组织学制片技术ppt课件

1、组织学制片技术组织学与胚胎学教研室目的要求1、了解组织学制片的根本程序；2、熟习HE染色的步骤；3、掌握HE染色结果的察看。1切片标本：组织经固定、切片包括冰冻切片、石蜡切片及火棉胶切片染色、封固而制成的各种玻片标本。它为组织学中最常用的标本。一、组织学常用的几种标本类型2铺片标本：将肠系膜或皮下组织铺于载玻片上，经固定、染色、封固而制成的标本。3涂片标本：主要是将液态组织如血液、骨髓、痰液、腹水、精液等液体涂抹于载玻片上，经固定、染色制成的组织标本，以供察看细胞的形状与其微细构造。血液涂片宫颈涂片4磨片标本：不经脱钙及切片手续，而直接用手工在磨石上磨制成薄片，以便在显微镜下察看的骨、牙磨片标

2、本。大丽紫染色5分别标本：将极小组织块用化学药物的水溶液浸泡后，溶去其细胞间质，采用机械分别方法如振荡、针拨等方式使之分别成单个而又完好的细胞，经染色后涂于载玻片上进展镜检。6压片标本：组织经化学药物软化及染色后，用盖片压封于载玻片上进展镜检的标本。如运动终板的制造。7整装标本：一种是将很小的动物或早期胚胎经固定、染色后，封固于载玻片上。另一种是将小动物、胚胎或病变器官经固定后，保管于固定液中瓶装供肉眼察看用。可了解胚体的外表立体形状特征及病变部位与周围组织的毗邻关系。8活体标本：在组织细胞生活形状下进展察看的标本，或生活形状下进展活体染色后制成的标本。9血管注射标本： 一种是将树脂类铸形剂经

3、血管灌注后，用强酸或强碱腐蚀血管周围组织而制成的血管铸形标本，可瓶装供肉眼察看或进一步处置后作扫描电镜察看。另一种是将染料加明胶配制成染色液注入血管内，然后取材、固定、包埋、切片和封固所制成的组织切片标本。这类标本主要用于了解血管的走行及其与所支配组织或器官的相互关系。 组织切片的制造方法有：石蜡切片法、冰冻切片法、火棉胶切片法、超薄切片电镜标本、树脂切片、碳蜡切片等。石蜡切片法是最常用的方法，本节将较详细讲授其制造步骤。 二、组织切片的常规制造一 概述 组织切片制造方法的根本程序为：取材固定脱水透明包埋切片染色封固。1颈椎脱臼法 2断头法 3麻醉法 4空气栓塞法：二动物的致死与取材1、动物致

4、死法： 2、组织取材时应留意：(1)所取资料越新颖越好；(2)切取组织的刀剪刃口必需锋利；(3)取材时必需思索切面的方向；(4)组织块应力求小而薄；(5)收缩较大的新颖组织；(6)留意清洁；使细胞内蛋白质凝固，终止或抑制外源性和内源性酶活性，防止组织自溶；使组织成份转变为不溶性物质从而有利于保管。这就是固定的根本意义。三标本的固定1固定的目的(1)组织块不宜太大，普通以厚度为2毫米，长度不超越0.5厘米*0.5厘米。(2)固定液的量普通以组织块大小的30倍为宜，最好在固定组织的瓶底垫上脱脂棉或几层纱布以使固定液能从上下左右前后各方都能渗入组织块。(3)固定的时间，普通以24小时为宜。2固定的本

5、卷须知 (4)后固定：柔软组织在新颖时不易切成小块，往往采用重新固定法处置。5特殊固定：神经组织以在活体动物灌流固定后再重新投入固定液为佳，有些组织如肺那么采用由气管注射固定液后再投入固定液为好。常用的固定液有：110%福尔马林液：商品甲醛36%40%甲醛水溶液配成固定液其浓度为3.6%4%，也就是习惯上称为10%的福尔马林液。 210%中性缓冲福尔马林液：商品甲醛10ml，0. 1mol/L pH7.4 PBS 90ml。3固定剂用以固定组织的药剂，称为固定液。34%多聚甲醛磷酸缓冲液pH7.44Bouins液：苦味酸饱和水溶液75份，甲醛25份，冰醋酸5份配制而成。 1灌注法Irrigat

6、ion method自左心室插入自动脉，先以生理盐水冲冼血液后，注入固定液，30min后取材，置同一固定剂后固定。 2浸入法Immersion method 。4固定方法 资料固定后，药剂继续留在组织中，易使组织破坏，必需用水或酒精洗去。5固定后处置三种方式进展处置：3直接入脱水剂。2酒精充分洗涤Bouins液含苦味酸；1流水冲洗铬酸或铬酸盐固定的组织；1、目的 ：脱水与透明的目的在于为石蜡浸透至组织块内部以便进一步包埋做必要的预备。脱水必需从低浓度开场，逐渐转入高浓度脱水剂。另外脱水必需进展得很彻底。 2、常用脱水剂：1酒精： 2丙酮： 四脱水与透明3、常用的透明剂有二甲苯、甲苯、氯仿等。

7、二甲苯：透明组织的才干强，但易使组织收缩和变脆，故在二甲苯中不宜搁置太久。 氯仿：其透明才干远比二甲苯慢，透明时间可以延伸至24小时也无妨。 1 目的：由于生物体的组织有各种硬度不同的成份，必需加石蜡等作支持物质渗入组织块内部，并将组织块包埋起来，然后用切片机以制造极薄的切片。2 种类：包埋物质目前广泛采用的除石蜡外，还有火棉胶、炭蜡、明胶以及环氧树脂、OTC(冰冻切片包埋剂等。五包埋商品石蜡 的处置：浸蜡 ：包埋：通常运用包埋盒。石蜡包埋法： 反复溶化以添加石蜡的硬度和密度。温度不能超越该石蜡的溶点的2以上；12h 。 包埋通常运用组织包埋机、包埋盒及配套运用的不锈钢模具。把熔蜡倒入模具内，

8、再用加热的弯曲钝头镊子夹取曾经过浸蜡的组织块，使切面朝下平正地置放于模具底面的中央处，然后放上包埋盒，继续加满蜡，待包埋盒外表的熔蜡凝固后，将其移入加冰块的冷水中加速凝固，包埋即告完成。 170%乙醇 常温 1224h 280%乙醇 常温 1224h 390%乙醇 常温 23h 495%乙醇 常温 12h 595%乙醇 常温 12h 6100%乙醇 常温 1h 7100%乙醇 常温 1h8二甲苯 常温 2030min 9二甲苯 常温 2030min 10石蜡 4850 0.5h 11石蜡 4850 0.5h 12石蜡 5860 0.5h 13石蜡 5860 0.5h组织块处置时间表 石蜡切片机

9、可分三个部分，一是安装切片刀的部分，有调理刀片斜度和固着刀片的螺旋。一是安装资料的部分，也有螺旋可以调理资料的位置。另一是支配在旋转中向前推进的部分，控制着切片的厚薄，是比较重要而复杂的部分。六组织切片技术1、切片机简介：德国冰冻切片机冰冻切片机制冷系统自动进样/切片系统 照明系统2、载玻片和盖玻片处置：新载玻片上有油污，必需经过清洁液浸泡、充分漂洗、酒精浸泡、烤干备用。 (1) 明胶液：这是粘片最常用的胶液，简便优良。 (2)蛋白甘油：鸡蛋清 50ml ，甘 油 50m1 ，水杨酸纳 1g 。 3树脂胶：又称白色乳胶，运用浓度为1%2%，以蒸馏水稀释即可。 4 多聚赖氨酸，APES3-氨丙基

10、-乙氧基甲硅烷。3、载玻片上涂粘附剂：4切片步骤： 1切片刀或一次性切片刀必需锋利。2将切片刀安装在持刀座上以15为宜。3将蜡块包埋盒固定于支持器上，调整蜡块和刀刃至适当位置。4细心挪动刀座或蜡块支持器，使蜡块与刀刃接触，旋紧刀座和蜡块支持器。5修整蜡块粗切：匀速旋转切片轮，修切蜡块外表至包埋其中的组织块完好地全部切到。6调理切片厚度调理器普通为46m，进展切片，切出的蜡片应延续成蜡带。蜡带应完好无缺，厚度适宜、均匀，无刀痕、颤痕、皱折、开裂、缺损、松解等。7以公用小镊子悄然夹到蜡片，放入伸展器的温水中42左右，使切片全面展开。8将蜡片附贴于包被有粘附剂的载玻片上，蜡片应置放在载玻片右或左2/

11、3处的中央，蜡片与载玻片之间无气泡。9放入温箱中，4045约1小时烘干即可。七染色:1、染料及染色液简介： 1苏木精 2洋红 3苏丹 4伊红 5碱性品复红 6结晶紫 7亚甲蓝或美蓝 8甲基绿 2、Ehrlich苏木精的配制苏木精 2克、铵明矾 3克、无水酒精100毫升、甘油 100毫升、蒸馏水100毫升。此液配成后，须经12月，待它氧化成熟以后才干运用，故必需先配制。3、伊红液配制：伊红 2克、90%酒精 或蒸馏水200毫升。1取组织块，经固定后，常规石蜡包埋，切片，厚46m。2切片常规二甲苯脱蜡，下行酒精至水3明矾苏木精液染色510min，自来水洗去浮色。41%盐酸乙醇分化20s提插数下。5

12、自来水浸泡1 h。4、HE染色6上行酒精脱水：70乙醇5min80乙醇5min90乙醇5min。7置1%伊红液25min。8常规脱水，透明，封片胞核，嗜碱性，染为紫蓝色胞质，嗜酸性，染为红色 5、关于HE染色时本卷须知：1用含升汞的固定液固定的组织块,在切片染色前，应进展脱汞。详细方法：切片脱蜡，逐次进入70%酒精后，入稀碘液碘1g，碘化钾2g，蒸馏水3000ml内510min。蒸馏水稍洗，入5%硫代硫酸钠溶液内5min。蒸馏水充分洗后进入染色。2切片必需求充分枯燥后才干进展染色；而染色过程中切忌让切片枯燥。3用伊红水溶液染切片时，往往在经脱水的低浓度酒精时极易脱色，特别是对于细胞密集的组织更易出现这种情况。而用95%酒精配制的1%伊红染液那么可获较称心效果。4切片染苏木精后，分色(1%盐酸乙醇)这一步骤极为重要，应在显微镜下控制进展，普通以细胞核染色明晰，而