宫颈癌基因E6E7mRNA(南阳讲课)

1、 科蒂亚生物(shngw)：周贺娟 E6/E7mRNA 新一代宫颈癌变风险评估(pn )方法宫颈癌变评估与共三十六页 HPV癌基因E6/E7mRNA 主要(zhyo)内容 报告解读、处理(chl)建议1 临床意义、适用范围 32共三十六页 主要(zhyo)内容1 HPV癌基因E6/E7mRNA 1共三十六页2.型别：120多种（依据(yj)L1 DNA）1.结构： 外壳蛋白(dnbi)：L1蛋白（72个五聚体）， L2蛋白（12个）。 内部遗传物质：闭环、双链DNA 。 （不含 RNA）3.分类：依据生物特性、致癌性 高危型HPV(HR-HPV)：16、18、31、33、35、39、45、51

2、、52、56、58、59、68、66 低危型HPV（LR-HPV）：6、11、42、43、44 什么是E6/E7 mRNA ?共三十六页L1: 主要(zhyo)衣壳蛋白，是疫苗的主要(zhyo)成分。 L2: 次要(cyo)衣壳蛋白，是市售抗体的主要识别位点。E4：结合并破坏细胞角蛋白网，形成挖空细胞的外观。E2：负性调节E6和E7，维持凋亡和细胞周期的调控。通常在病毒发生整合时失活。HPV 的主要致癌基因E6通过抑制p53而阻断凋亡E7 通过抑制pRB使细胞周期失控。XHPV的基因片段及功能E6/E7 mRNA ?共三十六页高危亚型HPV感染宫颈上皮细胞，将产生两种癌蛋白：E6和E7蛋白。癌

3、蛋白可与宿主细胞的细胞周期调节蛋白（抑癌蛋白如P53、RB等）相结合，导致细胞周期控制失常，发生(fshng)癌变。 （人民卫生出版社、妇产科学、2004年1月第6版）致癌原理(yunl) E6/E7 mRNA与宫颈癌的关系E6、E7mRNA-是宫颈病变开始和进展的必由之路!共三十六页HPV感染在宫颈(n jn)细胞内的表达过程基因(jyn)改变早于细胞改变共三十六页E6/E7mRNA： 是致癌基因E6/E7表达的直接产物； 是最终致癌物-E6/E7癌蛋白合成的模板； 是宫颈病变开始(kish)和进展的必要条件！ 小结(xioji)共三十六页 主要(zhyo)内容1 E6/E7mRNA的临床意

4、义与适用范围 2共三十六页高危(o wi)的HPV感染宫颈上皮细胞癌基因E6、E7 mRNAE6、E7 癌蛋白(dnbi)E6、E7 癌蛋白与抑癌蛋白P53、RB等结合宫颈细胞CIN或癌变癌基因E6、E7 DNAHPV病毒学检测病毒癌基因学检测细胞形态学检测HPV L1 DNAHPV L1 mRNAHPV L1 蛋白HPV复制繁殖HPV感染后演变路径及宫颈癌筛查&诊断方法应用共三十六页检测方法检测靶标主要检测意义巴氏涂片宫颈上皮细胞提示宫颈细胞已发生的病变情况，筛查的基本方法。主要用于评估现阶段宫颈（病变）情况。液基细胞学（TCT）HPV病毒学HPV病毒DNA提示是否有病毒感染。主要用于评估现

5、阶段宫颈是否有病毒感染。癌基因E6/E7 mRNA检测病毒癌基因E6/E7 mRNA提示病毒癌基因已经转录表达。可用于了解人体宫颈细胞或组织癌变的发展趋势。阴道镜检宫颈内表面提示已经发展到宫颈表面的病变及其位置。主要是更直接辅助检查现阶段宫颈（病变）情况。宫颈活检宫颈组织提示宫颈组织病变情况，确诊金标准。 临床意义-特异性强、阳性(yngxng)预测值高共三十六页正常宫颈感染HPV轻度宫颈上皮内瘤变(CIN )中度宫颈上皮内瘤变(CIN )高度宫颈上皮内瘤变(CIN )原位癌浸润癌依靠免疫力80%自行消退06-18 个月至少2年后5-10 年后一过性感染持续性感染62%转为正常16%进一步进展

6、22%维持原状54%转为正常30%进一步进展16%维持原状100%HPV感染(gnrn)致宫颈癌模式图什么样的感染者会进一步进展(jnzhn)呢？哪种检测方法能提示？共三十六页E6/E7mRNA检测 1、发现已感染HPV，且癌基因已经表达的宫颈(n jn)病变高风险 者, 特异性强、阳性预测值高； 2、弥补：细胞学检测敏感性； HPV检测特异性； 阴道镜/活检的漏检等。 3、预测发展趋势，指导后续治疗、随访。 提供关键的癌变(i bin)信息，治疗更及时，预防更有效！ 小 结共三十六页 适用范围（不局限于30岁以上(yshng)人群）： 1、筛查：细胞学+ E6/E7 mRNA检测； 2、辅助

7、诊断： （1）细胞学+E6/E7 mRNA检测； （2）若HPV（+） E6/E7 mRNA检测； （3）病理组织(zzh)+ E6/E7 mRNA检测。 3、手术后及随访时: 组织学+癌基因E6/E7 mRNA； 细胞学+ E6/E7 mRNA检测。共三十六页TCT结果正常的女性，在正常筛查间隔内一定是安全的吗？TCT结果：ASCUS，如何评估风险？ 直接镜检&活检(hu jin)：过度检查？ 随访：漏诊？ 30岁以下妇女，感染率高，清除率高，HPV（+）率高，该如何评估风险？筛查 常见(chn jin)问题共三十六页.Intracellular Human Papillomavirus E

8、6, E7 mRNA Quantification Predicts CIN 2 + in Cervical Biopsies Better Than Papanicolaou Screening for Women Regardless of Age. Arch Pathol Lab Med. 2012；136:956-960.共三十六页E6/E7 mRNA检测；联合TCT筛查 基因改变早于细胞形态改变，辅助(fzh)提高细胞学敏感性，ASC-US分流30岁以下女性筛查效率。 筛查应用(yngyng)共三十六页CIN1风险评估？随访时间确定。CINII-III的患者，手术方式(fngsh)

9、术后随访。 特殊病例：未生育女性、妊娠女性？ 随访间隔？ 辅助(fzh)诊断 常见问题：共三十六页正常宫颈感染HPV轻度宫颈上皮内瘤变(CIN )中度宫颈上皮内瘤变(CIN )高度宫颈上皮内瘤变(CIN )原位癌浸润癌依靠免疫力80%自行消退06-18 个月至少2年后5-10 年后一过性感染持续性感染62%转为正常16%进一步进展22%维持原状54%转为正常30%进一步进展16%维持原状100%HPV感染(gnrn)致宫颈癌模式图共三十六页预测(yc)性能ASCUS & LSIL者，2年内跟踪诊断至CIN2+女性(nxng)：HPV E6、E7 mRNA作为监测手段：检测呈阳性数量约是阴性数量

10、的69.8倍。HPV DNA作为监测手段：检测呈阳性数量约是阴性数量的5.7倍。Tor Molden etc. Predicting CIN2+ when detecting HPV mRNA and DNA by PreTect HPV-Proofer and consensus PCR: a 2-year follow-up of women with ASCUS or LSIL Pap smear. International Journal of Cancer. Int. J. Cancer, 2005,114: 973976.共三十六页E6/E7 mRNA检测 辅助活检后人群的后续处

11、理，提高诊断水平：组织学CIN1，建议采用E6/E7mRNA检测： E6/E7mRNA检测阳性，建议缩短随访时间； E6/E7mRNA检测阴性，建议根据医嘱随访。组织学CIN2+，建议采用E6/E7mRNA检测： E6/E7mRNA检测阳性，建议积极治疗； E6/E7mRNA检测阴性，建议保守(boshu)治疗，密切随访。 辅助诊断(zhndun)应用共三十六页手术(shush)后残端是否会残留病毒？复发的可能性多大？ 术后随访间隔是多久，确定依据是什么？ 术后随访 常见(chn jin)问题：共三十六页Detection of Residual/Recurrent Cervical Dise

12、ase after Successful LEEP Conization: the Possible Role of mRNA-HPV Test.Leep锥切术成功后检测剩余/复发的宫颈疾病：mRNA HPV检测可能发挥(fhu)的作用。14%-70%的阳性切缘患者5-15%的干净(gnjng)切缘患者 存在复发宫颈疾病的风险。E6/E7mRNA检测的随访共三十六页 Detection of Residual/Recurrent Cervical Disease after Successful LEEP Conization: the Possible Role of mRNA-HPV Te

13、st. Current Pharmaceutical Design 2013,19,1450-1457. 术后，mRNA（+）比mRNA（-）复发(f f)的几率更高n=116（CIN患者(hunzh)经LEEP刀治疗后）共三十六页E6/E7 mRNA检测，辅助术后的后续处理：手术后，病理(bngl)组织学诊断+E6/E7mRNA检测术后随访，细胞学+E6/E7mRNA检测。 术后随访(su fn)应用共三十六页病例分析(fnx)-30岁已婚女性 2013.12.3体检： E6/E7mRNA(+) 低度风险(fngxin) TCT正常未进行干预性治疗，3个月复查 2014.3.25 细胞学：A

14、SC-US E6/E7mRNA(+) 高度风险 术后病检结果：宫颈1点、6点慢性宫颈炎，部分区域呈湿疣性改变；12点处小灶区域CIN2LEEP共三十六页3: 2012.9月，广东一家医院，一病人66岁TCT HSIL，E6、E7mRNA检测阴 性，TCT阅片老师认为那个标本报告为癌都不为过，所以进行活检，但 活检结果为CIN1-2级，临床医生对活检不满意(mny)，并考虑到该病人年龄 比较大，行使锥切后活检，活检结果CIN1。1：2012.3月，河北一医院对一LEEP术后45岁病人(bngrn)加做E6，E7mRNA检 测，发现拷贝值为2万多，两周后重新取样检测，发现E6,E7 mRNA 检测

15、仍有一万多拷贝，于是重新取样活检，发现切缘为CIN3级。2：2012.7月浙江余姚市一医院，一病人HPV 检测阴性，TCT检测正常， E6、E7mRNA检测一万多拷贝，主任对该检测结果质疑，对该病人进行 活检，病理结果CIN23级。病例共三十六页 主要(zhyo)内容1 报告(bogo)解读及处理建议 3共三十六页 细胞学E6、E7mRNA结果解读临床处理建议 正常-未检测到癌基因转录。1年后复查细胞学和E6/E7 mRNA。 +癌基因转录，未观察到细胞形态的改变。酌情进行阴道镜检或6个月后复查细胞学和E6/E7 mRNA。ASC-US -未检测到癌基因转录。6-12个月复查细胞学和E6/E7

16、 mRNA。 +癌基因已经开始转录，细胞形态处于转变期。异常-癌基因此时处于转录不活跃状态。 +癌基因已经开始转录，细胞形态已经明显改变，处于细胞形态改变状态。阴道镜/活检(hu jin)如无病变(bngbin)，半年后复查E6/E7 mRNA如E6/E7 mRNA（+），查细胞学细胞学ASC-US,阴道镜检如E6/E7 mRNA（-），半年后查E6/E7 mRNA+细胞学。阴道镜/活检无病变：严密随访CIN2+:相应手术治疗共三十六页组织学E6、E7mRNA结果解读临床处理建议 CIN1-未检测到癌基因转录。 立即用病理标本的石蜡切片做E6/E7mRNA检测+癌基因处于转录活跃状态，进展风险

17、较大。1、建议用病理标本的石蜡切片做E6/E7 mRNA检测，作为 治疗的辅助指标。2、严格随访或进行积极处理（如冷冻、电灼的病灶处理CIN2/3 -癌基因处于转录不活跃状态。1、立即用病理标本的石蜡切片做E6/E7 mRNA检测，作为治疗的辅助指标。 2、临床处理请参照宫颈癌诊治指南。3、建议术后6个月进行细胞学及E6/E7 mRNA检测。 +癌基因处于转录活跃状态，进展风险较大。1、建议用病理标本的石蜡切片做E6/E7 mRNA检测，作为治疗的辅助指标。 2、临床处理请参照指南,如宫颈切除或消融。建议积极处理及严格随访。3、建议术后6个月残端进行细胞学及E6/E7 mRNA检测。E6/E7

18、 mRNA（-），6个月复查(fch)细胞学及E6/E7 mRNA检测。E6/E7 mRNA（+）、6个月复查细胞学ASCUS或E6/E7 mRNA(+)，建议(jiny)积极处理,如冷冻、电灼或LEEP。共三十六页报告单解读(ji d)阴性共三十六页报告单解读(ji d)阳性共三十六页取样(qyng)方法一、细胞样本二、组织(zzh)样本 石蜡切片： 厚度3-5um切片4-10片宫颈上皮脱落细胞 同TCT可与TCT共用 （一般5-10ml，不少于3ml）共三十六页小结(xioji)高危HPV的E6/E7致癌基因表达产生E6/E7癌蛋白是宫颈癌的关键病因。E6/E7mRNA： 是E6/E7癌蛋白合成的模板； 是宫颈癌变的必由之路！E6/E7mRNA检测： 筛查、辅助诊断(zhndun)、术后随访。检测取样： 脱落细胞同TCT 组织取样：石蜡切片 共三十六页感谢您的倾听(qngtng)！祝：身体健康 工作(gngzu)顺利 心想事成！共三十六页内容摘要科蒂亚生物：周贺娟。外壳蛋白：L1蛋白（7