第11章抗生素类药物的分析ppt课件

1、药物分析学第十六章 抗生素类药物的分析2Analysis of Antibiotics本节教师： 韩海 博士/副教授 )暨南大学药学院: : 560118562021.11.18.第三节 氨基糖苷类抗生素链霉素 双氢链霉素新霉素 卡那霉素庆大霉素 巴龙霉素代表药物 Aminoglycosids.一、化学构造与性质链霉胍 + 链霉糖 + N-甲基-L-葡萄糖胺1.链霉素 .2.巴龙霉素 巴龙胺+巴龙二糖胺巴龙胺(苷元)巴龙二糖胺(糖).3.庆大霉素 绛红糖胺+ 2-脱氧链霉胺 + 加洛糖胺 庆大霉素C1 R=H R1、R2=CH3 庆大霉素

2、C2 R=R2=H R1=CH3 庆大霉素C1a R、R1、R2=H 庆大霉素C2a R=CH3 R1= R2=H主要成分.奈替米星netilmicin脱氧链霉胺氨基糖绛红糖胺氨基糖加洛糖胺.理化性质构造类似 理化性质类似1.溶解度与碱性碱性: 碱性中心链霉素 3个庆大霉素 5个多与硫酸成盐溶解性:水溶性多羟基化合物易溶于水，不溶于乙醇、氯仿。2个强碱性胍基PKa=11.51个甲胺基PKa=7.7.2.旋光性构造中氨基糖的手性碳原子.庆大霉素、巴龙霉素等均有旋光性。硫酸庆大霉素硫酸巴龙霉素硫酸卡那霉素50mg/ml水溶液.结合较弱结合较强3.苷的水解与稳定性.链霉素 pH57.5时稳定过酸过碱

3、那么水解。庆大霉素、奈替米星对光、热空气均稳定。 水溶液 pH212时稳定。4. 紫外吸收庆大霉素、奈替米星等无UV吸收. (二)鉴别实验1.茚三酮反响 ChP：硫酸庆大霉素、硫酸核糖霉素氨基糖苷构造 具有羟基胺类和 氨基酸的性质+.2. Molisch实验 五碳糖和六碳糖的特征反响五碳糖氨基糖苷化合物六碳糖氨基糖苷化合物H+浓H2SO4/HCl-萘酚/蒽酮红紫色或蓝紫色硫酸核糖霉素 0.1%蒽酮/浓H2SO4蓝色蓝绿色.红紫色羟甲基糠醛(含六碳糖构造氨基糖苷类酸性水解产物)蓝紫色.坂口反响麦芽酚反响N-甲基葡萄糖胺反响链霉素水解产物反响.N甲基葡萄糖胺反响(ElsonMorgan反响)乙酰丙

4、酮OH-吡咯衍生物对二甲氨基苯甲醛H+樱桃红色 .(缩合).红色对二甲氨基苯甲醛H+.例 硫酸新霉素 Ch.P2021 【鉴别】1取本品约10mg，加水1ml溶解后，加盐酸溶液91002ml，在水浴中加热10分钟，加8%氢氧化钠溶液2ml与2%乙酰丙酮水溶液1ml，置水浴中加热5分钟，冷却后，加对二甲氨基苯甲醛试液1ml，即显樱桃红色。.麦芽酚反响链霉糖特有反响分子重排六元环脱N甲基葡萄糖胺脱链霉胍H+硫酸铁铵H+ Fe3+分子重排麦芽酚.坂口反响Sakaguchi反响链霉胍特有反响或-萘酚参与尿素使颜色稳定可比色测定硫酸链霉素0.5mg，加水4ml溶解后，加氢氧化钠试液2.5ml与0.1的

5、8羟基喹林的乙醇溶液1ml，放冷至约15，加次溴酸钠试液3滴，即显橙红色。.坂口反响+OH-.硫酸盐反响H+TLC法硫酸链霉素和硫酸庆大霉素鉴别色谱条件特点：吸附剂: 硅胶展开剂：氯仿甲醇浓氨水显色剂：茚三酮或碘蒸气.HPLC法鉴别BP硫酸庆大霉素据色谱图中庆大霉素C1、C2 、C1a、C2a的保管时间鉴别。光谱法鉴别1.IRChP鉴别妥布霉素 USP 鉴别硫酸庆大霉素。2.UVBP硫酸庆大霉素 饱和构造 240330nm无吸收.例 【鉴别】HPLC法 Ch.P2021 硫酸依替米星 硫酸卡那霉素 硫酸小诺霉素 硫酸奈替米星 硫酸阿米卡星 硫酸庆大霉素 硫酸西索米星 硫酸巴龙霉素 妥布霉素.三

6、、特殊杂质检查及组分分析一链霉素杂质链霉素B甘露糖链霉素活性低来源： 反响中间体残留 TLC对照品法BP2000甘露糖链霉素D-甘露糖对照品D-甘露糖水解TLC展开、显色，比较(3.0%)方法 ：HPLC法 (ChP 2021).(二)、硫酸奈替米星中的有关物质检查特殊杂质：西梭米星来源：合成原料残留方法： TLC对照品法与高低浓度对照法同时控制杂质限量(三)、庆大霉素C组分的测定C组分比例不一致发酵菌种不同工艺差别.对微生物的活性无明显差别不同的C组分毒副作用和耐药性不同ChP JPBP USP规定控制各组分的相对百分含量方法：柱前衍生化离子对HPLC法庆大霉素无UV吸收Gentamycin

7、-NH2+ OPA+HSCH2COOHmax = 330nm.1-烷基硫代-2-烷基异吲哚衍生物max = 330nm.HPLC条件色谱柱：ODS流动相：水冰醋酸甲醇(25:5:70)配制的0.02mol/L庚烷磺酸钠溶液检测波长: 330nm计算: 峰面积归一化法规定 C1 2040% C1a 1030% C2a + C2b+ C2 4060%.庆大霉素C组分的测定实验条件的讨论1、OPA的作用是什么？2、冰醋酸的作用是什么？3、庚烷磺酸钠的作用是什么？.四硫酸盐测定剩余滴定法空白滴定.四、含量测定1.免疫分析法2.微生物检定法各国药典普遍采用利用抗生素在琼脂培育基内的分散作用量反响平行线原

8、理的设计，比较规范品与供试品两者对接种的实验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。.3.HPLC法优点: 高灵敏度、专属性 广泛运用于抗生素稳定性研讨及体内分析氨基糖苷类普通无吸收 柱前(后)衍生化【含量测定】 Ch.P规定方法 微生物检定法 盐酸大观霉素，硫酸新霉素，硫酸链霉素， 硫酸核糖霉素，硫酸奈替米星，硫酸阿米卡星，硫酸庆大霉素，硫酸西索米星，硫酸巴龙霉素， 硫酸小诺霉素 HPLC 法 硫酸依替米星，硫酸卡那霉素 .生物样品中氨基糖苷类分析的原那么1、OPA、FMOC-Cl、FDNB柱前衍生化反响重要意义：2、样品预处置：1离子对试剂2固相萃取柱3、柱前衍生化反响能否完全需求

9、调查.第四节 四环素类抗生素构造上具有氢化骈四苯环，统称为四环素族抗生素一、根本构造与化学性质化学构造: 四骈苯或萘骈萘的衍生物。取代基不同而构成不同的四环素.name R R R R四环素 TC H OH CH3 H金霉素 CTC Cl OH CH3 H土霉素 OTC H OH CH3 OH脱氧土霉素 DOTC H H CH3 OH. 多西环素 DOTCdoxycycline脱氧土霉素强力霉素.A环B环C环D环二甲氨基N(CH3)2酚羟基酰胺基CONH2酮基与烯醇基共轭双键系统酮基与烯醇基共轭双键系统.构造特点与分析方法之间的关系1.共轭双键，刚性构造：具有紫外吸收，可产生荧光，可进展鉴别和

10、含量测定。 2具有酚羟基、烯醇基：可发生三氯化铁反响、可与金属离子络合，用于鉴别。 3.具有手性碳原子：具旋光性，用于鉴别。 .理化性质1.酸碱性与溶解度两性: 酚羟基、烯醇羟基 弱酸性 二甲胺基 弱碱性1.与酸、碱均能成盐2.强酸或强碱中溶解度3.游离组分在水中溶解度很小溶解度:.2、含结晶水四环素：6个结晶水占19.6%土霉素：2个结晶水占7.5%加热时可失去结晶水,当含水量低于19.6%的四环素和低于7.5%的土霉素,置于空气中要吸收水分.2.旋光性用于鉴别、定量分析ChP 盐酸土霉素：-188-200 盐酸四环素：-240-258 3.UV吸收和荧光共轭双键系统：具有紫外吸收，可产生荧

11、光降解产物的荧光可供鉴别用。土霉素 绿色荧光；金霉素 蓝色荧光；四环素 黄色荧光H+OH-.4.与金属离子构成配位化合物酚羟基、烯醇基的性质。Ca2+ Mg2+ Fe3+ Al3+等pH3 7.5 剧烈荧光.5.不稳定性: 水溶液对酸、碱、氧化剂均不稳定。1差向异构化淡黄黑蓝色荧光土霉素、多西环素不易差向异构化.A环上手性C4构型的改动差向四环素.土霉素、多西环素不易差向异构化.多西环素不发生C环无羟基.2碱性下降解荧光多西环素不发生.TCETCATCEATC差向脱水差向脱水.二、鉴别实验1.浓H2SO4反响2.FeCl3反响酚-OH反响氧化、脱水.3.TLC法正相分配薄层色谱对照品法载体：硅

12、藻土中性+EDTA展开剂：乙酸乙酯-氯仿-丙酮(2:2:1)+EDTA显色：UV：365nm荧光ChP，BP方法抑制痕量金属呵斥的拖尾景象4.HPLC法ChP，USP方法保管时间鉴别pH7盐酸土霉素，盐酸金霉素，盐酸多西环素，盐酸美他环素.5.荧光反响： 四环素类在紫外灯下产生荧光，其降解产物也具有荧光，可供鉴别。UV绿色荧光H+UV.6. UV法溶剂:1mol/L盐酸-甲醇1100浓度:0.01mg/ml.三、特殊杂质检查1.有关物质4-差向四环素ETC4.0%脱水四环素ATC 0.5%差向脱水四环素EATC 0.5%盐酸金霉素CTC 8流动相：pH8.3的碱性溶液系统适用性实验 4- 差向

13、脱水四环素 四环素.中国药典规定用HPLC法测定的四环素类药物盐酸四环素盐酸土霉素盐酸金霉素盐酸多西环素盐酸美他环素.五、高分子杂质的检查了解内源性：药物本身聚合物 来源于消费过程、储存过程、运用不当外源性：蛋白、多肽、多糖及其与药物的结合物 来源于发酵过程高分子杂质凝胶色谱法：葡聚糖凝胶 Sephadex G-10杂质控制方法控制重点!.1.根本构造青霉素族多肽青霉素噻唑多肽聚合物母核参于反响侧链参于反响头孢菌素族与母核有关的N型聚合反响侧链参与反响的L型聚合反响.2.特点1发酵中产生的任何蛋白及蛋白碎片均可带入产品中，一样的蛋白或蛋白碎片上可以结合不同数目的药物分子，构成青霉素噻唑多肽类杂

14、质。2有不同聚合度和不同机理聚合反响构成的聚合物，聚合物发生不同程度的降解作用。3以异构体存在样品，同聚和异聚反响可同时发生。4高分子杂质的种类、数量与消费工艺亲密相关溶媒结晶、喷雾枯燥.1、以下哪个药物会发生羟肟酸 铁反响 A. 青霉素 B. 庆大霉素 C. 红霉素 D. 链霉素 E. 维生素C .2、中国药典测定头孢菌素类药物的含量时，最多采用的方法是 A. 微生物法 B. 碘量法 C. 汞量法 D. 正相高效液相色谱法 E. 反相高效液相色谱法.3、属于-内酰胺类的抗生素药物有 A. 青霉素 B. 红霉素 C. 头孢菌素 D. 庆大霉素 E. 四环素.4、能和茚三酮发生呈色反响的物质有

15、A链霉素 B庆大霉素 C土霉素 D氨基酸 E苯巴比妥.6、能发生重氮化-巧合反响的抗生素类药物是 A. 青霉素 B. 庆大霉素 C. 苄星青霉素 D. 盐酸四环素 E. 普鲁卡因青霉素.7、四环素在酸性条件下的降解产物是 A. 差向四环素 B. 脱水四环素 C. 异四环素 D. 去甲四环素 E. 去甲氧四环素.711以下反响可适用的药物 A. 青霉素 B. 链霉素 C. 两者均能 D. 两者均不能 7Kober反响 8. 羟肟酸铁反响 9. 坂口反响 10. N甲基葡萄糖胺反响 11. 在酸性溶液中水解DABBC.1216 以下反响可鉴别的药物是 A. 链霉素 B. 庆大霉素 C. 两者均可 D. 两者均不可 12. 用Kober反响 13. 用坂口反响 14. 用麦芽酚反响 15. 用三氯化铁反响 16. 用茚三酮反响DAADC.以下药物可发生的反响是茚三酮反响 B. 麦芽酚反响 C. 坂口反响 D. FeC13反响E.