微生物培养基的配制和灭菌ppt课件

1、微生物培育基的配制和灭菌.微生物培育基的配制和灭菌目的要求实验资料实验程序.目 的 要 求了解培育基的配制原理和方法，掌握其配制过程。了解几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和加压蒸汽灭菌法的原理及其运用方法。熟习分别、培育微生物前的有关预备任务及操作方法。.实 验 材 料药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、马铃薯、蔗糖；可溶性淀粉、K2HPO4、KNO3、MgSO47H2O、FeSO47H2O等。高压蒸汽灭菌器、恒温干热灭菌箱、细菌过滤器、紫外线杀菌灯。其它：天平、牛角匙、电炉、1N HCl、1N NaOH、pH试纸、刻度搪瓷杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、带玻璃珠的三角瓶、带棉塞的无菌试管、无棉塞的

2、空试管、培育皿、吸管、各种包装纸、防水纸、绳索、棉花、标签等。.实 验 程 序培育基的配制分别培育微生物常用器皿的预备培育基和玻璃器材的灭菌方法.实 验 程 序1 培育基的配制培育基的种类培育基的配制方法和步骤三种培育基的配方及配制无菌水的制备.实 验 程 序2 培育基的种类据组成成分可分为: 1.合成培育基：由各种纯化学物质按一定比例配制而成。 2.半合成培育基：有一部分纯化学物质和另一部分天然物质配制而成。 3.天然培育基：利用天然来源的有机物配制而成。从培育基的物理形状可分为 1.液体培育基：不加凝固剂的液体形状培育基。 2.固体培育基：在液体培育基中参与2%左右的凝固剂的固体形状的培育

3、基或农副产品培育基。 3.半固体培育基：在液体培育基中参与0.20.5%凝固剂而成的半固体状培育基。.实 验 程 序3 培育基的种类常用凝固剂为琼脂其次为明胶，又叫洋菜、冻粉。.实 验 程 序4 培育基的配制方法和步骤称量：按照配方正确称取各种原料放于搪瓷杯中。溶化：在搪瓷杯中参与所需水量，玻棒搅匀，加热溶解。调pH值：用1N NaOH或1N HCl调pH，用pH试纸对照。加琼脂溶化：加热过程中要不断搅拌，可适当补水。分装：留意不要污染棉塞。包扎成捆，挂上标签必需用铅笔写，注明何种培育基。灭菌备用：培育基灭菌后必需在370C下恒温培育24h，确定无菌生长，方可运用。.实 验 程 序5 培育基的

4、配制方法和步骤.实验程序6 培育基的配制方法和步骤.实 验 程 序7 三种培育基的配方及配制牛肉膏蛋白胨琼脂培育基用于分别和培育细菌，是一种天然培育基配方如下： 牛肉膏 3g 蛋白胨 5g 氯化钠 3g 琼脂 20g 自来水 1000mL pH 7.27.4 灭菌 1.05kg/cm2，2530min.实 验 程 序8 三种培育基的配方及配制马铃薯或豆芽汁蔗糖或葡萄糖琼脂培育基用于分别和培育真菌之用，是一种半合成培育基，其配方如下： 去皮马铃薯或鲜豆芽 200g 蔗糖或葡萄糖 20g 自来水 1000mL 琼脂 20g pH 自然 灭菌：含蔗糖1.05kg/cm2 20min 含葡萄糖0.1k

5、g/cm2 30min.实 验 程 序9 三种培育基的配方及配制淀粉琼脂培育基高氏一号Gause1，用于分别和培育放线菌，是一种合成培育基。配方如下：可溶性淀粉 20.0g KNO3 1.0g K2HPO4 0.5g MgSO4 7H2O 0.5g NaCl 0.5g FeSO4 7H2O 0.01g 琼脂 20g 自来水 1000mL 灭菌： 1.05kg/cm2 30min .实验程序10 三种培育基的配方及配制无菌水的制备 无菌水为下一次微生物分别实验中所需求的资料。 100mL三角烧瓶装有玻璃珠，装自来水45.0mL，试管中装9.0mL自来水，塞上棉塞，包扎、灭菌备用。三角烧瓶和试管须

6、预先塞好棉塞，并经干热灭菌。.实验程序11 分别培育微生物常用器皿的预备清洗一些玻璃仪器：如三角烧瓶、试管、培育皿、吸管等。棉塞的制造 包装培育皿和吸管等。 .实验程序12 培育基和玻璃器材的灭菌方法干热灭菌法：电热烘箱作为干热灭菌器加压蒸汽灭菌法 其步骤如下： 1.灭菌器内参与一定量的水，将用防水纸包扎好的物品放入其中。2.接通电源，进展加热。 3. 排除高压锅内的冷空气，可将排气阀翻开，待排出大气后封锁排气阀；或封锁排气阀，待压力上升到0.5kg/cm2时再翻开排气阀，待压力回复到0时再封锁排气阀。 4.当压力达15bl/in2即1.05kg/cm2时，此时灭菌器内的温度为1210C，维持

7、30min。对热不稳定的培育基如含有葡萄糖、氨基酸等物时，应适当降低压力，延伸时间。 5.灭菌时间一到，切断电源，待压力降至零时，才干翻开排气阀，然后翻开灭菌器盖，取出物品。.实 验 程 序13.实 验 程 序14.实验程序15 培育基和玻璃器材的灭菌方法间歇灭菌法： 待灭菌的物品放在灭菌器或蒸笼里，每天蒸煮1次，每次煮沸1h，延续3d反复进展。在每两次蒸煮之间，将物品指培育基放在370C恒温条件下培育过夜，这样可以使每次蒸煮后未杀死残留的芽孢萌生成营养体，以便下次蒸煮时杀灭。过滤除菌法： 不能用加热灭菌的液体物质如维生素、血清，普通可用细菌过滤器进展除菌。教师示范.实验程序16 培育基和玻璃器材的灭菌方法.实验程序17 培育基和玻璃器材的灭菌方法紫外线灭菌法： 普通30W灯管，9m3空间，距地面2m每次翻开紫外线照射0.5h，就使室内空气灭菌。假设照射紫外线时先喷洒石炭酸等化学消毒剂，可加强灭菌效果。紫外线虽有较强的杀菌力，但穿透力弱，即使一薄层玻璃或水层就能将大部分紫外线滤除，因此只适用于空气及外表杀菌。化学药剂消毒灭菌： 微生物实验室中常用的化学杀菌剂有升汞、甲醛、高锰酸钾、酒精、碘酒、龙胆紫、石炭酸、漂白粉、新洁尔灭、煤酚皂溶液，它们有的是杀菌剂，