第十八章基因诊断与基因医治

1、第十八章 基因诊断与基因医治一、 单项选择题1内源性基因发生变异不包括A 基因结构突变B 基因扩增C 基因重排D.基因表达异样E.病原体基因侵入体内2基因诊断的经常使用技术方式不包括A.RFLP分析B.基因测序C.基因剔除D.ASO杂交法E.PCR/SSCP3将突变基因进行矫正的基因医治方式是A 基因灭活B自杀基因的应用C 基因置换D.基因增补E.基因矫正4目前哪一种细胞不能作为基因医治的靶细胞？A 淋巴细胞B 肝细胞C 肿瘤细胞D.造血细胞E.生殖细胞5外源性病原体基因感染人体后要紧引发哪一种疾病？A 心血管疾病B 遗传病C 传染病D.月中瘤E.高血压6通过目的基因的非定点整合，使其表达产物

2、补偿缺点基因的功能或增强原有功能的基因医治方式是A 基因灭活B 基因置换C 基因矫正D.自杀基因的应用 E.基因增补7间接体内疗法的基因程序中不包括A.选择医治基因B.将外源基因直接导入体内C.选择靶细胞D.选择载体E.将外源基因导入靶细胞8以下哪一种技术不是目前基因医治采纳的方式A 基因缺失B 基因置换C 基因矫正D.自杀基因的应用 E.基因增补9基因组结构突变发生在生殖细胞可能引发A 传染病B 肿瘤C 心血管疾病D.高血压E.遗传病10利用反义核酸阻断变异基因表达的基因医治方式是A 基因矫正B 基因失活C 自杀基因的应用D.基因增补E.基因置换11最确切的基因诊断方式是A 基因测序B 核酸

3、分子杂交C RFLP 分析D.斑点杂交法E. PCR/ASO法12以下哪一种检测技术不属于DNA 诊断A. RFLP分析B. PCRC. ASO杂交D.限制性内切酶酶谱分析E. Northern杂交 13目前在基因医治的临床操作当选用最多的基因载体是A 腺病毒相关病毒B PBR322C 噬菌体D.逆转录病毒载体E.脂质体14目前基因医治所采纳的方式中，最经常使用的是A 基因失活B 基因增补C 基因矫正D.自杀基因”应用技术E.基因置换15利用外源基因表达一种特异性酶，催化药物前体转化为细胞毒性物质而致使细胞死亡的基因医治方式是（）A 基因矫正B 基因灭活C 自杀基因的应用D.基因置换E.基因增

4、补16将外源医治性基因导入动物细胞的方式不包括A DEAE- 葡聚糖法B 显微注射法C 电穿孔法D. CaCl2沉淀法E.病毒介导的基因转移17. 以下方式中哪一种方式不是基因诊断的经常使用技术或方式A 基因测序B 核酸分子杂交C PCRD. RFLP分析E.细胞培育 18非病毒介导基因转移的化学方式是哪一种？A 显微注射B 电穿孔C 基因枪技术D DEAE 一葡聚糖法E DNA 直接注射法19 1990年采纳基因医治疾病并取得成功的一例是A 糖尿病B 重症联合免疫缺点综合症C.高胆固醇血症D.弛中海贫血E.血友病 20以下哪一种方式不属于非病毒介导基因转移的物理方式？C 显微注射A DNA

5、直接注射法B 电穿孔D.脂质体介导E.基因枪技术21基因诊断的技术特点不正确的选项是A 诊断灵敏度高B 属于病因诊断，针对性强C.有很高的特异性D.技术单一，对操作人员要求低E.适用性强，诊断范围广:、多项选择题1基因诊断可用于C 恶性肿瘤)A 遗传病B 亲子鉴定D.器官移植E.感染性疾病2以核酸分子杂交为基础的基因诊断方式有B 限制性核酸内切酶酶谱分析法A 基因序列测定C.基因剔除D.等位基因特异寡核甘酸探针杂交法E DNA 限制性片段长度多态性分析法3在基因医治中，将外源基因导入动物细胞的物理方式有A 基因枪技术B 电穿孔C 氯化钙沉淀法D.显微注射E. DNA直接注射法4基因诊断中经常使

6、用的分子生物学技术有A 基因测序B 细胞培育C 核酸分子杂交D DNA 芯片技术E PCR5基因医治中最常利用的病毒载体有A 肝炎病毒D .腺相关病毒B HIVE.腺病毒C 逆转录病毒6.目前在基因医治中常选用的基因载体是A.逆转录病毒B .质粒D. HIVE.腺病毒.基因医治可用于A.恶性月中瘤B.遗传病D.心血管疾病E.免疫缺点.基因医治能够采纳的方式有A.应用自杀基因B.基因矫正D.基因置换E.基因增补.内源基因的结构突变包括A.基因重排B.转导D.基因表达异样E.基因扩增C .腺病毒相关病毒C. AIDSC.基因失活C.点突变三、填空题.基因突变可致使 的改变，从而引发 。.外源性基因

7、变异是指 疾病。.膜上印迹杂交方式包括 、和 等类型。. Southern blotting式于1975年由 初创，该法可用于检测 。. Nouthern blotting方式于1977年由 成立，该法可用于检测 。. PCR技术的工作原理是模拟体内 进程；其改良的地方是用 取 代DNA聚合酶，用合成的 代替RNA引物。. PCR进程中，每循环一次包括 、和 三大步。. PCR循环进程中，变性是指 ;退火是指;延伸是指。. RT-PCRg指;其能够归纳为三个时期： 、和。. PC叱术应用十分普遍，如 、和 等。.基因诊断可用于 、和 等。.基因变异致病的要紧类型是 和。.目前基因医治的要紧策略

8、有 、和 等。.基因诊断经常使用技术方式有 、和。.内源基因的变异可分为 和。.基因诊断中最经常使用诊断技术是 和。.基因转移方式归纳地讲有 、和.目前用作基因转移载体的病毒有逆转录病毒 和.目前基因医治中导入基因的方式有 和。.对已知基因突变位点的检测需人工合成两种寡核甘酸探针，一种是与 立补的寡核甘酸，另一种是与 互补的寡核甘酸四、名词说明1.基因失活5.基因诊断9.自杀基因13.基因置换4. Southern blotting8.生物芯片12.核酸分子杂交16. PCR技术.RNAi3.基因矫正.反义RNA7.基因医治.免疫基因医治11.基因增补. Northern blotting 1

9、5.探针17.中性突变18。限制性片段长度多态性五、问答题.简述核酸分子杂交的大体原理。.基因医治要符合哪些要求？.当前基因医治拟采纳哪些方式？.简述基因诊断的特点。.试述内源基因结构突变的要紧类型和内源基因结构突变所致的疾病。.简述基因诊断的临床应用概况。.目前基因诊断可应用于哪些疾病？.简述基因医治的大体进程。.简述核酸分子杂交（周相）操作的要紧步骤。.简述PCR技术原理和大体进程。.何谓Southern blotting ? 其要紧有哪些用途。.何谓Nouthern blotting?其要紧有哪些用途。参考答案一、 单项选择题21 D二、多项选择题A、B、 C、E 2B、 D、E 3 A

10、、 B、 D、 E4A、 C、 D、 E5C、D、 E6 A、 C、 E7 A、 B、 C、 D 、 E8A、 B 、 C、 D、 E9 A 、 C、 E四、填空题1相应表型；疾病。2病原体感染性Southern blotting Nouthern blotting 斑点杂交Edwin Southern 基因组 DNA 特异碱基序列Alwine 总 RNA或 mRNADNA复制 TaqDNA聚合酶 DNA引物7变性退火延伸8 DNA 双链解开为单链模板链与引物的结合 引物的延伸9逆转录PCR 提取 RNA RT PCR. DNA 的微量分析克隆目的基因 病原体检查 肿瘤诊断遗传病的基因诊断恶性

11、肿瘤的基因诊断感染性疾病的基因诊断法医鉴定12内源基因突变外源基因的入侵13基因矫正基因置换基因增补 基因失活14核酸杂交PCR 基因芯片 基因测序15基因结构突变表达异样16核酸分子杂交PCR17化学法物理法 生物 （病毒）法18物理方式化学方式19间接体内疗法直接体内疗法20突变基因碱基序列 正常基因碱基序列五、名词说明1是将特定的反义核酸（反义 RNA 、反义 DNA 和核酶 ）导入细胞，在转录和翻译水平阻遏某些基因的异样表达，从而达到医治目的。2. RNAi是指在特定因子作用下，由导入胞内的双链RNA降解成的约22nt&右的SiRNA ,后者利用碱基配对原那么与特异基因表达的 mRNA

12、 结合，并促使其降解，从而在转录后水平调控基因的表达。3是指将致病基因中的异样碱基进行纠正，而正常部份予以保留的基因医治技术。 DNA 分子经限制性内切酶酶切和凝胶电泳后，可按分子量大小分离，再进行变性处置后， 将单链 DNA 从凝胶中吸附转移到硝酸纤维素膜或尼龙膜上， 然后在该滤膜上与标记探针进行杂交反映，称为SouthernER迹杂交法。.是利用分子生物学技术，直接检测体内DNA或RNA的结构及其表达是不是异样，从而对疾病做出诊断，为医治提供依据。6反义RNA 即是与其mRNA 碱基序列互补的 RNA 。7是运用基因工程技术改换、校正或增补靶细胞内有缺点的基因，以达到医治疾病的目的。8.基

13、因芯片又叫DNA芯片、cDNA芯片、寡核甘酸阵列。其要紧是利用固相支持物上数以万计的已知碱基序列的寡核苷酸片段，与标记样品进行分子杂交，通过检测、分析杂交信号的强弱，以研究组织细胞内基因表达谱或基因不同表达等。9在病毒或细菌中的某个基因可产生一种特异性酶，它可将本来无细胞毒或低细胞毒药物前体转化为细胞毒性物质，将感染细胞杀死，此种基因称为 “自杀基因” 。10将编码外源性抗原的基因导入体细胞表达抗原蛋白，诱导机体免疫系统激活，达到防病医治目的。11在保留异样基因的情形下把正常基因导入体细胞，通过基因的非定点整合进入体细胞 DNA ，并使其表达，以补偿缺点基因的功能；或导入靶细胞原先不表达的基因

14、，利用其表达产物医治疾病。12核酸分子经变性与复性，两条具有互补碱基序列的单链核酸分子结合成杂化双链的进程。13是将特定的目的基因导入体内，对其缺点基因进行精准的原位替换，使细胞内基因得以正常表达。14将提取的RNA 样本经变性琼脂糖凝胶电泳分离后，转移到硝酸纤维薄膜上，再采纳标记探针与之杂交，经显影或显色，检测信号强度，以用于组织细胞中总RNA或mRNA的定性和定量分析。一般是指带有标记的、并已知碱基序列的DNA或RNA片段，能与待测样本中单链核 酸分子互补配对结合，进而检测是不是有同源序列。又称基因扩增技术。在TaqDNA聚合酶催化下，以目的基因为模板、dNTP为原料， 在特异性引物基础上

15、沿着模板链延伸合成互补链。反复通过变性、退火和延伸这一循环进程，使目的基因呈指数扩增。错义突变假设发生在蛋白编码的非必需区，编码蛋白的活性不改变，这种突变称为中性突变。18若是突变发生在限制性核酸内切酶的识别位点上，用相关的限制酶切割基因组DNA，就会产生长度改变的片断，称为限制性片断长度多态性（RFLP） 。五、问答题1核酸分子杂交的大体原理是依据DNA 双链碱基互补、变性和复性的原理，用带有标记的、并已知碱基序列的核酸片段作为探针，与待测样本中单链核酸分子互补配对结合，进而检测样本中是不是存在与其互补的同源核酸序列。2.基因医治要符合：属于已明确的单基因缺点性疾病；仅限于体细胞；靶细胞 有

16、亲缘性和可操作性等；有明显疗效和无或低危害性等；表达水平稳固，时程长； 必需有动物实验基础3目前基因医治拟采纳的方式有基因矫正、基因置换、基因增补、反义核酸技术及自杀基因的应用等。4.基因诊断的对象是基因，它具有一样诊断所不具有的以下特点：针对性强、特异性高，以特定的基因为探测靶点；诊断灵敏度高，PCR技术具有放大效应，PCR技术的几何扩增效应可检出pg水平的靶基因；适用性强、诊断范围广，可用于内源性基因 和外源性基因的检测；简便快速、易行。5内源基因结构突变包括点突变、缺失或插入突变、染色体易位、基因重排、基因扩增等。突变假设发生在生殖细胞，可引发各类遗传性疾病；假设发生在其他细胞，可致使肿

17、瘤、心血管疾病等。6.基因诊断临床应用概况：遗传病的基因诊断：如镰刀形红细胞贫血病的琳蛋白基因的第六个密码子发生单个碱基突变。这一突变改变了该基因内部的一个内切酶Mst n作用位点。当把正常人和带有基因突变者的基因组 DNA用Mst R酶解后，用 琳蛋白基 因探针杂交， 结果会显现不同的 DNA 条带， 依此对其进行基因诊断。 肿瘤的基因诊断：从分子生物学角度来看， 肿瘤的发生是由某些因素的作用所致的多个癌基因的激活或抑癌基因的缺失。因此有人以为肿瘤是一种多基因异样性疾病。依其基因突变事实，可采纳相应的技术对肿瘤进行基因诊断。诊断结果对了解癌变机制，肿瘤分类分型及预后均有指导意义。感染性疾病的

18、基因诊断：采纳分子杂交技术和PCR技术等对感染性疾病进行基因诊断， 能够快速准确地诊断出致病微生物的种类； 检测出带菌者和潜在感染性；检测病原微生物耐药性，及进行病原流行病学调查等。7目前基因诊断可应用于遗传性疾病、肿瘤、感染性疾病和某些传染性流行病等的诊断、分类分型；还可用于器官移植的组织配型。8.大体进程如下：a）医治基因的选择 选择对疾病有医治作用的特定目的基因是医治的 首要问题。b）基因载体的选择有病毒载体和非病毒载体。经常使用病毒载体，如逆转录病毒等。c）靶细胞的选择 仅限选择体细胞，如淋巴细胞、造血细胞，上皮细胞等。d）基因转移是重要环节。导入哺乳动物细胞的方式有非病毒介导基因转移

19、和病毒介导的基因转移。 非病毒介导的包括物理的和化学的方式。 如显微注射、 电穿孔等物理方式，磷酸钙沉淀、脂质体介导等化学方式。e）外源基因表达的挑选利用载体中的标志基因对转染细胞进行挑选。 f） 回输体内 将医治性基因修饰的细胞以不同方式回输体内以发挥医治成效。如淋巴细胞可经静脉回输入血。9要紧步骤为：（ 1）待测核酸样本制备；（2）凝胶电泳分离待测DNA； （3）用变性液让凝胶中的DN度性；（4） Southern印迹转移；（5） DNA勺固定；（6）特异性探针的制备与 标记；（ 7）预杂交、杂交；（ 8）杂交信号检测；（ 9）结果分析判定。PCR大体原理：在体外进行DNA复制进程，以目的基因为模板，设计的特异寡核 甘酸为引物，dNTP为原料，由TaqDNA聚合酶催化在引物基础上进行延伸合成互补链， 通过变性、退火和延伸这一进程的反复进行，可使目的基因在短时刻内呈指数扩增。大体成份：DNA模板、特异性DNA引物、TaqDNA聚合酶