动物细胞融合和单克隆抗体(5)

1、关于动物细胞融合与单克隆抗体 (5)第一张，PPT共四十一页，创作于2022年6月 2002年12月30日， 两场筹备了10年的“太空婚礼”首次在神舟四号飞船上举行，植物细胞“新人”黄花烟草和革新一号烟草叶肉细胞原生质体，动物细胞“新人”是小鼠B淋巴细胞和骨髓瘤细胞，两批新人同时在 “产房”电融合仪内孕育新生命。“太空婚礼”这两场“太空婚礼”实质是哪两项细胞工程技术植物体细胞杂交技术动物细胞融合技术第二张，PPT共四十一页，创作于2022年6月(1)(1)(2)(3)(4)(5)植物体细胞杂交过程示意图第三张，PPT共四十一页，创作于2022年6月A细胞B细胞人工诱导1.1动物细胞融合的概念杂

2、交细胞 动物细胞融合（也称细胞杂交）：是指两个或多个细胞融合形成一个单核细胞的过程。一、动物细胞融合第四张，PPT共四十一页，创作于2022年6月阅读课本P52及识图2-23，第五张，PPT共四十一页，创作于2022年6月细胞膜的流动性灭活病毒、PEG、电激等融合后的细胞进行有丝分裂，形成完整的杂交细胞诱导的手段？融合后细胞的类型？AB杂种细胞遗传物质有什么特点？三种AA、AB、BB（A、B）含两种生物的遗传物质1.2动物细胞融合过程原理？第六张，PPT共四十一页，创作于2022年6月1.2动物细胞融合过程 为什么灭活的病毒能作诱导剂？灭活使病毒的感染活性、增殖能力丧失但不破坏病毒的抗原结构。

3、第七张，PPT共四十一页，创作于2022年6月想一想1动物细胞融合完成的标志是什么？【提示】细胞核融合。第八张，PPT共四十一页，创作于2022年6月1.3动物细胞融合技术的意义和应用第九张，PPT共四十一页，创作于2022年6月比较项目细胞融合的原理细胞融合的方法诱导手段用途植物体细胞杂交细胞膜的流动性纤维素酶、果胶酶去除细胞壁后诱导原生质体融合离心、电刺激、振动、聚乙二醇克服远源杂交不亲和，获得杂种植株动物细胞融合细胞膜的流动性用胰蛋白酶使细胞分散后诱导细胞融合除应用植物细胞杂交手段外，还有灭活病毒获得杂种细胞、制备单克隆抗体1.4 比较动、植物细胞杂交技术第十张，PPT共四十一页，创作于

4、2022年6月【例1】能使动物细胞融合的特有的诱导因子是 （ ）A.离心 B.灭活的病毒 C.电刺激 D.振动【例2】融合后的杂交细胞的遗传物质有何特点（ ）具有原来两个或多个细胞的遗传信息 B.能无限增殖 C.可形成新个体 D.培养过程会贴壁【例3】动物细胞融合的作用中最重要的是（ ）A.克服远源杂交不亲和 B.制备单克隆抗体 C.培育新物种 D.生产杂种细胞 BB初试牛刀A第十一张，PPT共四十一页，创作于2022年6月互动探究(1)本题中细胞融合手段不同于植物体细胞杂交的是什么？(2)本题中培养液中融合处理后的细胞类型最多有几种？分别是什么细胞？提示】(1)动物细胞融合的手段与植物体细胞

5、杂交的区别是前者通常采用灭活的病毒作为诱导剂。(2)细胞类型通常有5种，即鼠鼠、人人、人鼠、人、鼠单独的细胞。第十二张，PPT共四十一页，创作于2022年6月【易误警示】(1)常用的病毒诱导剂有仙台病毒、新城鸡瘟病毒、疱疹病毒等，其中仙台病毒最常用。(2)用做诱导剂的病毒必须事先灭活，使病毒的感染活性、增殖能力丧失但不破坏病毒的抗原结构。第十三张，PPT共四十一页，创作于2022年6月强调：效应B淋巴细胞是能够产生抗体的B淋巴细胞，下文将其简称为B淋巴细胞抗体：能够与抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。能产生抗体的细胞是浆细胞（即效应B细胞）。温故知新二、单克隆抗体B淋巴细胞效应B淋巴细胞记忆B淋

6、巴细胞分化第十四张，PPT共四十一页，创作于2022年6月抗体的传统生产方法抗原 反复注射动物从动物的血清中分离抗体该法制备抗体的缺点：产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。如何解决这个问题呢？单克隆抗体！第十五张，PPT共四十一页，创作于2022年6月提示1：对B细胞进行细胞培养可行吗？提示2：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？问题：如何大量生产单克隆抗体？请尝试设计一个方案。2.2单克隆抗体的制备第十六张，PPT共四十一页，创作于2022年6月一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞能无限增殖杂交瘤细胞动物细胞培养技术设计方案：动物细胞融合技术单克隆抗体 既能产生特异性抗体，

7、 又能大量增殖的细胞1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒的实验第十七张，PPT共四十一页，创作于2022年6月为什么给小鼠注射特定的抗原蛋白？ 会有几种融合方式？ 杂交瘤细胞是如何筛选出来的？有何特点？ 是否所有的杂交瘤细胞都能产生专一性抗体？ 如何大规模进行培养得到大量的单克隆抗体？第十八张，PPT共四十一页，创作于2022年6月BB 、B瘤 、瘤瘤 （B、瘤）（一选）选择性培养基：只有杂交瘤细胞才能存活获得产生相应抗体的B细胞（二选）：选能产生所需专一抗体的杂交瘤细胞体外培养小鼠腹腔内培养杂交瘤细胞特点：既能产生特异性抗体，又能大量增殖。第十九张，PPT共四十一页，创作于2022年6月想一想

8、2什么是单克隆抗体？鼠的单克隆抗体能否用于人体疾病的治疗？为什么？【提示】单克隆抗体是由单一杂交瘤细胞增殖产生的化学性质单一、特异性强的抗体。不能。因为鼠的B淋巴细胞所产生的抗体与人体B淋巴细胞产生的抗体是不同的。第二十张，PPT共四十一页，创作于2022年6月单抗制备过程分哪几步？请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺序是？ 你学会了吗？第二十一张，PPT共四十一页，创作于2022年6月(2012北京四中高二质检)1975年科学家首次利用B淋巴细胞杂交瘤技术制备出单克隆抗体。请根据下图回答问题：(1)病原体注入小鼠体内后，要经过_细胞处理后形成抗原MHC复

9、合体，才能被免疫细胞识别。(2)制备单克隆抗体所用的B淋巴细胞一般从脾中采集，然后以_作诱导剂，使B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合。通过筛选和克隆培养，获得的杂交瘤细胞具_的特点。(3)单克隆抗体的特点是_根据上图写出应用杂交瘤技术获得单克隆抗体的两种主要方法_吞噬(或巨噬)灭活的仙台病毒或聚乙二醇既能产生特异性抗体，又能无限增殖特异性强，纯度高(或：专一性强、灵敏度高)体外培养法和动物体内培养法第二十二张，PPT共四十一页，创作于2022年6月变式训练(2012西宁五中高二检测)根据单克隆抗体制备流程示意图判断以下选项中正确的是()A单克隆抗体技术的原理包括细胞增殖、细胞膜的流动性、细胞的全能性等

10、B根据培养基的物理性质分类，图中HAT培养基属于选择培养基C在制备单克隆抗体的过程中有两次选择，第一次是选择杂交瘤细胞，第二次是选择能够产生特异性抗体的杂交瘤细胞D老鼠骨髓瘤细胞染色体数是40，效应B细胞的染色体数为46，融合后形成的杂交瘤细胞DNA分子数为86C第二十三张，PPT共四十一页，创作于2022年6月2.3单克隆抗体的应用诊断试剂最广泛应用准确、高效、简易、快速单克隆抗体最主要的优点：特异性强，灵敏度高，并能大量制备。第二十四张，PPT共四十一页，创作于2022年6月“生物导弹” 单克隆抗体药物 单抗导向，药物为弹头治疗疾病和运载药物主要用于治疗癌症治疗，单克隆抗体作为载体，运载抗

11、癌药物，形成“生物导弹”，准确杀伤癌变细胞。第二十五张，PPT共四十一页，创作于2022年6月 有性生殖的生物产生后代需进行受精作用，植物体细胞杂交要进行原生质体的融合，单克隆抗体的制备需进行动物细胞融合，可见细胞的融合技术有着广泛的应用。下列为细胞融合的简略过程，据图回答相关问题：例31)若a、b分别是基因型为Hhrr、hhRr两个烟草品种的花粉，且这两对基因分别位于两对同源染色体上。由于一对隐性纯合基因(rr或hh)的作用，在光照强度大于800 lx时都不能生长。要想从融合细胞的培养液中分离出基因型为HhRr的杂种细胞，较为简便的筛选方法是_给予大于800 lx的光照第二十六张，PPT共四

12、十一页，创作于2022年6月(2)若a、b表示两种植物体细胞，则由d细胞形成杂种植株的原理是_。这种育种方法的优点是_ (3)若a、b分别为骨髓瘤细胞和B淋巴细胞，则d细胞的特点是_。由d细胞产生的抗体与普通血清抗体相比较，具有_的特点。一般不能通过直接培养B淋巴细胞的方法生产单克隆抗体的主要原因是_。植物细胞的全能性克服了远缘杂交的障碍既能无限增殖，又能产生特定的抗体特异性强、灵敏度高、可大量制备B淋巴细胞高度分化，不能增殖第二十七张，PPT共四十一页，创作于2022年6月【例4】科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（ ）A.

13、经过免疫的B淋巴细胞 C.经过免疫的T淋巴细胞B.不经过免疫的T淋巴细胞 D.不经过免疫的B淋巴细胞【例5】单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的 （ ）B淋巴细胞 BT淋巴细胞 C骨髓瘤细胞 D杂交瘤细胞A初试牛刀D第二十八张，PPT共四十一页，创作于2022年6月【例6】用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下列实验步骤中错误的是（ ）A将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的B淋巴细胞B用纤维素酶处理B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞C用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合D筛选杂交细胞，并从中选出能产生所需抗体的细胞群，培养后提取单克隆抗体B初试牛刀第二十九张，PPT共四十一页，

14、创作于2022年6月变式训练下列关于细胞工程的叙述，错误的是()A电刺激可诱导植物原生质体融合或动物细胞融合B去除植物细胞的细胞壁和将动物组织分散成单个细胞均需酶处理C小鼠骨髓瘤细胞和经抗原免疫小鼠的B淋巴细胞融合可制备单克隆抗体D某种植物甲乙两品种的体细胞杂种与甲乙两品种杂交后代的染色体数目相同D第三十张，PPT共四十一页，创作于2022年6月两个过程动物细胞培养过程单克隆抗体制备过程三个“一”一个诱导细胞融合的新方法 灭活病毒一个新细胞杂交瘤细胞一个优势单克隆抗体特异性 强、灵敏度高的优势本节小结重点第三十一张，PPT共四十一页，创作于2022年6月谢谢第三十二张，PPT共四十一页，创作于

15、2022年6月(1)若A细胞是小鼠骨髓瘤细胞，则B细胞是取自小鼠体内的 细胞，从小鼠体内提取分离该细胞之前，应给小鼠注射_类物质。（2）d过程是一个_过程，该过程的进行常用_或_的诱导。(3)假设仅考虑某两个细胞的融合，则可形成 种类型的C细胞，因此需用_培养基筛选出D细胞用于培养，D细胞的名称是 ，其特点是_。效应B 抗原 细胞融合 聚乙二醇 灭活的病毒 选择性 3既能无限增殖又能产生特异性抗体 杂交瘤细胞第三十三张，PPT共四十一页，创作于2022年6月(4)在培养时通过_分裂方式大量繁殖。D细胞体外培养需要注意的条件是（要求答5项）_。（5）单克隆抗体在疾病的诊断、治疗和预防方面，与常规

16、抗体相比，其特点是_。特异性强、灵敏度高 有丝无菌、无毒的环境；充足的营养；适宜的温度和pH；适宜的气体环境 第三十四张，PPT共四十一页，创作于2022年6月15、（1）单克隆抗体是指 。（2）制备单克隆抗体的步骤：将_注入小鼠体内，从小鼠脾脏中获得淋巴细胞，其中至少1个淋巴细胞带有抗该抗原的抗体。将步骤获得的B淋巴细胞与步骤培养的骨髓瘤细胞在_的诱导下融合。将诱导后产生的多种细胞，放在_培养基的多孔培养板上培养，筛选。这样获得的杂交瘤细胞既具有B淋巴细胞_的能力，又具有_的本领。检测和分离带有抗X抗体的阳性细胞，培养板中每孔放一个细胞进行培养。将阳性细胞进行增殖，从而制备出大量抗该抗原的单

17、克隆抗体。化学性质单一，特异性强的抗体 抗原 聚乙二醇选择性 无限增殖 产生专一抗体第三十五张，PPT共四十一页，创作于2022年6月（3）大量制备单克隆抗体的方法主要有两种：体外培养法，可获得10g/mL的抗体；动物体内诱生法可获得520mg/mL的抗体。你选择的方法及原因是 。（4）用本法制备出的单克隆抗体仍具有局限性，因为它是用小鼠的_细胞制备的，其化学本质是_，应用于人体，会作为 产生 ，解决这个问题的方法是_。大量生产选，小规模生产选效应B蛋白质异物免疫反应采用人的效应B细胞制备第三十六张，PPT共四十一页，创作于2022年6月15、右图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案。据图回答：（1）该方案能达到预期效果吗？