GB4789.4-2010食品微生物学检验沙门氏菌检验_图文.

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食品微生物学检验沙门氏菌检验

GB4789.4-2010

北京陆桥枝术有限责任公司

枝术凰务电话售服务电话/p>

技术部邮錨:luqiaotechU

□沙门氏菌简介

□2010版国标主要修订内容

□沙门氏茵的检验步骤及注意事项

□沙门氏菌检验过程中的常见问题

沙门氏菌简介

□沙门比菌属:肠杆苗科

□沙门氏菌能引起胃肠炎、伤寒.败血症等人类疾病，严重时能导致死亡.

□种类繁多，抗原结构复杂，在《ANTIGENICFORMULAEOFTHESALMONELLASEROVARS》(20079thedition)中已公布了2579个血清型.

□食物是人类感染沙门氏茵的主要途径.

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沙门氏菌简介：生物学特征

□形态特征：革兰氏阴睦、两端饨圆短杆蔺，无芽葩，一般无英膜.除鸥沙门氏苗和雏沙门氏蔺外，都有周身粮毛，运动力强

□培养特性；需氧戎兼性庆氧，2・CY2・C撷可生长，敢适生长温度为37C,ftitpH为

6.47.8

□革兰氏阴性.需氧或變性廉氢无芽砲杆菌

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2010版国标主要修订内容

/修改了标准的中英文名称

/修改了标准的范围

/修改了培养基和试剂；

“修改了设备和材料；

丁修改了附录A（规范性附录）培养基和试剂

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2010版国标主要修订内容

关于培养基和试剂的修订说陨—

/我们的产品均歿\

^＞201o版黑胃

O

＞修改了HE琼脂和三糖铁琼脂的配牙.

＞删除了08版国标中一些培养基、试剂盒及设备的商品名，如科玛嘉，VITEK等.

GB4789.4-2010

25fittd.)H^4.225niLBPXV

检验流程

36*C=tlK?・8b-18h

厂

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rsi・沿口敏・NA.・ft(pJl7.2)・KCN

检验步骤及注意事项：前增菌

＞称取25g(mL)样品于盛有225mLBPW的无葡均质杯中，以

8000-lOOOOr/min均质伽in-2min*或置于盛有225mLBPW的无菌均质袋中，用拍去式均质器拍打lmin・2min・若样品为液态，不需要均质，振荡混匀即可.

＞如需测定pH值.用lmol/L无葡NaOH或HC1调pH至6.8±0.2.

＞无菌操作将样品转至500mL4M形瓶中.如使用均质袋.可直接培养，369±代培养8h~18h・

检验步骤及注意事项：前增菌

检验步骤及注意事项：前增菌

>任何样品均需进行前■增菌・

尸缓冲旻台脓水（BPW）；不含任何抑茵咸分，有利于受搦沙门氏茵的复苏，使受槻伤鈿胞恢复到稳定的生理状态.

>冷冻样品解冻：45匸以下不超过15min,或2C-5C不超过18h.

>班议釆用抽击式均质的方式，更为便利，且节省培养空间.

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检验步骤及注意事呼选择性增菌「

”轻轻揺动培养过的样品泯合物，移取lmL,转种于lOniLTTB内，于42t：±lX：培养18h~24h.同时另取5L转种于10mLSC内，于36£±1£培养18h~24h.

TTB和SC两种选择性增苗肉汤必须同时使用（注意区分增苗培养温度）.

SC;如果干粉或溶液变红，则不能使用.开封后建议用封口膜密封后冷藏侏存，可延缓变质.

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检验步骤及注意事项；选择性分离

检验步骤及注意事项；选择性分离

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»分别用接种环取增歯液1环，划线接种于一个BS琼脂平板和一个XLD球脂平板（或HE球脂平板或沙门氏茵显色培养基平板），于36〔±1贮分别培养18h~24h（XLD、HE.显色培养基）或40h~48h（BS球脂平板）

厂为了最大可能的检出沙门氏茵，必须使用两种或以上选择性分离培养基

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检验步骤及注意事呼选择性分离

亚硫酸钮琼脂BS

菌名

亂伤篡妙门氏前

弗氏志贸氏窗

大制埃需氏简

菌落特征

需色菌谣有金!■光璋

棕色至塚色

榇色至绿电

生摂抑制

□使用注意事项:不可过度加热；使用前一天配制，且在4«h内使用；倾注平板前需摇匀；不能反复涿解；平板需避光保存于史温环境

检验步骤及注意事项：选择性分离

检验步骤及注意事项：选择性分离

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XLD琼脂

菌落特征

甲型副伤寒沙门氏凿紛红色阑落.无奧心

亡鼠伤寒沙门氏菌紛红色菌落•有頤心

"大肠埃希氏菌黄色薊落・有胆酸倉沉淀

劉氏志贺氏窗粉红色窗落.壬粤心

金黄色菊萄球苗生长抑制

□便用注意爭项;使用的「天配制，避免过度加热！室温避光储存

□该培养基对沙门和志贺氏菌的况敏度均较高，住国外应用广泛

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检验步骤及注意事项:选择性分离

HE琼脂

质控菌抹名称

曲落特征

f鼠伤寒沙门氏繭人腸埃希氏菌

—福氏志贺氏茵

蓝绿色傭落•有黑心

黄色菌落，有胆战抉沉淀

蓝绿色菌落，无愿心

金黄色他萄球曲

生长抑制

□使用注意事项：避免过度加热!

检验步骤及注意事项：生化鉴定

检验步骤及注意事项：生化鉴定

检验步骤及注意事项：选择性分离

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陆桥ESM沙门氏菌显色培养基

/沙门氏菌：紫红色菌落

/非沙门氏菌；苣绿色、无色或抑制

□恿理：特异桂降与底物的显色反应.

□与传统培养基相比妁优够:甲型副伤束、伤寒第不严或砂产112妁沙门氏蔺在传蜿培养思上易涵检；奇异变形杆蔺華产H?S的非沙门氏苗在传统培养血上假阳社卑很高，会If加后期生化鉴定的工作:t.而使用显色培养基则不存在这些问题.

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检验步骤及注意事呼选择性分离

□沙门氏苗种类复杂，准分薦培养基上妁前落骼态不唯一

□凡是符合表1描述的典型繭落及可擬葡落均常进行后期生化鉴定

表1沙门氏面属在不同选择性琼:脂平板上的蔺落特征

运样竹琼阳半板

沙门氏茵

BSKHi

何落为馬色冇金M尢理.榇附色或灰色、曲篇尼怖焙养星可立黑色或标色1灯匹色的曲落・wmwo不变.

HE枳Ifi

监躲色或払色.多私伯仲卩心裳色线儿乎f尖色；冇些诫？Uj蓟色「中心卅色或儿乎金!fi色.

XLDO

侗落里垢红色.：注和摭色”心.冇些倩圧可里理犬仏带比泽的工色屮心・或仝现金部眞色的甬岛fj•毗喩枕为黄色谓瓶色中心。

沙『:氏tflJK星酬养耳

抜觐显色曲?U】何明ilfj刃道・（科玛再、U■眼色平钱上抄门氏«■«*«!色■和

为自分离平板上分别挑取2个以上典型或可疑菌弄，接种三擠铁琼脂（先在斜而划圾.再于底层穿剌）■賴氯酸脱竣暉试脸培养基和营养琼脂平板（穿剌TSI后不旻烧针.直接接种后两者）.于36弋±1€培养18h-24h,必要时可延长至辆h.

D结合TSI球脂和赖氨酸脱按聲试脸培养基的结果，可筛掉大部分非沙门氏菌

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检验步骤及注意事项:生化鉴定

»可以在楼种三槽铁琼脂和轶氨酸脱按障试轻培养基的同时，直接接种皆白脓水、尿素珠脂、机化钾（LCN）«■养龛；也可在初步刿析结果后从管养琼脂平板上挑取可艮蔚落再接种这三项.于36-C±l-C培养18h~24h.必要时可延长至48h.

>纯化的“平扳僅存于2*C~5亡或塞温至少保留24h,以备必昊时复査.

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检验步骤及注意事纠：生化鉴定

检验步骤及注意事纠：生化鉴定

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反应序号

确化舗

（H虫）

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烈化钾

（KTN）

枪気疲脱樓的

A1

+

—

—

—

+

>A1：典型反应判定为沙门氏O-如尿素•WN和赖氨酸脱拔酚3项中有1项异常，按标准中未4可判定.如有2项异常为非汐门氏前.

«4沙门氏苗属生化反应初步警别凳

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检验步骤及注意事缪：生化鉴定

龟OL

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K(tW

A2

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>A2;这种情况務补做甘IT爵和山梨爵试脸、沙门氏酋胶基质阳性交体两项试脸结果均为阳性.但需要结合血清学鉴定结果进行判定.

嵐化黑

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K.CN*

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由-Rift.!-Hin.：+.-Mhtfiltl.

>A3：补做ONPG.0NPGW性为沙门氏虧.屁时赖氨酸脱竣轄阳性，甲型副伤赛沙门氏前为赖氨酸脱裁醉阴性.

检验步骤及注意事项：生化鉴定

检验步骤及注意事项：生化鉴定

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检验步骤及注意事项:生化鉴定

三糖铁琼脂E3•■

■■二

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□廉理：谊堪界基合有三种可发酵的庆淳，即荀萄«Clg/L).(lOi/L)和乳植(1Ob/L),这竝裁源放蜀禅刈用P0可徒时如样承剧变色.另外杲些前能还廉壮少2。3产生BhS.与航感亚较怯反应生成黑邑的Pch而使蜻养基畫黑・

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北奈瓏桥按术有酿费住公S)

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怖尺沙・仃氏酋1右一)

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月7（•丨/AA94於）

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检验步骤及注意事项:生化鉴定

赖氨酸脱按酶试验培养基

□輕；臬些细苗农酸性圾氧坏施、H有廉氨般底物令在旳持况下能诱导产生杭氢酸甌酿晦，使林•氛酸阮歿产生尸胺.导牧培話屋芒紫，而不产生崎氨録说竦聲的舸酋天能代谢蓟药楂产酸.仗培泰恳愛莢

□.£二!□：：.：一練冷檢迈需同时接种愤氨酸fit険妙诙脸骨和氢基酸脱後耸对照

喷疑前株名序

僵号

对煦管/试验管

極氨酸脱技薦

氏伤赛沙n^a

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44104

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福氏志賀氏祥

51571

竇色/竇己

—

•吿备一邑・且两住均需漓加无崗液休石蜡總盖液而.

尿素琼脂（pH7.2）

療理：他刊卅力Q+iH中和伽茵代谢旻自族产生吋縄、肠杆笛別州荀蔔输产酸，也金中和英代谢董白味产生的咬・同时可以ift发斤素詩潘性.曲红为酸城垢示札集地如蜀能产生壌彙醉水解展Jt,生成威&＜酸候.从阳便培祗基由栓虹色变腻粉红色.

仗用才決；冷却i55t.爭95mL晨咸中加入4联尿素水.淀匀后分慕于试膏中，刑成斛曲，

□舉种方天：斛而划歧

质控血株名称

生化反应结果

大肠疫希氏菌（左二）命孑9彩4t2T（中）

51+1:堆乔乩变黄阳也址歩基吏粉虹色尉阳圧：许面处！t粉

用桂：堪养展曼黄

P7T工VIRaT/腌交克伯氏窗（右二）久伤寒沙门氏81（右一）

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■■Mtiugmamsui9

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北東滋桥按术有瑕浅任公商

检验步骤及注意事呼生化鉴定

氟化钾培养基

原理：共莖细苗的扌吸链胯系统可被一定浓度（o.m）的龜化钾押剧而导敎细茴不能生畏.还有茱婆鏑前不被鼠化钾杵创.詹以崔有兔化钾存崔的情况下何能生长.可以以此鉴别伽蔺・

迂童爭项：1・一株待检蔺需同时按种R化钾试越晋和聚化椰对照管各一1.2.阳骨均需淸加尢商液休石坷4UL液而，因为氯化仰舟分解，，生氢鼠《L&挥发■彭响试刑浓度・

质控菌株笛称菌号试验管/对照管结果判定

TOC\o"1-5"\h\z

已龙条沙门氏茵JLTCC13311押制丿生長—-

丸肠埃栉氏施ATCC10536朴制/生式-

帛氏柠樣或杆笛1TCC43864生畏/生長4

检验步骤及注意事项：生化鉴定

检验步骤及注意事项：生化鉴定

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关于氟化钾生长试验的安全性说明

O鼠化钾剧垂.

匚、健康危害：抑制呼吸醉，遽成细胞内変息.吸入、口服或经皮唳收均可列起恵誌中#.

ca试脸时应做好个人防护，避免接触、入口或吸入.

CI废弃处理：灭菌后，每管加入数粒成酸亚拱和0.5就2叹氢氧化钾溶液，然后才可溝洗.

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蛋白月东水（靛基质试验）

沏I44IQ4

//总桥

检验步骤及注意事项：生化鉴定

□原理：罢白腸中的色氨酸被纳茵代谢产生的色氨酸H水黑产生丐I噪，在加入对二甲氨基苯甲醛试剂后，与之作用生成醍类结构的玫瑰红色物质

□培养条件：36*rC/18-24h

□培养后.滴加勰基质试剂.立即观桌结果

険樓35株名秣

36号

紘色变化

大弱埃箱氏36（右）

44!04

淞面出现红色环

■

1

伤鶴沙nRfi（左）

50071

液面歐色无变化

-

陆桥沙门氏菌生化鉴定套装（2010国标系列）

頼氨啟脱拔H氤化钾生长试越尿倉障靛基啟山果轉0KPC

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检验步骤及注意事呼血清学试验

血浦■学作为炊定的一部分，必须完成

>实验室必须配备沙门氏菌竝多价苗体（Q_Lfe多价報毛（H）诊斷血清

>其中血清学分型为选作试验项目

血清学试脸必须基于生化试■验的结果，不能单纯以血清学实验结果■来报告最终结亲.

tigenorSomaticantigenIstheoneofcellwallcomponenC

o烦也称85体斶.忌妞皑燮9?胡成战分。

ThereactionofO-antigenwithantiserawillbethegranularform・

0鼠原炳抗GES»的反fiZ呈频E!状〜

H-antiganofFlagellaantigen

0多价鉴定

卜从*养琼脂上拱取一环纯化HJW,用无n集种环分别将两个区雉内的■落研成乳状港

2在玻片上划出两个区«.一边张加1活0事价血酬.另一边加入）満生逢莖水.件为对照

结果观察

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沙门氏菌属的抗原结构

tigeni$aspecifsomatii;antig^nandbelongstothegroup*ofK@ntigens・Yi挤衆足一种筍殊的88依焰.禺于K旅序却Sucha«SdnraneNaTyphitParatyphiCandDublin.5lWWPnft®<丙门氏苗和诙折沙门氏菌部含有Vi杭赊

ThereactionofH-antigenwithantiserawillbethefloccularform,H期弓抗血灣的屁应呈衆办或継伏“

AlmostSalmonellahas2phaseofH-antigenthefirstphasecalledspecificphaseandanotherphasecallnon・spQClflcphase・大圈分沙门氏ten疚原都頁两粗.男相极称为将异牡相・第二相为菲料异性相

检验步骤及注意事项：血清学试验

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检验步骤及注意事项:血清学试验

0多价鉴定结果观察

＞将披片倾钎摇动混合hnin＞畀对册黑暗背景进行观昭任何程度的潑集现拿皆为阳槿反应，

＞阴性一一均勺混浊；阳性一一狀集咸块

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检验步骤及注意事项：血清学试验

H多价鉴定

%从■界琼胸上挑取純化■落.点种于S"RM琼脂中心处•3atir«#1&-24h

+鞭毛的苗会在SWMW琉脂上扩散生长（如左图八从边1*处挑SUI苔进行H多价鉴定

检验步骤及注意事项:血清学试验

H多价鉴定结果观察

AH抗原为絮状或绒毛状凝集

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检验步骤及注意事项:血清学试验

泰国S&A公司

（WHO指定诊断血清）

□o多价血釈分屛血沐单因于血清

Vi抗血请

H多价血清.单因子