地贫专业血红蛋白电泳

1、血红蛋白电泳检查（电泳法）1. 原理血红蛋白是由两对多肽链组成的复杂分子。每一条链含有血红素和络合铁原子的卜啉。所有血红蛋白的血红素部分都是相同的。所测定的血红蛋白的蛋白部分称之为珠蛋白。正常人血红蛋白多肽链包括、和。血红蛋白的结构、分子特性取决于形成其肽链的氨基酸顺序和性状。氨基酸不同可形成不同的血红蛋白，其表面电荷不同，在电场中的泳动率不同。本实验在碱性（PH=8.60）条件下，以琼脂糖凝胶电泳的方法进行，对红细胞洗涤后造成溶血，电泳分离血红蛋以氨基黑染色。多余的染色液用洗去。待琼脂糖凝胶板干燥后，肉眼可直接判别有无电泳条带异常。运用光密度扫描仪检测准确定量分析电泳条带异常情况。血红蛋白异

2、常有二种类型：血红蛋白性质或结构的异常称之为血红蛋白病。血红蛋白中的一条链减少引起血红蛋白性质异常，称之为地中海贫血。2. 标本2.12.22.3标本前准备：受检者应空腹。标本种类：抗凝血标本要求：抗凝剂选用 EDTA，柠檬酸或肝素均可，避免碘乙酸。常规静脉采血 1.8ml，加入含有 109mmol/L 枸橼酸钠溶液 0.2ml 的干燥。清洁试管中，充分混匀。4.5.6.7.于 2-8冰箱中，5 天。于 2-8状态下的冰壶或标本：标本：箱密封。标本拒收标准：细菌污染、溶血或脂血标本不能作测定。试剂7.17.27.37.4试剂名称：血红蛋白电泳检查试剂试剂生产厂家：法国 Sebia 公司包装规格

3、：150tests试剂盒组成琼脂糖凝胶 10 块缓冲液条带 10 包2 条氨基黑（浓缩液）1 瓶100ml溶血素 1 瓶薄滤纸 110 张点样模具滤纸 10 条1 盒7.5 试剂条件及有效期：于室温（1530）或冰箱（28），不能冷冻。有效期两年。8. 仪器设备8.18.28.3仪器名称：SEBIA 电泳仪仪器厂家：法国 Sebia 公司仪器型号：HYDRASYS操作步骤血红蛋白液制作：抗凝血离心，5000rpm，5 分钟，去掉血浆，用 10 倍体积的生理盐水洗涤红细胞 3 次，若红细胞体积小于 10ul，需特别。取 10ul 红细胞加入 130ul 溶血液造成溶血。震荡混匀 10 秒钟，室温

4、下培育 5 分钟待测。启动电泳仪将加样器放在一平板上，有数字的一端向上。各加样孔加入 10ul 溶血的样品，2 分钟内加样完毕。将加样器放入保湿盒内，齿端向上（转运时用齿保护架）。等待 5 分钟，使样品扩散至齿端。打开电泳仪盖，抬起电极和加样器支架。9.4 使用 HYDRAGEL 15 HEMOGLOBINCE 时选择仪器的“HBTOTAL”程序（位于链盘左侧）。9.5 从包装袋内取出缓冲条，拿出末端的片，将缓冲条两端片固定在电极支架背侧的钉上，片应紧贴支架。9.6 取出凝胶板。将薄的滤纸轻轻吸去凝胶板表面的多余液体，然后立即丢弃滤纸。在电泳仪温度控制板表面的边线内加 200ul 蒸馏水或去离

5、子水。凝胶面朝上，放置凝胶板，边缘对齐边线。略略将凝胶弯曲，然后放平，使水均匀分布在凝胶板下面而不含气泡。降低支架，使缓冲条不接触到凝胶板。从保温盒里取出加样器。取时拿保护框。折断加样器齿端保护框。将加样器放在 4 号位置。关上电泳仪盖子，按下键盘左侧的绿色箭头“START”键，电泳开始。凝胶染色扫描打开盖子取出并丢弃加样器9.10.3 升高两个支架，握住端取出并丢弃缓冲条。打开凝胶托架，平放，将干燥的凝胶片放入两层间，然后关上托架。将凝胶支架放入染色池取出凝胶支架，打开盖子，取出干燥的凝胶片。在光密度仪的 570nm 处或以黄色滤光片扫描测定。使用 HYDRYS，DVSE或 PREFEREN

6、CE 光密度仪时，使 A2 片段的标记置于扫描板 5mm 的标志处。10. 结果判断与参考范围扫描得到的只是每种血红蛋白条带的相对浓度值。取出胶片后，首先清洁胶片的背面。判断溶血液的浓度是否合适，主要看基质带的浓度，如基质带浓度过淡，说明溶血液的浓度太淡。正常时 A2 浓度大约为基质带浓度的 1-2 倍。半岁-成人:HbA94.5,HbF2.0,HbA23.51 个月：HbA 12-40,HbF 60-93,HbA2 0.1-1.06 个月：HbA 86-98,HbF 0.84-10.7,HbA2 0.87-2.9脐带血：HbA 4-40,HbF 30-96,HbA21.0质量控制建议测定每一

7、批样本时都附有一控制品或含有血红蛋白 A,F,C 和 S 的血样本。临床意义检测-地中海贫血轻型：HbA2 轻度升高，大多在 4-8中间型：HbA1A2 缺如，HbF 可达 1012.1.3 重型：HbF：30-90，HbA 多低于 40或甚至 012.2 检测-地中海贫血12.2.1经煌焦油-地中海贫血：新生儿期 HbBarts 可达 5-15，几个月后。后，少数红细胞内有 H 包涵体。血红蛋白电泳无异常发现。12.2.2 血红蛋白 H 病：HbH 在 PH8.6 或 8.8 电泳时，向阳极方向移动，泳速快于HbA;在 PH6.5 电泳时，仍向阳极方向移动。12.2.3 血红蛋白 BartH

8、bA、A2 及 F 均缺如。水肿综合症：Hb Barts 占 80-100，可有少量 HbH。12.3 检测血红蛋白病：引起临床注意的异常血红蛋白有四种：S，C，E 和 D。12.3.1 血红蛋白 S：在碱性缓冲条件下血红蛋白 S 的条带位于 A 和 A2 片段之间12.3.2 血红蛋白 C：在碱性缓冲条件下血红蛋白 C，E 和 A2 的条带若这一片段15，应怀疑有血红蛋白 C 或 E 的异常。在一起。12.3.3 血红蛋白 E：与血红蛋白 C 不同的是，E 在酸性凝胶电泳中不与 A2 分离。12.3.4 血红蛋白 D：在碱性缓冲条件下，血红蛋白 D 和 S 的条带D 在酸性凝胶电泳中不与 A

9、2 分离。操作性能：灵敏度高、特异性强、操作简便，重复性好。注意事项：在一起，但14.114.214.3试剂于室温（1530）或冰箱（28）内，不能冷冻。不要应用溶血标本若检测到异常血红蛋白，而又与常见的异常血红蛋白 S,C,D 或 E 不同，可使用其他方法（如球蛋白链电泳）检测，或求助于有关专门。14.4 HbF 小于全部血红蛋白的 2-3时，扫描检测 HbF（或其它一些较少见的血红蛋白）只是半定量的，结果不十分准确。14.5 对于中度或重度贫血的病例，点样量应增大为 15ul 或 20ul，其结果不受影响。14.6 电泳过程中不能打开盖子。在染色脱色以及干燥过程中，仪器的一些程序处于锁定状态。14.7 最后染色后立即扫描测定。若欲保存，可用一保护物覆盖后置于干燥、暗处，避免受热，可保存约 3 个月临床意义H