槐米中芦丁、槲皮素的提取、分离及含量测定

1、Shanxi University综合化学实验论文槐米中芦丁、槲皮素的提取、分离及含量测定学院化学化工学院姓名专业化学年级2011级指导老师2014年4月20日槐米中芦丁、槲皮素的提取、分离及含量测定（山西大学 化学化工学院，山西 太原030006）摘要：采用碱溶液沉淀法，从槐米中提取芦丁，用稀酸催化水解，得到水解产物槲皮 素，并用紫外分光光度法进行定性、定量测定。关键词：槐米；芦丁；槲皮素；碱溶液沉淀法；紫外光谱槐米中含有多种黄酮类物质，如芦丁、槲皮素等。其中槲皮素具有广泛的生 理和药理活性，它具有抗炎、抗菌、抗病毒、抗癌等作用，槲皮素对恶性肿瘤生 长和转移的抑制作用是近年来一个十分活跃的研

2、究课题。芦丁（Rutin）亦称芸香苷（Rutionside），广泛存在于多种植物中。槐米中 含量最高达1216%。芦丁为维生素P类药物，有助于保持毛细血管的正常弹性 和调节毛细管壁的渗透作用，临床上用于治疗高血压的辅助药物和毛细管性止血 药。此外，对放射性伤害所引起的出血症也有一定的治疗作用。芦丁为淡黄色针状结品，含3分子结品水，其熔点为174-178C，不含水的 芦丁熔点188C。芦丁在沸水的溶解度相当大（1:200），而在冷水中的溶解度很 小（1:10000），溶于热甲醇（1:7），冷甲醇（1:100），热乙醇（1:30），冷乙醇 （1:300），难溶于乙酸乙酯，不溶于苯、氯仿、乙醇及石油

3、醚等溶剂，芦丁分子 结构中含有酚羟基，呈弱碱性，易溶于碱液中呈黄色，酸化后又析出，所以可用 水煮沸的方法提取。H0RutinQuercetin芦丁中的苷键属于缩醛结构，易为稀酸催化水解，水解产物主要有苷元槲 皮素（quercetin）、鼠李糖和葡萄糖。槲皮素，即芸香苷元，为黄色针品体，含 2分子结品水的槲皮素熔点313-314C，不含结品水的槲皮素熔点316C，溶于 热乙醇(1:23)、冷乙醇(1:300)、冰醋酸、乙酸乙酯、丙酮等溶剂，不溶于苯、 氯仿、乙醚、石油醚和水中。利用紫外分光光度法先分别扫描出芦丁、槲皮素标准品的紫外谱图，再分别 扫描出样品芦丁、槲皮素的紫外谱图，进行对照后，根据吸

4、收峰峰形、最大吸收 峰位置是否一致，即可定性；根据朗伯一比尔定律，配置槲皮素标品的系列溶液 做成标准曲线，即可定量测出槲皮素的含量。1实验部分1.1试剂与仪器试剂：槐米、石灰乳、盐酸、1 %硫酸水溶液、乙醇、槲皮素标准样品、芦丁标准样品仪器：回流冷凝管、1000 ml三口烧瓶、250 ml圆底烧瓶、500 ml烧杯、50 ml容量瓶、25 ml容量瓶、研钵、电热套、机械搅拌、离心机、布氏漏斗、紫外分光光度仪1.2实验方法1.2.1芦丁的提取(1)将粉碎好的槐米20g倒入装有回流冷凝管的1000 ml三口烧瓶中，加入200 ml沸水，搅拌下加入石灰乳，调节pH 8-9，加热微沸。30 min后，

5、趁热用四层纱布过滤，得滤液。残渣同样提取一次，将两次滤液合并，用盐酸调节pH 3-4。稍冷后，放置冰箱中冷却，待全部固体析出后，离心，用两层滤纸抽滤，70C以下干燥，得3.5g青黄色固体。1.2.2.芦丁的水解称取1g制得的芦丁，放入250mL圆底烧瓶中，加入1%硫酸水溶液100 ml,回流。微沸回流约40 min，瓶中黄棕色浑浊液逐渐变为的黄色液体，颜色不 再改变冷却，抽滤，70C下干燥，制得0.58g黄色固体。1.2.3紫外光谱测定芦丁和槲皮素的标准标准液(实验室已配好)。分别称取0.6mg芦丁提取物和0.5mg槲皮素的提取物，用乙醇溶解在 50mL容量瓶中。以无水乙醇做空白溶液，紫外分光

6、光度法先分别扫描出芦丁标准品、芦 丁提取物的紫外谱图，得图1-1。由图可知，芦丁提取物的吸收峰峰形与芦丁标 准物相同、最大吸收峰位置与芦丁提取物一致，可定性确定提取物为芦丁，且芦 丁的吸收峰位置为258nm和363nm。同上一步，测槲皮素标准品、槲皮素提取物的紫外谱图，得图1-2。由 图可知，槲皮素提取物的吸收峰峰形与槲皮素标准物相同、最大吸收峰位置与槲 皮素提取物一致，可定性确定提取物为槲皮素，且得槲皮素的最大吸收峰位置为 256nm 和 373nm。称得2.6mg槲皮素标准品于50 ml容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度， 得浓度为52 mg/l的溶液分别移取上述贮液1ml、2 ml、3 ml

7、、4 ml、5 ml、 6 ml于25 ml容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，制得浓度分别为2.08、4.16、 6.24、8.32、10.4、12.48 ml/l的槲皮素标准溶液。以上步所测槲皮素吸收 波长373nm为测定波长，分别测出上述溶液的A值，以槲皮素浓度(单位为 2.08 mg/l)为横坐标，A值为纵坐标，绘制标准曲线，得图1-3。可知所测溶 液中槲皮素的含量在横轴对应的数值为5.2109。2结果与讨论2.1数据处理槐米中芦丁的含量:3.5g x100% = 17.24%20.30g芦丁中槲皮素的含量： x100% = 54.72%1.06g提取物中槲皮素的纯度测定由实验测得槲皮素提

8、取物中槲皮素的浓度：5.2109 x 2.08mg /1 = 10.84mg /1根据浓度计算可得槲皮素的含量：10.84mg/1x 0.051 x100% = 90.33%0.6mg3注意事项及讨论3.1注意事项槐米必须粉碎，以提高提取效率。要用沸水提取，破坏槐米中酶的活性，防止黄酮苷类化合物发生水解， 而不能加凉水慢慢加热提取。提取过程中，不断加入石灰乳清夜，使加入石灰乳可以达到碱性溶解的 目的，又可除去槐花米中所含的大量粘液质，应控制其碱性pH89，过高过低 都会降低收率。芦丁析出后，可以用离心的方法代替过滤，离心后上清液倒掉。3.2讨论本实验利用酶在高温失去活性，与芦丁在热水中的溶解度

9、大，而在冷水中溶 解度小的原理，提取芦丁，同时由于芦丁在水中分离，因而采用离心分离的手段。 并采用酸催化水解芦丁制备槲皮素。并在已知标准物的情况下对产物进行定性、 定量测定。参考文献1宗淑梅，王海英，沈丽霞.槐米中槲皮素的提取与含量测定.时珍国医国药,2013,24； 308-309. 马溶，庞光昌.芦丁对现代文明病的作用.食品科学，2013,34 (07)； 307-311.冯启蒙，徐聪.槐米中提芦丁纯化工艺研究.价值工程，2012； 307-308.童靖，郭晓蓉，房文亮，夏云.槐米中芦丁提取工艺研究.中外医学（临床医学）， 2011， （26）； 41-41.赵宇新.槐米中主要成分变化规律与受热温度的相关性.中国实验方剂学杂志，2011， 17 （19）； 108-110.杨娜，朱开梅，顾生玖.从槐米中提取槲皮素方法的研究进展.时珍国医国药，2010， 21 （12）； 3340-3341.赵文彬，刘金荣，樊