样品采集保存和运输

1、基因芯片样品的采集、保存和运输基因芯片实验、microRNA芯片实验、PCR芯片实验和实时定量PCR实验的样品准备一、动物组织样品保存与运输（每张芯片需50-100mg组织）1、新鲜组织样品的保存与运输A、使用RNAlater试剂T取新鲜组织（注：生物体死亡后尽快在10分钟内取材），组织块以PBS或生理盐水清洗干净，所用组织必须切至厚度在 0.5 cm以下（长宽不限），然后放入装有5倍体积RNAlater的离心管（或冻存管）中。T4C孵育过夜，此时样品管需要横置以便组织块充分接触到RNAlater,然后转入-20C中保存。样品在-20C不会冻结， 但是溶液中可能有一些晶体出现，这并不影响后续的

2、RNA抽提。冻存样品也可以反复冻溶，其RNA含量和完整性不受影 响。TRNAlater处理的标本可用常规冰袋4C低温运输（无需使用干冰-70C运输）。B、使用Trizol试剂Trizol试剂可抑制RNA酶活性，破坏细胞膜结构以裂解细胞释放出RNA。T取新鲜组织（注：生物体死亡后1分钟内取材料并保存好），组织块以PBS或生理盐水清洗干净，每50100 mg组织加1 ml Trizol溶液匀浆裂解组织样品，操作最好在冰上进行。T匀浆的裂解液4C短期保存（1个月），-20度或-70C长期保存。干冰运输，短期（5天以内）冷藏（4C ）运输亦可。2、冻存组织的保存与运输生物体死亡后尽快（最好在10分钟内

3、）切取新鲜组织，以PBS或生理盐水清洗干净切为小块，立刻放入液氮中冷冻2-3小 时后可转入-70C冰箱保存或着一直保存在液氮中。冻存组织可放入干冰中直接运输，或者以Trizol 4C下匀浆：冻存的 组织块以液氮研磨后加Trizol或直接加Trizol以电动匀浆器匀浆，匀浆的裂解液干冰运输或短期（5天以内）冷藏（4C） 运输。二、哺乳动物培养细胞样品采集、保存与运输一一使用Trizol试剂（不建议使用RNAlater）1、悬浮细胞t悬浮细胞培养液倒入离心管中，离心沉淀细胞，弃去上清液。T细胞沉淀（1X107个细胞）中加入1 ml的Trizol裂解液。T反复吸打几次后，目视可见细胞层溶解完全。-7

4、0C保存或干冰运输。注：Trizol处理的标本冷藏（4C ）运输，短期 （5天以内）亦可。2、贴壁细胞T从培养容器中吸出并弃去培养液。T培养瓶中直接加入Trizol试剂，Trizol用量与细胞贴壁面积有关，约15 cm2细胞贴壁面积加入1 ml Trizol。T反复吸打几次后，目视可见细胞层溶解完全。-70C保存或干冰运输。注：Trizol处理的标本冷藏（4C ）运输，短期 （5天以内）亦可。注：1、上海市内细胞样品也可以直接常温运送，运送时在培养瓶中装满培养液并以封口膜封口，然而某些实验条件中包含时间 限制，建议以Trizol处理。2、所使用的1.5 ml冻存管或离心管、枪头等必须高温灭菌，

5、装好样品后管口需要以封口膜封好。3、如需干冰，快递运输所用干冰量至少为8公斤，且运输用泡沫箱需用封箱带密封。植物组织样品准备组织需要量：100mg - 1g,根据植物不同部位的组织决定组织需要量（尽可能量多些，但不必超过1g）保存和运输方法：准确取得所需新鲜组织后，如有必要可用PBS清洗干净，将所用组织切碎，装入冻存管中或者用锡箔包裹好，立即投入液氮中保存。冻存组织可干冰或液氮运输。注：1、所使用的1.5 ml冻存管或离心管、枪头等必须高温灭菌，装好样品后管口需要以封口膜封好。2、快递运输所用干冰量至少为8公斤，且运输用泡沫箱需用封箱带密封。蛋白芯片实验、转录因子芯片实验和免疫印迹实验的样品准

6、备悬浮细胞：T约1X107个细胞，低速离心收集，弃去培养液，加入2 5 ml PBS悬浮细胞，转入小离心管中，低速离心沉淀细胞，弃 去PBS，放入-70 C冰箱保存。干冰运输。贴壁细胞：T约1 X 107个贴壁细胞，胰酶消化后加入PBS悬浮细胞，低速离心收集，弃去液体，加入2 5 ml PBS悬浮细胞，转入 小离心管中，低速离心沉淀细胞，弃去PBS，放入-70C冰箱保存。干冰运输。组织：T采集新鲜组织（注意：生物体死亡后10分钟内取材料并保存好），组织块以PBS或生理盐水清洗干净，切为小块，放入 液氮或-70 C冰箱中保存，干冰运输。血清和血浆：T采集新鲜血液，分离血清或血浆后放入-20C或-

7、70C冰箱保存。干冰运输。检测蛋白芯片血清约需要100-200U1 的量。注：1、本市内细胞样品也可以直接常温运送，运送时在培养瓶中装满培养液并以封口膜封口，然而某些实验条件中包含时间限 制，建议冻存后运输。2、所使用的1.5 ml冻存管或离心管、枪头等必须高温灭菌，装好样品后管口需要以封口膜封好。3、快递运输所用干冰量至少为8公斤，且运输用泡沫箱需用封箱带密封。ChIP-chip样本采集、保存和运输悬浮细胞：T约1X107个细胞，低速离心收集，弃去培养液，加入2 5 ml PBS悬浮细胞，转入小离心管中，低速离心沉淀细胞，弃 去PBS，放入-70 C冰箱保存。干冰运输。贴壁细胞：T约1 X

8、107个贴壁细胞，胰酶消化后加入PBS悬浮细胞，低速离心收集，弃去液体，加入2 5 ml PBS悬浮细胞，转入 小离心管中，低速离心沉淀细胞，弃去PBS，放入-70C冰箱保存。干冰运输。组织：采集新鲜组织（注意：生物体死亡后10分钟内取材料并保存好），组织块以PBS或生理盐水清洗干净，切为小块，放入 液氮或-70C冰箱中保存，干冰运输。为获得理想结果，建议根据下述方法处理、保存及运输细胞样品用于ChIP-chip实验：悬浮细胞：取107悬浮细胞低速离心，用10ml培养基将细胞沉淀重悬于50ml离心管中；加入270ul 37%的甲醛（本公司可提供），轻轻混匀，室温孵育10分钟；该步骤最好在通风橱

9、中完成；加入1ml 1.25M的苷氨酸（本公司可提供），轻轻混匀，室温孵育5分钟，中和甲醛；1000Xg离心5分钟，弃上清，用预冷的1XPBS/EDTA洗细胞两遍；1000Xg离心5分钟，弃上清；收集到的样品一80C冻存，干冰运输贴壁细胞：将10cm培养皿中（107细胞）旧的培养基吸掉，添加10ml新鲜培养基；加入270ul 37%的甲醛（本公司可提供），轻轻混匀，室温孵育10分钟；该步骤最好在通风橱中完成；加入1ml 1.25M的苷氨酸（本公司可提供），轻轻混匀，室温孵育5分钟，中和甲醛；将皿中的混合液吸掉，用预冷的1XPBS/EDTA洗细胞两遍，加入1ml含有1Xprotease inhibitor cocktail 的1XPBS，用细胞刮将皿底的细胞刮下，收集到1.5ml离心管中