微生物在农业上的应用技术课件

1、技术单元微生物肥料微生物农药微生物饲料微生物肥料微生物肥料概述细菌肥料五四零六抗生菌肥复合微生物肥料菌根菌肥微生物肥料概述 微生物肥料又称生物肥料，是农业生产中使用的肥料制品中的一种，与化学肥料、有机肥料、绿肥性质不同，它是利用微生物的生命活动及其代谢产物的作用，改善作物养分供应，向农作物提供营养元素、生长物质，调控其生长，达到提高产量和品质，减少化肥使用，提高土壤的肥力的目的。 狭义微生物肥料的概念是指微生物接种剂，即由具有特殊效能的微生物经过扩大培养（根瘤菌用草炭或蛭石等载体组成，此类制品主要用于拌种。广义的微生物肥料的概念是指一类含有微生物的特定制品，应用于农业生产中，能够获得特定的肥料

2、效应，在这种效应的产生中，制品中的活微生物起关键作用，符合上述定义的制品均应归入微生物肥料。 微生物肥料的种类 按微生物肥料的功效划分 一类是通过其中所含微生物的生命活动，增加植物营养元素的供应量，包括土壤和生产环境中植物营养元素的供应总量和植物营养元素的供应量，通过植物营养状况的改善，导致产量增加。eg: 根瘤菌肥另一类虽然也是通过其中所含的特定的微生物生命活动而导致作物增产，但是其中微生物生命活动的关键作用不仅限于提高植物的营养元素供应水平，还包括了它们所产生的植物生长刺激素对植物的刺激作用，促进植物对营养元素的吸收作用，或者是桔抗某些病原微生物的致病作用，减轻作物病虫害而导致产量的增加。

3、 eg: PGPR 按微生物种类划分 细菌肥料（如根瘤菌、固氮菌、磷细菌、钾细菌、光合细菌）放线菌肥料（如抗生菌类）真菌类肥料（如菌根真菌类） 按作用机理划分 根瘤菌肥料固氮菌类肥料解磷菌类肥料解钾菌肥料按肥料组分划分 单一的微生物肥料复合(或复混)微生物肥料 微生物肥料的主要功效 提高土壤肥力，减少化肥用量 制造和协助农作物吸收营养分泌生长刺激素 增强植物抗病和抗旱能力 微生物肥料的特点 微生物肥料中有效活微生物起作用微生物肥料要求合适的环境微生物肥料有效期明确微生物肥料有一定的适用范围施用与贮藏要求较严格 微生物肥料的应用前景 适用广泛，市场容量大 eg: 我国日前微生物肥料年产量在101

4、0440104t，同期化肥(约1.2108t) 我国仅大豆种植面积每年约为1000104hm2，花生约330104hm2，而实际应用微生物肥料接种的大豆面积仅1左右生产成本低、应用效果好 生产无公害绿色食品、减少环境污染的需求 微生物肥料本身的发展为其扩大应用奠定了基础 微生物肥料施用的注意事项 微生物肥料产品应该有生产许可证号、产品质量检验证，符合国家或行业的标准，包装和标签应完整，使用说明要清楚、明确。 微生物肥料的产品种类与使用的农作物应相符 要在其产品有效期内使用 贮存温度要合适。通常要求微生物肥料产品的贮存温度不超过20为宜，410最好，开袋后应在短时期内尽快用完。 应严格按照使用说

5、明书的要求使用。尽量避免阳光直射，拌种后也不宜存放较长时间，应随拌随用。 微生物肥料的配制禁忌：微生物肥料的使用一般应注意避免与造成其特定微生物死亡或降低作用的物质合用、混用。使用效果与土壤肥力、土壤的pH值、作物的种类 有很大关系。生产设备与相关控制条件微生物肥料生产设备与条件主要包括菌种生产系统、质量控制系统、灭菌系统、生产包装系统及产品贮藏等五大系统。 菌种生产系统菌种生产系统包括菌种的培养、提纯、复壮、扩大等部分，需要的基本设备和条件包括微生物实验室、菌种培养室、种子罐和发酵罐等。影响菌种质量的因素：培养基种龄与接种量培养条件：温度、pH、通气、泡沫、染菌控制质量控制系统包括质检室及其

6、所需设备，质量控制标准灭菌系统各类灭菌设备及化学灭菌剂等。（附）生产包装系统主要包括固体或液体发酵设备、产品干燥、粉碎与包装设备产品贮藏系统附：无菌操作技术化学消毒灭菌剂微孔滤膜过滤除菌 类型 名称及使用方法 作用原理 应用范围 醇类70%75%乙醇脱水、蛋白质变性皮肤、器皿 醛类0.5%10%甲醛2%戊二醛（pH=8） 蛋白质变性房间、物品消毒（不适合食品厂） 酚类3%5%石炭酸 2%来苏儿3%5%来苏儿破坏细胞膜、蛋白质变性地面、器具皮肤地面、器具氧化剂0.1%高锰酸钾3%过氧化氢0.2%0.5%过氧乙酸氧化蛋白质活性基团，酶失活皮肤、水果、蔬菜皮肤、物品表面水果、蔬菜、塑料等常用的消毒防

7、腐剂及其应用(一)常用的消毒防腐剂及其应用(二)类型 名称及使用方法 作用原理 应用范围重金属盐类0.05%0.1%升汞2%红汞0.1%1%硝酸银0.1%0.5%硫酸铜蛋白质变性、酶失活变性、沉淀蛋白蛋白质变性、酶失活非金属器皿皮肤、粘膜、伤口皮肤、新生儿眼睛防治植物病害表面活性剂0.05%0.1% 新洁尔灭0.05%0.1% 杜灭芬蛋白变性、破坏细胞膜皮肤、粘膜、器械皮肤、金属、棉织品、塑料常用的消毒防腐剂及其应用(三)类型 名称及使用方法 作用原理 应用范围卤素及其化合物0.20.5mg/L氯气10%20%漂白粉0.5%1%漂白粉2.5%碘酒破坏细胞膜、蛋白质饮水、游泳池水地面水、空气等皮

8、肤 染料2%4%龙胆紫与蛋白质的羧基结合皮肤、伤口 酸类 0.1%苯甲酸 0.1%山梨酸食品防腐食品防腐微孔滤膜过滤除菌 微孔滤膜主要特点适用于PH3-10的液体过滤；孔隙率高：70-80%，孔径分布均匀；薄膜厚度：100-160m；滤速快、吸附少、无介质脱落；外观呈白色，平整、光滑、无针孔。不同材料微孔滤膜性能及应用材 质名 称性 能应 用混合纤维素 CA-CN 孔隙率高，截留效果好不耐有机溶液和强酸、强碱溶液性价比高 实验室、小生产工艺中除菌、除微粒的过滤水体中大肠肝菌群的测定；2微米和5微米的滤膜还用于油料过滤。 格栅膜G/CA-CN是在超净混纤膜上印上网格，以方便对截留物计数，用于微粒

9、、细菌的检测，作为培养基组成份，均匀准确，是实验室、质检部门进行微生物检测的理想产品。水体中大肠肝菌群的测定；医用工业中微生物的检测。硝酸纤维素CN对蛋白等生物大分子吸附力强医学研究及诊断的细菌培养和生物工程DNA-RNA杂交实验和检定；做液闪测定、放射性示踪物的超净制备电泳、微量元素分析等。材 质名 称性 能应 用醋酸纤维素CA对蛋白吸附比较低；适用于低分子醇类、油脂类溶液的过滤科研中特殊成分的分析测定尼龙6JN6耐碱性和有机溶液 聚醚砜PES通量大、对蛋白吸附力较低聚偏二氟乙烯PVDF是疏水性膜，不吸潮，易恒重能反复热压消毒，性能不变质地薄、流速快耐化学腐蚀、耐氧化酒精处理后变为亲水膜醇、

10、酸、烷烃、芳香烃、卤代烃等溶剂除去微粒，提高试剂级别空气中悬浮微粒的净化和发酵工业中空气除菌油类中不溶物的净化和固体微粒的重量分析非特异性蛋白的分离和提纯水溶液的浓缩，化学物质的分离和回收。材 质名 称性 能应 用聚四氟乙烯PTFE耐酸、碱性强聚丙烯PP深层过滤 玻璃纤维膜BF流速快、耐高温空气污染监测；生物大分子沉淀物的过滤；滤膜前预过滤。微孔滤膜使用方法清洗：使用前用蒸馏水清洗滤膜，然后在7080蒸馏水中浸泡4小时，或在常温蒸馏水中浸泡12小时；消毒：将清洗后的滤膜放入滤器中一起进行蒸汽热压灭菌处理12130分钟，也可采用其它灭菌方法处理。过滤液体时滤膜必须处于湿润状态，否则将影响过滤速度

11、。若因灭菌处理使滤膜呈干燥状态，需用无菌水润湿后使用。微孔滤膜运输与保存纤维素滤膜为易然品，在运输和贮存时要远离火源。微孔滤膜必须在常温和相对湿度60%条件下避光保存，若因干燥导致滤膜失水卷曲，则只须浸泡处理后即可使用。微生物肥料的生产流程空压机压缩空气空气过滤、灭菌锅炉蒸汽灭菌斜面菌株振荡培养种子罐发酵罐发酵菌液原料入厂干燥培养基原料配制培养基吸附搅拌原料灭菌粉碎包装入库质量检测细菌肥料根瘤菌肥料 根瘤菌肥料概述根瘤菌肥料是推广最早，效果显著的一种高效菌肥。 根瘤菌的多样性是目前生物固氮资源调查和利用的一个热点。 我国目前生产的根瘤菌肥料使用的菌种有花生根瘤菌，大豆根瘤菌，苕子、蚕豆、豌豆根

12、瘤菌，苜蓿根瘤菌，菜豆根瘤菌，沙打旺根瘤菌。此外，还有一些针对不同豆科作物生产的根瘤菌剂品种，如三叶草根瘤菌肥、百脉根根瘤菌肥、胡枝子根瘤菌肥、绿豆根瘤菌肥等。根瘤菌剂型：根瘤菌剂主要有粉状(系草炭、蛭石或其他载体)、液体、种衣剂3种剂型及少数冻干菌。复合菌种：用同一根瘤菌的不同菌株复合的，也有用根瘤菌与其他微生物，如假单胞菌、粪产碱菌等合用以增强其结瘤性能，国外有人将此种制剂称为第二代接种剂。在我国的产量和质量发展都不快的主要原因 ：根瘤菌接种剂对生产条件要求较严格根瘤菌的代时较长，快生菌为36h，慢生菌为810h应用对象仅限于豆科植物结瘤竞争问题菌株选育应用条件 根瘤菌的生物学特性根瘤菌的

13、形态特征 根瘤菌是短杆状细菌根瘤菌在固体培养基上和土壤中呈杆状，不同的种大小略有差别，端生或周生鞭毛，能运动，革兰氏染色阴性，无芽孢，培养较久，菌体粗大，染色不均。根瘤菌侵入豆科植物的根部繁殖后，为短小杆状，无鞭毛。随着根瘤的增大，菌体停止分裂，逐渐延长变大，形成端膨大的棒状或分叉变形，这种变形的菌体称为类菌体。 不同根瘤菌种的类菌体形状不相同。eg:苜蓿根瘤菌的类菌体一端稍膨大呈棍棒状大豆根瘤菌的类菌体呈细长稍弯的杆状，偶尔一端膨大或分叉紫云英根瘤菌的类菌体则一端膨大呈茄子状：豌豆根瘤菌的类菌体分叉呈Y、T、X等形状根瘤菌腐败后，类菌体散入土壤中，崩解成小球状曲体，最后又发育成有鞭毛的短杆状

14、菌，进行分裂繁殖。 根瘤菌的培养性状 在固体培养基表面，菌落呈圆形，边缘整齐。有的菌落无色半透明(如豌豆、紫云英的根瘤菌)，有的乳白色、黏稠(如花生、大豆的根瘤菌)。菌体不易被刚果红和结晶紫染色，在培养基上很容易与其他菌落区别开。在液体培养基中，菌液浑浊，菌体稍有沉淀，不形成菌膜。培养时间过久，则在液面四周有胶黏状物质。生长速度 快生菌(如苜蓿、三叶草等根瘤菌)代时为36h，接种后2天即可见菌落，45天内菌落达到最大，菌落胶黏物质多，较稀薄。 慢生菌(如大豆、花生、豌豆等根瘤菌)代时为810h接种34天才有菌落出现，710天菌落达到最大，菌落胶黏物质少，较稠厚。 不论是快型或慢型根瘤菌，若生长

15、速度变快，则菌株的结瘤性往往不好，是菌种退化的表现。根瘤菌的生理习性 碳素营养 快生型根瘤菌的碳素营养以单糖、双糖和多元醇为宜，其中又以葡萄糖、蔗糖和甘露醇为最好。慢生型根瘤菌的碳素营养以乳糖、阿拉伯糖最好。氮素营养 快生型和慢生型根瘤菌均以可溶性有机氮化合物(如多肽、氨基酸)为氮源，也能利用铵盐和硝酸盐。矿物元素 快生型和慢生型根瘤菌均需要磷、硫、钾、钙、镁等矿物元素，微量元素铁、钼、硼、钴和锰有促进根瘤菌生长的作用。维生素 维生素对根瘤菌的发育影响较大，特别是B族维生素可使根瘤菌的生长速度加快几倍到几十倍。根瘤菌的培养特性 根瘤菌为好气菌，最适生长温度为2528，最适pH值为6.57.5。

16、培养过程中产酸，因此培养基中需加入碳酸钙中和。根瘤菌的专一性 各种根瘤菌都与各自相应的豆科植物建立共生关系，形成根瘤，表现了根瘤菌的专一性。eg:豌豆根瘤菌只能在豌豆、蚕豆的根部形成根瘤大豆根瘤菌只能在黑豆、黄豆、青豆的根部形成根瘤豇豆根瘤菌只能在豇豆、花生、绿豆、赤豆、羽豆,利刀豆的根部形成根瘤。根瘤菌肥料的生产斜面菌种培养扩大培养固体扩大培养液体扩大培养发酵吸附成品质量检验成品吸附剂吸附剂一般用草炭，因它含有丰富的有机质，保水力强，疏松不黏结成块，通气良好，是一种理想的培养基(我们用草炭做吸附剂不再加进其他营养成分)。没有草炭就用疏松肥土代替。将草炭晒干、打碎、过筛，除去石头、杂草等，调p

17、H值至中性或微碱性(pH值6.87.6，用石灰或过磷酸钙调节)，装瓶(装量约2334)消毒， 126保压2 3h，消毒后放接种室冷却 。成品质量检验外观封口无缝、贴有标签(品种、出厂日期、有效期)、无霉。菌数测定 每克菌肥含根瘤菌数不少于1108个，杂菌含量应控制在10以下，无霉菌生长 。合格的菌肥应湿润疏松，不结团块，含水量在30左右。 pH值6.87.6为宜 结瘤试验要求第四个稀释度(10-5菌悬液)浸种的种子，播种1015天，结瘤率应在95以上 根瘤菌肥的应用拌种 将选好的种子倒入内壁光洁的瓷盆或木盆内，用凉水将菌剂(用量100250g666.7m2)用水250500g调成浆糊状，再把种

18、子倒入拌匀，使每粒种子都沾上菌剂。晾干 拌种后在阴凉处摊开，稍阴干，使根瘤菌剂牢固地吸附在种子上，播种时也易于撒开时，立即播种，随即覆土。注意事项一种根瘤菌剂只能用于相应的豆科植物，用错无效。根瘤菌剂是用来拌种的，不能撒施做基肥或追肥。根瘤菌剂不能在太阳光直射或高温条件存放，应常温保藏。根瘤菌剂拌种的种子不要在晴天中午播种，宜在傍晚和阴天撒播，拌种后稍阴干就应播种。使用时即可打开密封的盖子，最好一次用完，一次用不完应马上盖好，最迟23天内用完。拌种时不要与农药、过磷酸钙一起拌(会杀死根瘤菌)，可与钙镁磷肥一起拌，但应先拌菌、后拌钙镁磷肥。稻田水要放干晒12天再播种，旱田要在下雨前后条播，盖一薄

19、层土。以磷增氮，在有效磷含量低的土壤中施用磷肥。使用适量磷肥可提高根瘤菌的结瘤率，对根瘤菌拌种的增产有良好的效果，增强固氮效能，从而也增加了土壤中的含氮量。应注意土壤的pH值。磷细菌肥料 磷细菌肥料是一类促使土壤中不能被作物利用的有机态或无机态磷化物转化为有效磷，从而改善作物的磷素营养，促进作物增产的菌肥。 磷细菌的主要类群 磷细菌是可将不溶性磷化物转化为有效磷的某些腐生性细菌的总称。无机磷细菌（分解磷酸三钙的细菌） 是通过细菌产生的酸使不溶性磷矿物溶解为可溶性的磷酸盐，如氧化硫硫杆菌。有机磷细菌 是通过某些细菌，（如巨大芽孢杆菌和蜡状芽孢杆菌）等产生的一些酸类物质，如乳酸、柠檬酸和植物酶类物

20、质，使土壤中的难溶性磷素和磷酸铁、磷酸铝以及有机磷酸盐矿化，形成作物能够吸收利用的可溶性磷，供作物吸收利用。磷细菌的生物学特性菌种的培养特征普通无机磷细菌菌落白色，生长旺盛，边缘整齐，表面光滑。巨大芽孢杆菌(有机磷细菌)在马铃薯培养基上菌落颜色由灰白色变浅黄色，渐变褐色。培养特性 磷细菌为好氧性， 要求有机质丰富、中性或微酸性、水分充足土壤条件。生长最适温度为3037。磷细菌肥料的生产 磷细菌肥料的生产方法同根瘤菌肥料的生产。产品质量检验 有效活菌数为2109个/ml或5 107个/g，杂菌数15%以下。磷细菌肥料的使用使用方法 磷细菌肥料可用于拌种、浸种、蘸根、基肥、追肥使用。提高磷细菌肥效

21、的几项措施无机磷细菌菌肥和有机磷细菌菌肥混合使用 磷细菌肥和固氮菌肥混合使用 早施磷细菌肥料 土壤含水量在 1523时，有利于磷细菌的生长和活动。固氮菌肥料 固氮菌的主要类群及培养特性 固氮菌肥料使用的菌种是除了根瘤菌以外的固氮菌，有自生固氮菌和联合固氮菌两类。 自生固氮菌 主要有圆褐固氮菌、黄褐固氮菌、棕色固氮菌、贝氏固氮菌、巴斯德固氮梭菌。 自生固氮菌的形态是粗短杆状，两端钝圆，有荚膜,长46m。这些杆菌，常常是2个联结在一起，形成8字状。联合固氮菌 联合固氮菌指的是在特定的作物根际生长时固氮能力比其独自存在时固氮能力强的固氮菌。 主要有雀稗固氮菌、巴西固氮螺菌、产气肠杆菌、粪产碱杆菌等。

22、 联合固氮菌如玉米刚螺菌，在显微镜下菌体是革兰氏染色阴性，趋向螺旋弯曲的杆菌，靠单根端生鞭毛运动。细胞内含有较高光折射率的油滴。 近年来的研究表明，固氮菌的纯培养制品比当地土生土长的固氮菌群效果差。所以固氮菌肥的生产以培养当地固氮菌群较实用。固氮菌肥料的质量检验 有效活菌数为2109个/ml或5 107个/g，杂菌数15%以下。固氮菌肥料的使用方法及注意事项使用方法 拌种、追肥、蘸根、叶面喷施。注意事项自生固氮菌剂一般可用于各种作物，联合固氮菌菌剂对作物有较强的选择性 。尽量避免与速效氮肥联合施用。 钾细菌肥料 钾细菌肥料又称生物钾肥、硅酸盐菌剂，是由人工选育的高效硅酸盐细菌经过工业发酵而成的

23、一种生物肥料。其主要有效成分是活的硅酸盐细菌。 钾细菌具有分解正长石、磷灰石，并释放磷、钾矿物中磷、钾元素的作用。 钾细菌肥料的质量检验 有效活菌数为2109个/ml或5 107个/g，杂菌数15%以下。钾细菌肥料的使用方法及注意事项使用方法 基肥、拌种、追肥、蘸根、种肥。注意事项钾细菌肥料（生物钾肥）可与杀虫、杀真菌病害农药同时配合施用（先拌农药、阴干后拌菌剂），然后播种。 钾细菌肥料一般不能与杀细菌农药接触，因此不能同时配合施用。 钾细菌肥料一般不能与过酸或过碱物质混用，过酸或过碱的土壤也会影响硅酸盐细菌的生命活动，pH值以58的范围为宜。钾细菌肥料要早施光合细菌肥料 光合细菌是一类能将光

24、能转化成微生物代谢活动能量的原核微生物 。光合细菌的种类较多，包括蓝细菌、紫细菌、绿细菌和盐细菌。 光合细菌肥料作用的机理固氮 为植物根系分泌氨基酸和核酸消除有害物质、提高作物抗病性改善土壤肥力，提高作物产量和品质 eg:施用光合细菌的土壤细菌(每克)总数比对照增加1.8 107个，放线菌增加 1.1106个，固氮菌增加 1.9 105个。 光合细菌肥料的使用 浸种、叶面喷施五四零六抗生菌肥抗生菌肥料是一种能分泌抗菌物质和刺激素的放线菌接种于饼粉和土（1：10）中发酵而成。它具有成本低，肥效高，抗病害，促生长，堆制方法简易，用料就地取材，水田旱田都能用，对作物无害等优点。使用菌种通常是放线菌中

25、的细黄放线菌。5406放线菌的生物学特性 5406放线菌 属于弗兰克氏放线菌属的细黄放线菌。在固体培养基上，菌落呈圆形、隆起，初期表面光滑，浅黄稍带绿色，成长后表面粉末状，白色带粉红，背面黄褐色。具有清凉冰片香味。 生长最适温度为2830，pH为7.58.5。 生长最佳碳源为淀粉，氮源为氨态氮和硝态氮。5406抗生菌肥料的作用抗病驱虫刺激作物生长增加土壤中有效养分的含量5406抗生菌肥料的生产一级菌种培养扩大培养固体扩大培养液体扩大培养发酵吸附成品质量检验成品斜面菌种饼土管菌种一级菌种制备饼土管菌种的制作饼土管的制作 取黄豆饼粉5，玉米粉5，肥土90，将料混合拌匀，用手提喷雾器加水，做成大小如

26、小米粒的饼土丸，分装试管14处，经121高压灭菌1h，取出晾干，于32培养2天，无杂菌生长的可使用。接种和培养 在无菌室用无菌水稀释斜面菌种，接种在饼土丸上，于32温箱中培养45天，菌苔表面孢子生长丰满，呈银灰色，并有露珠，即可取出备用。斜面菌种制作斜面培养基制作 马铃薯20，葡萄糖5，硫酸镁0.04，磷酸氢二钾0.04，蛋白陈0.1，pH值7.27.4，分装，塞上棉塞，包扎，121灭菌30min。取出后放成斜面，于32温箱中培养24天，无杂菌及无冷凝水的方可使用。斜面试管接种与培养 接种用经121灭菌的毛笔。用笔蘸菌苔上的孢子涂抹斜面。在32温箱中培养45天，孢子生长丰满，呈粉红色并有露珠时

27、，取出放入冰箱保存备用，保存时间以1个星期至半为宜。以上两种培养基可以交替使用，以防上菌种退化。固体吸附配方（l）稻谷皮90%，甘薯粉 10%。（2）麸皮 10%，炉灰30%，肥土60%。（3）黄豆饼粉10，肥土60，炉灰20，麸皮10。灭菌 以上几种吸附剂稻谷皮、甘薯粉、黄豆饼粉、麸皮经 121蒸汽灭菌 1h，肥土、炉灰在烘箱内经 160 灭菌1h后取出，待料降温到40左右接种。接种 由于各吸附剂吸水量不同，故接种量第一种为的 100，第二种为的40，第三种为的40%。 产品质量检验有效活菌数为1.32.01010个/g5406抗生菌肥料的使用使用基肥、追肥、浸种、接种、蘸根注意 5406菌

28、肥不能与硫磺、硫酸铜、硫酸亚铁等杀菌剂混合施用；不能与硫酸铬、硝酸锌等混合使用；不宜使用污染、变质或存放过久（超过有效期半年）的菌剂。 复合微生物肥料复合微生物肥料是指在微生物肥料的生产应用过程中，为了提高施用效果，从实用角度出发，将两种或两种以上的微生物（复合）或一种微生物与其他营养物质复配（复混）而成。 复合微生物肥料集有机肥、化学肥料和微生物肥料的优点于一体，具有许多不同于其他肥料的特点：克服了过去有机肥费工费时的缺点，施用十分方便；克服了单纯化学肥料造成的土壤理化性状退化和农产品质量下降的缺点，可以增加土壤有机质，改良士壤结构，提高土壤肥力，改进农产品质量；均衡地供应作物生长所需的速效

29、氮、磷、钾及多种微量元素，强化土壤微生物区系，持久地发挥作用，具有显著的增产效果，并能提高作物的抗逆性；价格合理，具有一定的市场竞争力。复合微生物菌肥的种类两种以上生物菌复合 可以是同一个微生物菌种也可以是不同的微生物菌种。应用的前提是所采用的两种或两种以上的微生物之间无拮抗作用，而且必须分别发酵然后混合。总的活菌数和复合的微生物均应保证一定的数量。菌与各种营养元素或添加物、增效剂的复合 菌加大量元素（一定量的氮、磷、钾或其中的l2种）；菌加一定量的微量元素；菌加一定量的植物生长激素；菌加大量元素、微量元素、其他营养、刺激物质等。复合微生物菌肥的生产复合菌肥生产工艺流程单一菌种培养复合菌剂加有

30、机物或无机肥复合菌肥菌种的生产5406、磷细菌培养基：马铃薯200 g，KCL 0.3g，NaCL 0.3g，MgSO4 0.3g，CaCO3 5g，葡萄糖20 g ，琼脂20g，水 1000ml，pH值7.5。固氮菌、钾细菌培养基：MgSO40.2g，NaCL 0.2g，CaCO3 5g，过磷酸钙 1g，白陶土 1g，葡萄糖10g，FeSO4 微量，琼脂20g，水1000ml，pH值 7.5。上述培养基配制灭菌后，进行单项菌种接种，在2832温度下培养27gd ，即得菌种。无机磷细菌经培养24h，透明无色，逐渐长出乳白色油脂状浓厚菌苔，培养基不变色。有机磷细菌培养24h，生成浅黄棕色菌苔，颜

31、色鲜艳，以后逐渐变成暗黄棕色，分泌黄棕色素进入培养基内。棕色固氮菌（注意：不能用圆褐固氮菌，因5406对它稍有抑制作用），培养24h，菌苔开始乳白色，以后变棕褐色。钾细菌培养24h，菌苔粘稠透明无色，以后菌苔加厚富有弹性，最后菌体自溶成水渍状。复合菌剂的生产培养基：米糠（或麦麸成豆饼粉）30，肥土70，再加上总量5的草木灰和1的过磷酸钙，用石灰调pH值为7.5，混匀后调湿度为30左右，即达到手握成团，触之不太易散，但又不粘手的程度。 配料拌匀后装料，121灭菌1.5h，置无菌室放冷至不烫手时进行接种。一般制作2种复合菌剂。分别将两种菌种用无菌水按 1：10稀释，同时接入，摇匀，2832培养25

32、天，即得复合菌剂 磷细菌（看当地需要选择有机磷细菌或无机磷细菌，或者两者都用）十固氮菌剂 培养24h后摇动1次，继续培养1天，瓶壁分泌大量水珠，瓶壁土粒周围长出乳白色或浅绿色菌苔，料疏松，无味或微酸味，绝无霉味、臭味和腥味。平皿法计数，磷细菌31010 个g以上，固氮菌51010 个g左右。 5406十钾细菌剂接种后24h，瓶壁分泌大量水珠，此时钾细菌发育旺盛。几天后，5406粉红色孢子盖满土粒，全瓶粉粒呈橙红色。这时观察玻璃瓶壁上的土粒，可见土粒被5406粉红色孢子布满，而土粒周围却可看到透明粘稠的钾细菌菌苔。这时若取一点样品接入钾细菌的斜面培养基，通过培养可看到颗粒周围生成大量钾细菌弹性菌

33、苔，同时5406菌也旺盛生长。通过平皿活菌计数，含5406菌1011个/g以上，钾细菌5109个/g以上。复合菌剂的生产 复合菌肥的制作，可分为拌种剂生产和菌肥生产两种。拌种剂配方米糠10，肥土90，再加总量1的过磷酸钙和5的草木灰，pH值7.5。也可将菌液：泥炭按1：4吸附。复合菌肥配方（1）绿肥粉10kg，肥土39kg，米糠1 kg。（2）豆秸（豆荚）粉 10kg，肥土40kg。（3）玉米芯粉（高粱壳粉）7.5kg，肥土42kg，米糠0.5kg。（4）米糠5kg，肥土45kg。 以上各配方都要加上总量1的过磷酸钙和5的草木灰，同时用石灰调酸碱度，pH值7.58，米糠可用豆饼粉或麦麸代替。

34、配料混匀后喷入11000的高锰酸钾水，将湿度调到30左右，然后常压灭菌4h或121高压灭菌1.5h。制作菌肥时，把拌匀的配料摊在撒上一层石灰粉的水泥地板上，料厚2035 cm，上覆消毒草木灰或刚从炉中掏出的草木灰3cm，控制料温不要高于34，培养35天，不要翻动。即得优质菌肥。复合菌肥的分级 复合菌肥的检验，可用平皿计数法。无条件时，可用肉眼观察，通过看、闻分为上、中、下三等。上等品：产品疏松，有浓郁药香味，像优质过磷酸钙一样的颜色，放进水中先浮后沉。中等品：疏松，用棍棒插入通畅无阻，有香味，但有少量霉菌污染，色粉白。下等品：大量霉菌或细菌污染，恶臭，霉臭或酒酸味，有少量白点，结块。 一般下等

35、品要立即处理，不能当菌肥施用，但可作普通厩肥使用。 复合菌肥的施用施用方法 种肥、基肥、追肥施用条件 复合菌肥只有在良好的耕作水肥条件下，才能有效地发挥它的作用。所以施用后一定要搞好排灌、晒田、中耕等工作，为细菌大量繁殖创造适宜的条件。施用注意事项复合菌肥中的5406菌虽然可以提取激素作液体喷施，但其他几种菌都不能这样做。所以不要用复合菌肥做根外追肥，以免造成浪费。复合菌肥可与杀虫剂农药、厩肥、草木灰、磷肥、腐植酸铵合用，也可与激素合用，在水田中可与化肥合用，但在旱地却不能和化肥合用。由复合菌肥制成的生物有机复合肥在做基肥时，应增加其使用量达到 15002000kghm2。菌根菌肥菌根菌种类

36、菌根是土壤中某些真菌侵染植物根部与其形成的菌根共生体。由于形成菌根的植物种类繁多，形成菌根的真菌种类也很多，包括担子菌、子囊菌、藻状菌中的真菌。 菌根菌与高等植物所形成的菌根有三类：内生菌根外生菌根内外生菌根以内外生菌根中的泡囊丛枝状菌根简称VA菌根最为常见。 泡囊丛枝菌根的特征是：菌根菌是无隔膜的藻状菌；在皮层细胞内形成丛枝或二分叉的菌丝体；在皮层细胞内或皮层细胞间形成椭圆形泡囊；菌丝除在植物根细胞内形成上述构造外，还伸延到土壤中去，有时很旺盛，从而扩大了吸收面，但并不形成外生菌根那样的菌套（菌丝形成的，包在根外面的假薄皮组织）。 人们将有益的菌根菌与其寄主植物共同进行扩大繁殖，然后将有菌根

37、真菌的土壤（菌根土）作为接种剂用于农、林业生产中，提高农作物产量和改善农作物品质以及提高树木的成活率等。这种含有人工扩大繁殖有益菌根菌的菌土就称之为菌根菌肥料。 菌根菌肥料的作用机理 内、外生菌根真菌的外伸菌丝在土壤中延伸，扩大了植物根系的吸收面积，菌根真菌的菌丝分泌多种胞外酶，加强了根系周围土壤有机质的分解，丰富了植物根系对矿质元素营养的吸收，分泌的生长刺激物刺激根系生长。菌根表面存在磷酸酯酶，水解有机磷化物，可增强菌根周围的有效磷量，供根吸收。 菌根菌肥料应用问题及展望 到目前为止，VA菌根的人工纯培养问题尚未突破，VA菌根的菌根菌都不能在人工培养基上生长，只能发芽，形成一根短菌丝然后死去

38、。因此，只能在寄主根上形成菌根，并生长，繁殖。在纯培养未能突破的情况下，国内外的研究者利用各种方法人为培养大量的接种VA菌根的植物根，然后以这些侵染了VA菌根的植物根段和有大量活孢子的根际土为接种剂（菌根菌肥料）去接种作物，可以获得较好的增产效果。微生物农药 细菌杀虫杀菌剂真菌杀虫剂病毒杀虫剂农用抗生素 微生物农药就是利用微生物或其产物来防治植物病虫害的一种农药，它是通过筛选的昆虫病原体或病菌拮抗微生物，用人工培植、收集、提取而制成的对人畜安全无毒，选择性强，不伤害天敌，害虫不产生抗药性，不污染环境的微生物制剂。 细菌杀虫杀菌剂 目前国内外使用的细菌杀虫剂不多，己分离到的昆虫病原菌的菌种和变种

39、约有100种，生产的商品仅有十几种，其中研究最多、效果最好的是芽孢杆菌属的苏云金杆菌类和日本金龟子芽孢杆菌。 苏云金杆菌苏云金杆菌的形态 苏云金杆菌是G的好气性芽孢杆菌，大小为1.01.23.05.0um，两端钝圆，周生鞭毛，少数无鞭毛，它们单生，或2 5个成链状。芽孢椭圆形或圆形，在形成芽孢的同时，会形成伴孢晶体。苏云金杆菌杀虫机理 苏云金杆菌的杀虫作用主要是由于它能产生毒素。目前已知的毒素有四种：晶体毒素、热稳定外毒素、叶蜂毒素和外毒素,其中晶体毒素是一切苏云金杆菌所共有的，研究较详细，也最有应用价值。晶体毒素：亦称-内毒素，由许多蛋白质单位组成，是一种碱性蛋白质；存在于蛋白质晶体中。 伴

40、孢晶体不溶于水及有机溶剂，但溶于碱性溶液。处在pH3.3以下或用使蛋白质变性的物质处理，则失去毒性有一定的耐热能力在65下可保持1小时，80下20分钟也不致破坏。伴孢晶体蛋白质由18种氨基酸组成。它是一种原毒素，要在特定条件下，经蛋白酶类水解成较小的亚单位(毒性肽)才产生毒性。热稳定外毒素：又叫外毒素，属于核酸的衍生物，能溶于水，对热稳定，由腺嘌呤、核糖和磷酸盐组成。 这种毒素为水溶性，对热稳定，含有两种核苷酸的衍生物，经高压灭菌仍具有毒效。 叶蜂毒素：又叫 外毒素，是一种卵磷脂酶，可溶于水，含有游离的氨基酸和多肽。外毒素，是一种未确定的酶，毒力尚未证实， 苏云金杆菌就是靠以上4种毒素引起昆虫

41、发病死亡，特别是对于鳞翅目昆虫的幼虫毒杀能力更强。 当敏感幼虫吞食含有芽孢和伴孢晶体的混合制剂后，在肠道中被水解成毒性肽，很快发生毒性，幼虫停止取食，麻痹，进一步作用使中肠的上皮细胞遭受破坏，随着病情发展，肠道壁细胞的胶粘物质被破坏，上皮细胞剥离，散落在肠内，使中肠的透性失去控制，肠壁穿孔，肠道内含物、芽孢和细菌大量侵入血腔。中肠pH下降；血液pH上升，幼虫全身瘫痪，虫体软化，腐烂，发黑，最终死亡。 苏云金杆菌特点高效，对人畜无毒，不污染环境 不杀伤害虫天致，能保持生态平衡 对植物无毒害，不影响作物的色、香、味 特定环境下的应用 利用生物工程技术，选育新菌株抗性产生缓慢 不足之处选择性强，杀虫

42、谱较窄达到死亡高峰期较慢受气温影响，由于毒素需要在一定的温度条件下发挥杀虫效力对蚕有毒性，在养蚕区的应用要特别注意不易受专利保护苏云金杆菌的生产固体生产菌种斜面菌种培养种子扩大培养固体发酵培养干燥储存使用液体生产沙土管菌种斜面菌种沙土管菌种克氏瓶菌种种子罐发酵罐发酵液充填罐板框压滤滤饼调浆罐菌浆喷雾、干燥菌粉包装轻质碳酸钙、硫酸铝滤液肥料或灭蛆产品质量检验先将菌悬液移入水浴锅8015min，再计数我国合格产品是1109个/g ，2 109个/ml苏云金杆菌的应用品种的选择要依目标害虫的种类来选择 eg：苏云金杆菌以色列亚种对双翅目的蚊、蚋有剧毒，对鳞翅目的害虫无毒。 拟步甲变种对鞘翅目的害虫有

43、毒，对鳞翅目的害虫无毒。 而一些对鳞翅目害虫高毒效的苏云金亚种、库斯塔克亚种和蜡螟亚种等，对鞘翅目昆虫却无杀伤作用 应用浓度的确定依产品的毒力效价和防治对象的种类以及气候因素等而定 害虫发生程度和幼虫发育时期 温度 随配随用苏云金杆菌从稀释到使用，一般不要超过12h 混合应用 可无条件地与其他微生物杀虫剂，如昆虫病毒制剂、白僵菌制剂等混合应用与化学农药混用也可以增效防止抗性产生不同制剂交替使用适量的杀虫剂用来控制对苏云金杆菌不敏感的昆虫。在害虫最敏感的时期使用，如初孵或低龄幼虫期。如发现抗性产生，可加大田间使用剂量 制剂保藏 应贮存在阴凉干燥的仓库中，注意防潮，防高温，避免阳光照射 。不可与碱

44、性物质混放于一个仓库 。施用技术喷施 、撒毒土或颗粒剂 金龟子乳状杆菌金龟子乳状杆菌包括日本金龟子芽孢杆菌和缓死芽孢杆菌两种。是一群对鞘翅目害虫金龟子的幼虫蛴螬有高度致病力的专性病源芽孢杆菌。 是G+，大小为0.50.8m l.35.2m，单生或成对，不运动，形成芽孢时芽孢位于菌体的一端，随着芽孢的膨大，菌体变成梨形。 只能在寄主金龟子幼虫(蛴螬)体内生长发育，形成营养体和芽孢(每头幼虫可产生2 5109个芽孢)，离开寄主后，营养体迅速死亡，芽孢则能在土壤中存活多年。 球形芽孢杆菌 一种在自然界广泛分布的芽孢杆菌，有少数菌株对蚊幼虫有高毒力，其毒效成分在细胞内。真菌杀虫剂现已知有500多种真菌

45、能寄生于昆虫和螨类，导致寄主发病和死亡。杀虫真菌分属于卵菌、接合菌、子囊菌、担子菌和半知菌。 接合菌中的虫霉目是一群十分重要的杀虫真菌，它产生分生孢子易于传播，抗逆能力强，侵染快，在适合条件下能引起寄主害虫的大规模流行病。虫草菌属有100多种，寄生于多种昆虫幼虫。 白僵菌 白僵菌属半知菌类的丝孢霉目，丝孢霉科。白僵菌的形态、培养特性 白僵菌属有球孢白僵菌、卵孢白僵菌和小球孢白僵菌三个种。最常用的是球孢白僵菌。形态特征 球孢白僵菌菌丝细长，无色透明，直径1.52.0um，有隔膜，菌落平坦呈绒毛状，后期呈粉状，表面白色至淡黄色。分生孢子梗多次分叉，聚集成团，呈花瓶状，分生孢子着生于小梗的顶端，孢子

46、呈球形。培养特性 白僵菌的生长温度5 35，菌丝生长最适温度为22 26；好氧性；30和25 50%的空气相对湿度有利于孢子的形成，孢子萌发要求相对湿度95%以上。白僵菌防治害虫的原理白僵菌感染昆虫的途径是通过皮肤，其次通过口腔(消化管)及气孔。白僵菌的致病作用靠分生孢子发芽时的机械力，以及分泌的一种几丁质酶和蛋白质毒素(接触毒素)破坏和溶解昆虫的表皮，使芽管侵入体腔，而且对昆虫还有毒杀作用。由芽管伸长的菌丝能直接吸收昆虫体液作为养料，在菌丝分支顶端形成筒形孢子(短菌丝细胞) 。筒形孢子和菌丝弥漫在血液里，可妨碍昆虫的血液循环。随着白僵菌在昆虫体液中的大量繁殖，体液的理化性质发生变化，导致昆虫

47、因新陈代谢机能紊乱而死亡。最后，因全部筒形孢子发芽伸长形成的菌丝大量吸收水分，使昆虫尸体硬化，故又有“硬化病”之称。菌丝从气门和节间伸出体外形成气生菌丝和分生孢子梗，顶端形成分生孢子。 白僵菌制剂的质量检验 有效活菌数为5109个/g 白僵菌的使用方法喷粉、灌心 、放活虫法 、死虫扩散法 白僵菌可导致家蚕产生一种毁灭性疾病，在蚕区切勿使用。病毒杀虫剂病毒杀虫剂的种类核型多角体病毒(NPV) dsDNA病毒，呈棍棒状，包在包涵体即多角体内(每个多角体含10个以上的病毒粒子)，在被感染昆虫的细胞核内发育。是已发现种类最多的昆虫病毒，主要通过口器传染。病死的幼虫倒吊在植物枝条上，由于组织液化下坠，使

48、下端膨大，这是寻找感染虫体的特征。质型多角体病毒(CPV)dsRNA病毒，病毒粒子不是杆状而近于球形，一个多角体包含体内含有210个病毒粒子，多角体在昆虫细胞质内发育。死虫躯体萎缩，无倒挂特征。 颗粒体病毒(GV) dsDNA病毒，杆状，包涵体呈圆形、椭圆形颗粒状，每个包含体只有一个病毒粒子。当寄主吞入GV后，在肠道中将包含体消化，释放出病毒粒子，侵入真皮、脂肪组织、气管和中肠上皮，先进入细胞核，在核内繁殖，随后释放到细胞质中，形成只含一个病毒粒子的包含体。 无包含体病毒 病毒粒子球状，不形成包涵体。侵染的宿主范围广泛，除昆虫纲外，还可侵染蜘蛛纲、甲壳纲等动物， 农用抗生素 农用抗生素是由微生

49、物产生的对微生物、昆虫、植物等其他生物，显示特异性药理作用的物质。这是一种具有活性的，微生物新陈代谢产物。 农用抗生素易被微生物分解，残留量低，对人畜安全，不污染环境，用药量小，便于运输。 抗生素的特性内吸和运转 稳定性和有效性 药害问题 有效浓度比药害浓度低三倍以上，才比较安全。 对人畜的毒性和残毒问题 选用的抗生素应对人畜和各种水生生物安全无毒。一般要求在常用浓度20倍以上对人畜无毒害，200倍以上对鱼、虾、贝等也无毒害。 易被微生物分解而失去活性，不致在环境中积累，残留毒性不大，属于无公害农药。 抗生素的抗菌机理阻碍菌体细胞壁的合成 影响菌体细胞膜的通透性 抑制核酸的复制 抑制菌体蛋白质

50、的合成 微生物饲料单细胞蛋白和菌体蛋白饲料秸秆发酵饲料其它微生物饲料单细胞蛋白和菌体蛋白饲料(SCP) 利用微生物提高粗饲料的营养价值，其主要途径在于利用微生物对秸秆类物质进行分解与转化改造，使牲畜对秸秆中纤维素类物质更易于消化，通过微生物的蛋白质提高饲料蛋白质的含量，从而起到以粗代精、节粮抵粮的作用。概述 SCP它是指用于食品和饲料添加剂的微生物菌体。单细胞蛋白和菌体蛋白都是指大量生长的微生物菌体或其蛋白提取物。但前者多指用酵母或细菌等单细胞菌类生产的产品，后者则包括多细胞的丝状真菌类菌体产品，两者都可作为人或动物的蛋白补充剂。不论是分离出的细胞蛋白还是全部细胞物质都称之为SCP。 单细胞蛋

51、白和菌体蛋白饲料的特点生长速度快，蛋白含量高。 原料来源丰富 生产可因地制宜，生产过程易控制 营养成分多 生产菌株的选择标准能够很好地同化基质碳源和无机氮源繁殖速度快，菌体蛋白含量高无毒性和致病性菌种性能稳定最好能搞混菌培养 生产工艺斜面菌种培养菌种扩大培养发酵离心或干燥菌体处理干燥 产品原料预处理秸秆发酵饲料 发酵饲料有两种，一种是通过接种进行发酵的饲料，如秸秆微贮(处)饲料；另一种是不接种的发酵饲料，如青贮饲料。秸秆微贮(处)饲料原理 农作物秸秆经过微生物发酵处理后提高饲料转化效率并将其贮存在一定设施内的技术，称秸秆微生物发酵贮存技术，简称微贮或微处技术。 微处（贮）饲料主要用来饲喂牛、羊

52、等反刍家畜。 微处饲料的发酵过程是利用各种高活性微生物复合菌剂，在厌氧和一定温湿度及营养水平的条件下，进行秸秆难利用成分的降解和物质转化，从而提高农作物秸秆的营养价值，把粗饲料加工成养分较高、适口性较好的饲料，以增加禽畜的采食量和营养吸收。发酵过程：首先是曲霉将一部分木质素、纤维素等物质降解为各种易发酵的糖类。其次是酵母和乳酸类细菌将糖类经有机酸发酵转化为乳酸和挥发性脂肪酸，使贮料pH值降到4.55.0，抑制了丁酸菌、腐败菌等有害微生物的繁殖，并将饲料中的某些成分进一步合成营养价值较高的物质。 秸秆微贮(处)饲料的特点成本低、效益高 提高消化率 适口性好、采食量高 无毒无害、饲料保存期长、制作方便 秸秆微贮(处)饲料的生产