实验三红细胞计数、血红蛋白测定及白细胞分类计数上课用

1、 红细胞计数、血红蛋白测定及白细胞分类计数精选ppt红细胞计数（一）原理用等渗稀释液将血液稀释并充入计数池后，于显微镜下计数。（二）试剂与器材Hayem液（氯化高汞、氯化钠、结晶硫酸钠）血细胞计数板精选ppt（三）操作 2ml稀释液+10ul血液，洗涤，振荡，混匀，充池，高倍镜计数中央大方格周围四个及中央五个中方格内细胞总数。精选ppt精选ppt（四）计算细胞数/525 10 200 106 =细胞数/100 1012/L（五）质量保证1.取血部位不当; 2.稀释倍数不准3.血液凝固; 4.混合不均匀，充液不当5.白细胞的影响6.血浆自身凝集素或球蛋白过高，红细胞易聚集。精选ppt（六）临床意

2、义1、增多（1）相对性增多（2）绝对性增多（3）真性红细胞增多症2、减少（1）造血物质减少 （2）红细胞破坏过多（3）红细胞丢失过多（4）骨髓造血功能衰竭3、红细胞计数和血红蛋白测定的关系精选ppt二、血红蛋白测定（HiCN法）（一）原理血细胞经血红蛋白转化液溶血后，除SHb外，其他血红蛋白均被高铁氰化钾氧化成Hi，与CN结合生成稳定的氰化高铁血红蛋白。它的最大吸收峰在540nm，测定A，得血红蛋白浓度。（二）试剂、器材文齐氏液、721分光光度计精选ppt（三）操作5ml血红蛋白转化液+20ul血液，振荡，混匀，5min后721分光光度计上测定。波长540nm。转化液调零，1cm比色杯。精选p

3、pt（四）结果报告1. A/44 /1 64458/1000 251=A 367.7（g/L）2.标准曲线法测定参考标准品的A值，以Hb浓度为横坐标，A值为纵坐标，绘制通过零点的曲线，查表。3. K值法: K=Hb总和 /A值总和 Hb浓度= A K精选ppt（五）质量保证1.丙球蛋白异常，白细胞异常增多，SHb疾病时，测定液体发生浑浊，可增加NaCl，消除影响。2.废液的处理每升加次氯酸钠35ml，敞开过夜。CN-氧化成CO2和N2，或水解CO32-和NH4+。3、对分光光度计相关参数的校正。精选ppt（六）方法学评价该方法结果稳定可靠，操作简便，为标准方法，但有一定毒性。除了该方法外，还有

4、SDS-Hb法和沙利氏法等，但SDS本身质量差异大，摩尔消光系数、标准液有待研究，为次选方法。沙利氏法误差大，已经被基本淘汰。精选ppt精选ppt血涂片制备、白细胞分类计数精选ppt血涂片制备实验原理： 使用推片将血液在载玻片上制成血膜。实验步骤：1、采血：直接用洁净的玻片蘸一滴血（使用毛细血管采血的方法）。2、推片：左手平置载玻片，右手持推片从后方或前方接近血滴，使血液沿推片的边缘展开适当的宽度，立即将推片与载玻片呈30-45度角，轻压推片边缘将血液推制成厚薄适当的血涂片，血涂片应呈舌状，头、体、尾清晰可见。3、干燥：将推好的血涂片在空气中晃动，使其迅速干燥。4、标记：在载玻片的一端用记号笔

5、编号。精选ppt精选ppt精选ppt血涂片制备注意事项：1、要制备良好的血涂片，玻片必须干净。2、最好使用非抗凝血制备，也可以EDTA抗凝血制备。3、血膜应厚薄适当，头尾及两侧应有一定的空隙。4、血涂片必须充分干燥后方可固定染色，否则细胞尚未牢固地吸附在玻片上，在染色过程中容易脱落。5、蘸在玻片上的血液量要适度，过多或过少均会影响涂片的结果。精选ppt血涂片染色实验原理： 不同种类的细胞及细胞的不同成分对酸性或碱性染料的亲和力不同，因而瑞氏染色后各种血细胞显示出各自的染色特征。实验步骤：1、待血涂片干燥后，用蜡笔在两端划线，以防染色时染液外溢。将玻片平置于染色架上，滴加染液3-5滴，使其迅速盖

6、满血涂片，约0.5-1 min后，滴加等量的或稍多的缓冲液，用吸耳球对准血片吹气，使染液充分混合。2、冲洗：室温染色5-10min后用流水冲去染液，待干。3、观察结果：将干燥后的血片置显微镜下观察。用低倍镜观察血涂片体尾交界处血细胞平铺的部分。精选ppt血涂片染色注意事项：1、未干透的血膜不能染色，否则细胞容易脱落。2、染液的量应适度，过少易挥发沉淀。3、染色时间的长短与染液浓度、染色时温度及血细胞的多少有关。4、冲洗时不能先倒掉染液，应以流水冲洗以防染料沉着在血涂片上。5、染色过淡，可以复染，复染时应先加缓冲液，创造良好环境，而后加染液，或加染液与缓冲液的混合液而不能先加染液。6、血细胞中的

7、各种有机物质特别是蛋白质对染色环境中氢离子浓度十分敏感。染色环境偏酸，增强伊红着色，红细胞和嗜酸粒细胞偏红，细胞核呈淡蓝或不着色，染色环境偏碱，增强天青着色，所有细胞呈灰蓝色，颗粒深蓝。精选ppt白细胞分类计数实验原理： 血细胞经涂片、固定和染色后，根据不同的形态和染色特征可将各种白细胞区分开来，计数一定数量的白细胞并进行分类、汇总，可计算出各种白细胞所占的百分比。实验步骤：1、血涂片的制备与染色。2、镜检：使用低倍镜浏览全片，观察细胞的着色、分布情况。高倍镜检查有无异常或外来细胞。最后选择血涂片体尾交界处染色良好、分布均匀的区域，滴香柏油一滴，在油镜下按一定顺序对视野中所见的白细胞进行分类。要避免重复计数或漏计，不可主观选择视野。共计数100-200个白细胞。计数时还要观察血细胞的形态、分布、染色情况，并注意有无寄生虫及其他异常改变。3、结果汇总：统计各类白细胞所占百分率，并计算绝对值。精选ppt白细胞分类计数注意事项：1、载玻片的质量；2、血膜的质量；3、染色；4、各种白细胞的观察与识别；5、如染色过深，可用甲醇或乙醇适当脱色；染色过浅时可用缓冲液将染液稀释后复染。6、发现有核红细胞时应单独计数，不计入100个白细胞内，以分类100个白细胞同时见多少有核红细胞来报告。精选ppt白细胞分类计数临床意