实验动物毒理学基础

1、1毒理学实验基础 The Basic Theory of Toxicological Test2第一节 毒理学实验的原则与局限性第二节 毒理学实验的基本目的 第三节 实验动物 *第四节 动物实验基本方法 *第五节 毒理实验质量控制第六节 动物实验的职业道德 3第四节* 动物实验基本方法4(一)理论准备 正确选题立项和设定假设实验研究计划和方案的制订实验方法的选定了解有关实验动物方面的基础知识一、动物实验前准备5(二)条件准备 仪器设备方面准备 饲养场所的准备 动物的准备 6(三) 预试验目的：1. 检查各项准备工作是否完善； 2. 检查实验方法或步骤是否可行； 3. 测试指标是否稳定、试剂是否

2、齐全； 4. 练习操作、检测技术。7二、动物实验基本操作技术实验动物的捕捉与固定实验动物编号、标记、分组实验动物染毒方法实验动物的麻醉方法实验动物生物材料的采集法实验动物处死方法8（一）实验动物的捕捉与固定 原则： 以方便实验操作为主； 保证操作者安全； 防止动物意外受到损伤； 禁止所有粗暴方法对待动物。9 小鼠抓取固定方法 抓取A10固定方法 手固定法 11大鼠抓取固定方法 抓取B12固定方法1314 先用手掌迅速扣住鼠背，抓住其肩胛上方，以拇指和食指环握颈部，另一只手托住臀部。豚鼠的抓取固定方法 C1516兔的抓取固定方法 1可损伤两肾2可造成皮下出血3可伤两耳 D1718(二）实验动物称

3、重、标记、分组 1.称重 根据体重来判断动物大致年龄2. 标记 染色法用化学试剂在动物体表的不同部位进行涂染。编号原则：先左后右或先右后左，从上到下。可用两种颜色。1920常用的染色剂：3%5%的苦味酸（黄色）2%的硝酸银溶液（咖啡色）0.5%的中性品红溶液（红色）煤焦油酒精溶液（黑色） 212218769523423 耳缘剪孔法 在动物的耳边缘剪出不同的缺口或打成不同的小孔进行标记。 2425烙印法 用烙印钳或刺针将号刺在或烙印在动物无体毛或明显部位，再用溶在酒精中的黑墨在针刺处涂抹。 26号牌法用特制的金属号牌固定在动物的耳上或颈项部笼子编号法在装动物的笼子进行标记编号27 3. 分组 所

4、有动物分配到各组的机会均等，避免主观选择倾向。 （1）随机数字表：完全随机和随机区组； （2）计算机软件：28 染毒（administration exposure）为研究受试化学物对实验动物的毒性作用，模拟人体的主要接触途径，将受试物经过某种途径进入动物体内，这种过程叫做染毒。（三）实验动物染毒方法291. 各种染毒途径 经口染毒 经呼吸道染毒 经皮染毒 注射途径30直肠给药脊髓腔给药关节腔给药延髓给药 其他方式31经口染毒 灌胃 喂饲 胶囊吞服323334灌胃 优点：a.受试物不与口腔接触， b.接触受试物剂量准确 缺点： a. 工作量大 b.可能损伤气管和食道3536 动物一次灌胃能耐受

5、的最大容积 动物种类 体重（g） 最大容积（ml） 小 鼠 30 1.0 2530 0.8 2024 0.5 豚 鼠 300 6.0 250300 4.05.0 大 鼠 300 8.0 250300 6.0 200249 4.05.0 100199 3.0 家 兔 3500 200 25003500 150 20002400 100 猫 3000 100150 2500 3000 5080 犬 10000 15000 200500 37喂饲 优点：符合人类接触外来化合物的实际情况 缺点：a.如受试物有异味，动物可能拒食。 b.如受试物易挥发，染毒剂量可能降低 c.如受试物易水解或与饲料中某些成

6、分 发生反应，可改变化学物毒性38胶囊吞服 优点：a.剂量准确。 b.适于易挥发、易水解和有异味的 化学物。 缺点：不适于小动物。3940经呼吸道染毒 吸入染毒 气管内注入染毒静式吸入染毒动式吸入染毒41定义：在密闭容器内，加入一定量的毒物使之挥发并与容器内空气充分混合，形成一定浓度的含毒空气环境，放入动物，在规定的时间内观察动物的毒性反应。 静式吸入染毒染毒装置：有机玻璃染毒柜或大的玻璃瓶。 4243 动式吸入染毒定义：采用机械通风装置，连续地将新鲜空气和毒物送入染毒柜，并排出等量的污染空气，使染毒浓度相对稳定。 染毒装置：a.染毒柜 b.机械通风系统 c.配气系统44静态染毒柜动态染毒柜4

7、5静式染毒与动式染毒的比较静式吸入染毒动式吸入染毒优点1. 设备简单，操作容易；2. 消耗毒物少；3. 用于急性毒性实验，毒物来源少也用于其它毒性试验。. 染毒柜内毒物浓度恒定. 随时间延长，容器内O2和CO2浓度恒定；3. 空气中温度和湿度恒定；. 适用于较长时间、反复染毒的实验。缺点随时间延长，1. 容器内O2下降、CO2含量升高；2. 毒物浓度下降；3. 气温、气湿升高。. 设备装置复杂、昂贵；. 毒物消耗量大。46经皮肤染毒）备皮：机械脱毛、化学脱毛 脱毛区体表面积15%）染毒方法浸尾涂皮47经注射途径 腹腔注射； 肌肉注射； 静脉注射； 皮下注射；484950515253常用实验动物

8、经不同方式注射染毒时的注射剂量（ml）注射方式小鼠大鼠豚鼠兔狗腹 腔0.21.01325510515肌 肉0.10.20.20.50.20.50.5125静 脉0.20.51215310515皮 下0.10.50.510.5213310542. 染毒前准备受试物的准备： 了解受试物的一般情况。 了解受试物的纯度和杂质成分； 了解受试物的结构和理化性质； 用同一种，同一批号的受试物； 按染毒途径不同，将受试物配成一定的剂型。55溶剂或助溶剂的选择： 无毒； 与受试物不起反应； 不影响毒物的吸收； 不影响受试物的毒作用和观察指标56剂型的选择： 喂饲法：无特殊气味或味道，性质稳定，不易氧化； 灌胃

9、法：为液体，无明显的局部损伤或刺激作用； 静脉注射法：水溶液； 腹腔注射法：水溶液； 呼吸道染毒：均匀稳定分布的气体； 经皮染毒：为液体、膏状或糊状。 57（四）实验动物的麻醉方法 1.常用的麻醉剂挥发性麻醉剂：乙醚、氯仿等。 非挥发性麻醉剂：苯巴比妥钠、戊巴比妥钠、硫喷妥钠、氨基甲酸乙脂、水合氯醛。中药麻醉剂：洋金花、氢溴酸东莨菪碱等。 582. 麻醉方法 全身麻醉 吸入麻醉：多采用乙醚做麻醉药。 注射麻醉：腹腔注射也可静脉注射局部麻醉 表面麻醉 区域阻滞麻醉 局部浸润麻醉591.血液采集2. 尿液采集3.胆汁采集4.粪便采集（五）实验动物血液、体液采集法601.血液采集61 大、小鼠采血

10、剪尾采血眼眶静脉丛采血心脏采血断头采血腹主动脉采血62 豚鼠采血 耳缘剪口采血心脏采血股动脉采血背中足静脉采血63 兔采血 耳静脉采血耳中央动脉采血心脏采血股动脉、颈静脉采血 646566采血部位及采血量 采血方式 采血部位 采血量(ml) 采血前处置 小 鼠 大 鼠 部 尾静脉 0.030.05 0.30.5 分 尾动脉 0.10.3 0.51.0 采 足背中静脉 0.10.3 血 眼窝静脉丛 0.050.1 0.51.0 麻醉(不麻亦可) 颈静脉 0.51.0 35 麻醉手术 全 颈动脉 0.51.0 35 断 头 0.51.0 510 麻醉(不麻亦可) 采 心 脏 0.50.8 35 麻

11、醉、手术 后大静脉 0.51.0 24 同上 血 腹大动脉 58 同上67682.尿液采集 代谢笼法导尿管法压迫膀胱法膀胱穿刺法反射排尿法剖腹采尿法69703.胆汁采集：直接插管进入胆总管4.粪便采集：大小鼠用代谢笼，大动物直接取（六）实验动物处死方法安乐死法 安乐死是使实验动物在没有痛苦的情况下死亡的处置。7172 化学致死法 脊椎脱臼法 空气栓塞法 急性失血法 击打法 断头法 破坏脑脊髓法 其他方法73第五节 毒理学实验质量控制74人事方面。实验动物。实验仪器和设备。实验应有严格的标准化操作程序和要求。受试物的完整资料。实验记录。实验室工作人员。GLP：good laboratory pr

12、actice 优良实验研究规范SOP：standard operating procedure 标准操作方法 75第六节 动物实验的职业道德76动物实验与动物保护之间的争论 医学界对动物实验支持的态度坚定 科学界对动物实验的态度逐渐变为反对 哲学界绝大多数支持动物保护、反对动物实验 公众对动物实验的支持率正在下降，妇女比男人更反对动物实验 动物实验中提倡的“3Rs”概念替代（Replace） 减少（Reduction） 优化（Refinement）7778 替代（Replace） 应用无知觉材料的科学方法来代替使用活的有知觉脊椎动物的方法；低级动物代替高级动物、小动物代替大动物。用组织学实验代

13、替整体动物实验。用分子生物学方法替代动物实验。人工合成材料替代动物实验。计算机模拟替代动物实验。7980减少（Reduction） 指在能够保证获取一定数量与精确度的数量信息的前提下，减少动物的使用数量； 尽量使动物一体多用 用低等动物代替高等动物 尽量使用高质量动物 使用恰当的试验设计和统计学方法 81优化（Refinement） 指通过改善动物实验设施、饲养管理和实验条件，精细地选择、设计实验路线和手段，优化实验操作技术，使动物实验得出科学的结果。 82改善动物实验设施条件，提高动物实验质量 改善控制操作技术，减少对动物机体的干扰 控制疼痛 减少社会和环境因素对动物实验的影响 改进动物实验操作技术 从已有数据中捕捉信息，优化动物使用83 毒理学实验