衣、莲子脱内皮、蒜脱皮、中药 成分的提取等。（二）介绍果胶酶的生产流程斜面培养种子培养熏珂莓板野和云衣留生产果胶酶工 艺流程（三）还原法测定罪蠢也喂验原理？PE、PG和PMG yXJ胶质起解酯作用产生甲醇和果胶酸； 水解作用产生半乳臀醛矗寡聚半乳糖醛酸；裂解作用产生不饱 和醛酸和寡聚半乳 铜离子共热，使其生成蓝色物质。根史呕糖醛酸显色反应确定产物量，表示 酶活力。压滤炫些产物的醛基在碱性溶液中与两价 化亚铜沉淀。氧化亚铜与砰钳酸反

4、应沉淀干燥5min.lOmin（四）材料用具1）材料商品果胶酶。2）试剂5min10min（1）甲试剂：称取纯酒石酸钾钠12 g,无水碳酸钠24 g,加 水250 ml,搅匀，向此液中缓慢加入10%硫酸铜溶液40 ml,碳 酸氢钠16 g。另取500 ml热水，加入无水硫酸铜180 g,煮沸驱 逐溶存气体。冷却后，注入1 L容量瓶中，两液混合定容至1 L。 长期存放后，如有少量红色氧化亚铜沉淀，应予以过滤，滤液可 在室温下长期保存。（2）乙试剂：称取钥酸（NH4）Mo4024 - 4H2025 g 溶于 450 ml 水中，再缓慢加入浓硫酸21 mlo另取25 ml水，溶解纯结晶碑 酸二钠（N

5、a2HAsO4. 7H20） 3 g（可用碑酸 1.28 g,以 1 mol / L NaOH 19. 24 ml溶解，再加水4. 75 ml代替此液）。然后，充分混合， 在37C放置24-48 h,溶液逐渐变黄色，移至棕色细口瓶中保存。（3）100M-g/ml半乳糖醛酸钠溶液：称取半乳糖醛酸钠0. 1 g, 先用少量蒸馅水溶解后，再加水定容至1 000ml。（4）酶液制备：将酶粉适当稀释，过滤备用，参考实训一。果 实均质后，离心取上清液。稀释备用。3）器具分析天平、变温电炉、恒温水浴锅、分光光度计、秒表等。（五）操作流程lOmin（六）操作要点1.绘制标准曲线 取100ptg/ml半乳糖醛酸

6、钠0.2, 0.4, 0.6,0. 8, 1. 0 ml,再分别加水至1 mlo向各管加甲液试剂1 ml,置 沸水浴煮沸10 min,冷至不烫手时加乙试剂1 ml,稀释至12. 5 mlo 在波长620 nm处比色。以吸光度值A为纵坐标，半乳糖醛酸钠微 克数为横坐标绘制标准曲线。各管半乳糖醛酸钠含量见下表。管号空白12345半乳糖醛酸钠溶液，ml00. 20.40.60. 81. 0甲试剂/ ml111111乙试剂/ml111111半乳糖醛酸钠/ug0204060801002.酶样测定取果胶溶液0.5 ml,在50C水浴中保温3 min平衡后，加稀 释酶液0.5 mlo保温3 min后立即加入

7、甲试剂1 ml,沸水浴煮沸 10 min,冷却，加乙试剂1ml,加水定容至12.5 ml。在波长620 nm处比色。查标准曲线确定0. 5ml稀释液作用后生成的产物微克 数。（七）酶活力的计算酶的比活力定义：在一定条件下，每小时由底物产生1 mg半 乳糖醛酸的酶量定为1个酶活力单位。D=SX60XnX 1H- （0. 5X30X 1000）式中，D酶的比活力单位，U/g;30反应时间，min；SA62。相当的半乳糖醛酸微克数；60换算为lh；0. 5酶液的体积ml;n酶液的稀释倍数；30min30min1/1000由ug换算成mgo（八）单元课小结由果胶酶的性质应用引入，使同学了解学习测定果胶酶活力的目的、意义。掌握正确的学习方法。安排下节课的学习任务。建立班级学习小组，每4人组成一个学习小组，由班长、 学习委员和小组长组织学习兴趣小组，协助代课老师组 织教学。思考讨论布置思考题。5min.lOmin5min教 学 仪 器 设 备恒温水浴锅。分光光度计。变温电炉。分析天平。秒表。教 学 资 料教材：生物产品分析与检验技术，王苴主编，华中科技大学出版社，2012 年1月教学