皮肤病的实验室检查和辅助检查皮肤病学课件

1、 其他常用实验室技术第一节 免疫组化技术第二节 真菌检查第三节 变应原检测第四节 滤过紫外线检查第五节 性病检查第六节 蠕形螨、疥螨和阴虱检查第七节 分子生物学技术第一节 免疫组化技术一、适应证 大疱性皮肤病、结缔组织病等自身免疫性皮肤病、某些感染性皮肤病及皮肤肿瘤的诊断和鉴别诊断。二、方法、原理及结果分析a、直接免疫荧光法（DIF）b、间接免疫荧光法（IIF）c、免疫酶标法a、直接免疫荧光法（DIF）：主要用于检测病变组织或细胞中存在的抗体或补体。将冷冻切片组织固定于玻片上，滴加荧光素标记的抗人免疫球蛋白或抗体C3抗体，经孵育、清洗等处理后，置于荧光显微镜下观察。若组织中有抗人免疫球蛋白或C

2、3沉积，则荧光抗体与之结合呈现荧光。荧光显示的部位通常为棘细胞膜、皮肤基底膜带、血管壁。棘细胞间：天疱疮皮损可见棘细胞间IgG、IgA、IgM或C3沉积呈网状。皮肤基底膜带 ： 红斑狼疮：基底膜带90%以上出现IgG、C3沉积，呈颗粒状 类天疱疮：基底膜带90%以上出现IgG、C3沉积，呈线状 线性IgA大疱病：IgA线状沉积于基底膜带。血管壁：多种皮肤血管炎的皮肤血管壁有IgM、 C3沉积，皮肌炎的病变肌肉间质血管壁有IgM、 C3沉积。 b、间接免疫荧光法主要用于检测血清中血清中存在的自身抗体，并可做抗体滴度测定。底物取自正常人皮肤或动物组织，将患者血清滴于底物上，再滴加荧光标记的抗人免疫

3、球蛋白抗体等，荧光显微镜下观察。若血清中存在循环自身抗体，荧光标记的抗人球蛋白抗体即可与结合到底物上的抗体结合，呈现荧光。c、免疫酶标法机制与间接免疫荧光法类似，主要标记细胞的某种特异性成分，可用于肿瘤的鉴别诊断。第二节 真菌检查一、采集标本： 1、浅部真菌的标本：毛发、皮屑、甲屑、痂。 2、深部真菌的标本：痰、尿液、粪便、脓液、口腔、或阴道分泌物、血液、脑脊液、各种穿刺液和活检组织。二、检查方法 1、直接涂片：取标本置玻片上，加一滴10%KOH溶液，盖上盖玻片酒精灯上微热轻压盖玻片使标本透明低倍镜下检查有无菌丝及孢子高倍镜下证实。此法不能确定菌种。 2、墨汁涂片：用于检查隐球菌及其他有荚膜的

4、的孢子。取一小滴墨汁与标本混合，盖上盖玻片后直接镜检。 3、涂片或组织切片染色：染色可更好地显示真菌形态和结构。革兰染色适应于白念、孢子丝菌等，瑞氏染色适应于组织包浆菌，PAS染色可将多数真菌染成红色。 4、培养检查：使真菌检出率高，确定菌种。标本接种于葡萄糖蛋白胨琼脂培养基上室温或37下培养1-3周鉴定菌种。第三节 变应原检测一、斑贴试验 根据受试物的性质配制适当浓度的浸液、溶液、软膏或原物作为试剂，以适当的方法将其贴于皮肤，一定时间后观察机体是否对其产生超敏反应。临床上用于检测IV型超敏反应。适应症：接触性皮炎、职业性皮炎、手部湿疹、化妆品 皮炎方法：受试物制成浸液、溶液、软膏或原物置于4

5、层1cm1cm 纱布上，用稍大透明玻璃纸覆盖，周边固定。同时做多个不同试验物时，用铝制小室斑试器贴于背部或前臂屈侧，每两个间隔大于4cm。并设阴性对照。结果及意义：一般在48小时去除斑贴，间隔30分钟观察结果。 受试部位无反应 为（） 皮肤有淡红斑为可疑反应（） 出现轻度红斑、浸润及少量丘疹为阳性（+） 出现水肿性红斑、丘疹或水疱为强阳性（+） 显著红肿或浸润聚合性水疱或大疱为超强阳性反应（+）临床意义：阳性者说明患者对受试物过敏，但应排除原发性刺激或假阳性反应；原发刺激反应除去受试物皮肤反应会减弱；真阳性反应除去受试物后24-48小时反应增强。 注意事项：不宜在皮肤病急性发作期间进行试验，不

6、宜用高浓度的原发性刺激物测试；受试前至少1周及受试期间避免使用糖皮质激素或免疫抑制剂，受试前3天或受试期间避免使用抗组胺药物，以免出现假阴性；受试期间避免淋浴淋湿斑贴、避免过度牵拉斑贴部位或过度体力活动；可疑反应可重复试验；在受试期间发生全身过敏反应如荨麻疹、哮喘等或局部炎症反应过重应及时到医院就诊，必要时终止试验。二、点刺试验及划破试验适应症：荨麻疹、特应性皮炎、药疹等方法：一般选前臂屈侧为受试部位，局部清洁消毒待2分钟后按说明书滴试剂及点刺5-10分钟后拭去试液20-30分钟读试验结果。结果：与阴性对照（生理盐水）相同为（-）； 与阳性对照（组胺）相同为阳性（+）； 较强为（+）；较弱为（

7、+）或（+）三、皮内试验 目前最常用于药物速发型超敏反应第四节 滤过紫外线灯检查滤过紫外线（Wood灯）是由高压汞灯作为发射光源，通过由含9%镍氧化物的钡硅酸滤片发出320-400mm波长的光波。方法：暗室内患处置于Wood灯下直接照射。临床意义： 铁锈色小孢子菌 白癣 羊毛状小孢子菌 亮绿色荧光 石膏样小孢子菌 黄癣 - 暗绿色荧光 花斑癣 马拉色菌 棕色荧光 紫色毛癣菌 无荧光 断发毛癣菌 无荧光 红 癣 - 珊瑚红色荧光 痤疮丙酸杆菌 - 黄白色荧光 假单胞菌感染 绿色荧光第五节 性病检查淋球菌检查衣原体检查支原体检查梅毒螺旋体检查杜克雷嗜血杆菌检查醋酸白试验毛滴虫检查淋球菌检查适应症

8、直接涂片淋球菌感染的急性期检查 分离培养慢性淋病与无症状感染者方法 1. 标本采集：男性用含无菌生理盐水的藻酸钙棉拭子，伸入尿道2cm-4cm，轻轻转动取出分泌物；女性先用无菌的脱脂棉擦去阴道内粘液，用无菌的藻酸钙脱脂棉拭子插入宫颈内1cm-2cm处旋转取出分泌物；患结膜炎的新生儿取结膜分泌物；前列腺炎患者经按摩后取前列腺液。 2. 直接涂片：加热固定后革兰氏染色油镜下观察。 3. 细胞培养：标本立即接种于血琼脂或巧克力琼脂培养基。置于5-10%的CO2 孵箱，相对湿度80%以上，35-37，24-48h培养后，挑可疑菌落后涂片镜检。也可用氧化酶试验或糖发酵试验进一步证实。结果 涂片：镜检见大

9、量多核细胞，细胞内外可找到成双排列，呈肾形的革兰氏阴性双球菌。 培养：平皿上见圆形、稍凸、湿润、光滑、透明到灰白色菌落，直径0.5-1.0mm。临床意义 直接涂片阳性可初步诊断，阴性不能排除诊断，培养 阳性可确诊。注意事项取材时拭子伸入尿道口和宫颈口的深度要足够；男性患者最好在清晨首次排尿前或排尿后数小时采集标本；涂片时动作要轻柔，防止细胞破裂变形，涂片厚度、固定及革兰染色时间要合适。淋球菌直接涂片镜检衣原体检查1、细胞培养法 将每份标本接种于3个培养瓶中，置37培养3-4日，取出盖玻片，经吉姆萨染色后镜检，查包涵体。2、衣原体抗原检测法 用商品试剂盒检测3、免疫荧光法 采集标本同淋球菌，吉姆

10、萨染色1小时，再用95%乙醇淋洗涂片，干燥。油镜下阳性标本可在上皮细胞质内找 到1个-3个或更多个呈兰色、深兰色或暗紫色包涵体。 支原体检查采集标本同淋球菌检查。也可用10ml中段尿离心，取 沉渣接种于液体培养基上，置5-10环境中，37恒温箱内培养24-72小时，观察颜色变化，如由黄色变为粉红色，可能有解脲支原体生长。取0.2ml培养物接种到固体培养基上，培养48小时，有典型“油煎蛋”状菌落中患者为阳性，可诊断支原体感染。梅毒螺旋体检查（一）梅毒螺旋体直接检查 方法 取病灶组织渗透液、淋巴结穿刺液或组织研磨液用暗视野显微镜检查，也可用镀银染色(棕黑色)、吉姆萨染色(桃红色)或墨汁负染色后用普

11、通光学显微镜检查，或用直接免疫荧光（绿色荧光）技术检查。（二） 非梅毒螺旋体抗原血清试验 快速血浆反应素环状卡片试验（RPR） 1、卡片定性试验：取50ul待检血清加入卡片的圆圈内，涂均匀。用专用滴管加入摇匀的抗原1滴，旋转8分钟后观察结果。 结果阳性：卡片圆圈中出现黑色凝聚颗粒和絮片。 结果阴性：无凝聚块，仅见均匀亮灰色。 2、卡片定量试验：把待检血清用等量盐水作六个稀释度，即1:1；1:2；1:4；1:8；1:16；1:32，每个稀释度取50ul血清加入卡片圆圈中。 （三）梅毒螺旋体颗粒凝集试验（TPPA） 阳性结果可明确诊断梅毒螺旋体检查临床意义 RPR为筛选试验,其敏感性高而特异性低,

12、可出现假阳性或假阴性。 假阴性结果常见于：一期梅毒硬下疳出现后2-3周内； 感染梅毒立即治疗； 晚期梅毒； 二期梅毒的“前带现象”。 假阳性结果常见于：某些结缔组织病；自身免疫性 疾病患者；海洛因成瘾者；少 数孕妇及老人等。 TPPA试验，阳性结果可明确诊断。 杜克雷嗜血杆菌检查1、直接涂片 从淋巴结潜行穿刺取材，一次推涂成片，如见到呈鱼群状排列的细菌，即可做出初步诊断。2、细菌培养 用含血清和低浓度万古霉素的选择培养基培养，24-48小时后，菌落直径1-2mm，色灰黄、凸起、粗糙并能在培养基上推动，镜检或生化反应可确诊。醋酸白试验 人类乳头瘤病毒感染的上皮细胞与正常细胞产生的角蛋白不同，能被

13、冰醋酸致白，用5的冰醋酸2-5分钟后观察，皮损变为白色、周围组织不变色为阳性，可诊断为尖锐湿疣。毛滴虫检查悬滴法 加一滴温生理盐水于玻片上，在阴道后穹隆、子宫颈或阴道壁上试取分泌物混于温生理盐水中，立即在低倍镜下镜检，如有滴虫可见其呈波状移动。（男性可取尿道分泌物、前列腺液或尿沉渣检查）涂片染色法 将分泌物涂在玻片上，待自然干燥后用革兰氏染色或吉姆萨染色法等，镜检可见毛滴虫。 第六节 蠕形螨、疥螨和阴虱检查一蠕形螨检查挤刮法 选取鼻沟、颊部及颧部等皮损区，用刮刀或手挤压，将挤出物置于玻片上，滴一滴生理盐水，盖上盖玻片并轻轻压平，镜检有无蠕形螨。透明胶带法 将透明胶带贴于上述部位，数小时或过夜后，取下胶带复贴于载玻片上，镜检可见蠕形螨。二疥螨的检查 选择指缝或手腕屈侧等未经搔抓的丘疱疹、水疱或隧道，用消毒针头挑出隧道盲端灰白色小点置玻片上，滴一滴生理盐水，加盖玻片，镜检可见疥螨或虫卵。三阴虱的检查