墨兰新品种‘梦之兰’的组织培养技术

1、墨兰新品种梦之兰的组织培养技术张月娇表1不同激素浓度对诱导启动的影响试验号6-BA/(mg L-1)KT/(mg L-1)诱导率（）小计(1)(II)(III)10. 50. 22118327121.00.44126228931.50. 665726820540. 50. 62417135451.00. 22931309061.50.4364229107S616Summary：通过对墨兰新品种梦之兰的组织培养技术研究，探讨了不同激素浓 度对梦之兰的诱导启动、继代增殖、生根壮苗培养和不同基质配比对移栽成 活率的影响，获得梦之兰诱导启动最正确培养基为改良MS+6-BA1.5 mg-L- 1+KT0

2、. 6 mg - L-1.最正确继代增殖培养基为改良MS+6-BAL 5 mg - L-l+KTO. 4 mg - L-l+NAAO. 6 mg L-1、最正确生根培养基为 1/2 改良 MS+IBA1.0 mg LT、 最正确移栽基质为松树皮：珍珠岩=1: 1。Key：墨兰；梦之兰；组织培养：S682.3： A： 1004-3020 (2019) 01-0015-04Study on Tissue Culture Technology of New Cymbidum sinense Variety MengzhilanZhang Yuejiao(Fujian Forestry Science

3、 and Technology Test CenterNanjing363600)Abstract： Through the study on the tissue culture technology of the new Cymbidium sinense variety Mengzhilan, We explored the effects of different hormone concentrations on the induction initiation, subculture, rooting and seedling culture and different matri

4、x ratios of Mengzhilan on the survival rate of transplanting. The results showed that the optimal medium for the induction to Mengzhilan was Modified MS+6-BA1. 5 mg L-1+KT0. 6 mg L-l, and the best subculture medium was Modified MS+6-BA1. 5 mg L-1+KT0. 4 mg L-1+NA AO. 6 mg LT, the best rooting medium

5、 is 1/2 Modified MS+IBA1. 0 mg L-l, The best transplanting substrate is pine bark : perlite=l : 1.Key words： Cymbidium sinense； Mengzhilan orchid； tissue culture 墨篇新品种梦之兰(Cymbidium sinense ,Mengzhilan),是兰科兰属植物, 由福建省林业科技试验中心选育，2014年10月通过福建省林木品种审定委员 会审定为良种。其叶片剑形，35枚，深绿色，叶质厚，光泽佳，叶尖至叶片 中下部有金黄色线艺，叶幅宽阔，丛生

6、在椭圆形的假鳞茎上。总状花序，花茎 直立，高出叶面，花朵向上开放，每支具1020朵或更多的花，花瓣竹叶型， 带金光，有较浓的花香，花期10月至次年3月。萌果狭椭圆形，长58 cm, 宽12 cm。喜阴，忌强光，喜温暖，忌严寒，喜湿，忌燥。梦之兰线艺表现完美，在无开花之时，叶片疏密有致，气宇轩昂，临风摇曳，婀娜多姿，整个 体态优雅俊秀，开花时，各花草之间刚柔兼备，顾盼呼应，异常端庄素雅，和着沁人心脾的清新香气，让人心旷神怡，爱不释手。梦之兰因其叶片、花色、花径、瓣型、花朵数等方面区别于普通任何细叶兰类，其商品性优于目前 类似的墨兰品种。当前，梦之兰的存圃量远远不能满足市场需要，而传统的分株繁殖系

7、数小，且速度慢。为此，为满足兰农对梦之兰种苗的需求，开展 梦之兰的组织培养技术研究具有重要的意义。1材料与方法试验地点该试验在福建省林业科技试验中心进行。2外植体选择选择长势良好、植株健壮、无病虫害、个体表现优异的梦之兰优良单株进行 组培快繁技术研究。1.3培养条件培养基均为加入蔗糖2030 g/L+琼脂56 g/L,光照强度2 0004 000lx,培养温度（253） ,培养室相对湿度70%75%, pH值5. 15. 41。4试验方法（1）诱导培养。以优良单株的茎尖为外植体，以改良MS为基本培养基，添加 不同浓度的6-BA （0.5. 1.0、1.5）和KT （0.2、0.4、0.6）,统

8、计其诱导成活 率，研究不同激素浓度对诱导启动的影响。（2）继代增殖培养。继代增殖培养以改良MS为基本培养基，添加不同激素浓度的 6-BA （0.5、1.0、1. 5）、KT （0.4、0.6、0.8）和 NAA （0.2、0.4、0.6),用L9 (34)正交表安排试验2,统计其增殖倍数和芽苗生长状态，研 究不同激素浓度对继代增殖培养的影响。(3)生根壮苗培养。以1/2改良MS为基本培养基，添加不同激素浓度的IBA (0.3、0.5、1.0)和NAA (0.3、0.5、1.0),统计其生根率，研究不同激素 浓度对生根培养的影响。(4)栽培基质的选择。待生根苗根长到1 cm以上时，转至大棚进行炼

9、苗，20 d后进行移栽，将不同比例的鹅卵石、松树皮、珍珠岩和发酵过的花生壳作为 移栽基质进行试验，统计其成活率，研究不同比例的移栽基质对成活率的影 响。2结果与分析1外植体的消毒在外植体选取前，在大棚内对梦之兰优良单株进行杀菌消毒处理，每5 d 次，重复三次，同时控水控肥。然后将优良单株带回实验室，剔除根叶，保存2 cm长带有生长点的茎部，用软毛刷沾洗衣粉水轻轻刷去茎部的尘埃等附着物 后，置流水下冲洗12 h,沥干水分放入高压灭菌过的封口瓶中置超净工作台 进行消毒处理，首先将外植体切成1 cm见方带有生长点的方块置封口瓶中；其 次，用75%酒精消毒30 s,无菌水冲洗2遍；再次，用0. 1%升

10、汞溶液振荡浸泡3 min,无菌水冲洗3遍；最后，用0. 1%升汞溶液静置浸泡2 min,无菌水冲洗35遍后备用3。2. 2不同激素浓度对诱导启动的影响 将消毒后的外植体用无菌滤纸吸干外表水分，同时切除与消毒剂接触的外表 后，分别接种于诱导培养基中，每瓶接入1个茎尖，15 d后剔除污染瓶，40 d 后统计诱导率，见表1。从表1可以看出，3号试验号的诱导率最高，平均诱导率可达68. 3%,从试验中 也可以看出，3号试验号的外植体萌发启动时间最早，在接种10 d后开始膨 大，渐渐产生愈伤组织，局部开始变绿萌发芽点。变异来源自由度 SSMSFFa 处理间 54736. 44947. 2923. 55*

11、F0. 05=3. 11 误差 12482. 6740. 22F0. 01=5. 06总计175 219. 11通过不同激素浓度对诱导启动率 的方差分析可以看出（见表2）,处理间的F值等于23. 55,大于F0.01,到达 极显著性水平，所以不同激素浓度对诱导启动率有着极显著的影响，从试验结 果可以得出梦之兰最正确诱导启动培养基为改良MS+6-BA1.5 mg - L-1+KT0. 6 mg L-1,其诱导启动率最高。3不同激素浓度对继代增殖培养的影响外植体诱导成活后经过一段时间的培养，慢慢的长出不定芽或龙根，待不定芽 长至2 cm以上时，将其切取转至继代培养基进行继代培养，50 d后调查增殖

12、 芽数，见表3。通过不同激素浓度对继代增殖影响的方差分析（见表4）,可以看出，6-BA的 F值是51. 45,大于F0.05小于F0. 01,说明激素6-BA的不同浓度水平对试验 结果有显著影响，KT和NAA的F值分别是2. 16和7. 51,均小于F0. 05,说明 激素KT和NAA的不同浓度水平对试验结果影响不显著，而这与实际试验的表现 相符。不同激素浓度对生根壮苗培养的影响 经过50 d左右的继代培养，不定芽苗长至3 cm以上时，即可切取转入生根壮苗培养基中进行生根培养。不定芽转入生根培养基一周后，其切口处渐渐膨大 并形成根点，20 d后统计生根率，见表5。从试验结果看，在相同的激素浓度

13、下，激素IBA对梦之兰生根的影响明显优于 激素NAA,从激素的浓度水平来看，不定芽在1/2改良MS+IBA1.0 mg-L-1 时，生根率最高，平均每株芽苗生根数可达3根以上。2.5不同比例的基质对移栽成活率的影响将斓苗后的生根瓶苗取出，用自来水将附着于基部的培养基冲洗干净，置于0. 10. 5 g , L-1高镒酸钾溶液中浸泡13 min后，再用自来水冲洗干净，移 栽于不同配比的基质中，30 d后查看生长情况，并统计移栽成活率，见表6。从表6的试验结果可以看出，不同基质配比对梦之兰组培苗的移栽成活率影响 较为明显，其中松树皮：珍珠岩=1 ： 1的配比移栽成活率最高，可达92%,根尖 白透粗壮

14、，吸收营养物质强，叶片浓绿，苗木长势良好。3结语(1)梦之兰是由福建省林业科技试验中心选育的一个墨兰新品种，抗性强品 质好，花期在春节期间，市场需求大，为获得大量的种苗满足市场需求，开展梦之兰的组织培养技术研究势在必行。本研究通过对梦之兰外植体诱导、继代增殖培养、生根培养和移栽的试验，获得梦之兰诱导启动最正确培养基为 改良MS+6-BAL5 mg L-1+KT0. 6 mg L-1,最正确继代增殖培养基为改良MS+6-BA1. 5 mgL-1+KT0. 4 mgL-1+NA AO. 6 mgLT、最正确生根培养基为1/2改良MS+IBA1. 0 mgL-1、最正确移栽基质为松树皮：珍珠岩=1

15、： 1。(2)在梦之兰的组织培养中，有效无菌培养物的建立是一个关键要素，在获取外植体前，一定要对选取的植株进行控水控肥和杀菌消毒处理，这有利于外 植体的杀菌消毒和诱导培养的开展。(3)在梦之兰的继代增殖和生根培养中，添加适量的天然有机物质，如椰子 汁、马铃薯泥、香蕉泥等，可以有效的促进不定芽的增殖、分化和壮苗；在生根 培养中添加适量的活性炭，那么有利于根系的诱导4。(4)对梦之兰生根苗的移栽过程中，一定要将附着于苗木的培养基清洗干净 后，置于0. 10. 5 g LT高镒酸钾溶液中浸泡13 min后再进行移植，这有 利于提高苗木的移栽成活率。(5)从培养瓶中移栽的兰花组培苗，其叶片、根系都较为嫩弱，移栽前，基质 要做好杀菌消毒，同时发酵透，对松树皮等基质要做到细