康乃馨的离体快繁开题报告书

1、学生：平阳骏驰凯康乃馨的离体快繁开题报告班级： 14生本 2专业：生物技术学部：生物医药指导教师：严铮辉二0一七年三月、实验目的 掌握植物离体快速繁育原理、方法和完整过程。二、实验原理康乃馨又名香石竹,花色艳丽,开花时间长,装饰效果好,是世界上最畅 TOC o 1-5 h z 销的切花之一,具有较高经济价值。由于病毒病侵害,常使植株矮化,花朵变小,花色产生斑点,退色甚至不开花,影响切花产量和质量。通过茎尖分生组织培养,能够获得“无病毒的安康植株,对于引进的少而新的脱毒种苗,再进展一次茎尖培养,进一步降低根底苗中的病毒含量,并通过组织培养的方法快速繁殖,在短期,就可以获得大量的脱毒试管苗,使引入

2、材料迅速在生产上推广应用,取得明显的经济效益。三、实验仪器与材料：.材料康乃馨枝条.仪器设备超净工作台，带有吸水纸的成套的培养皿，无菌水培养基 MS+1mg/L 6-BA剪刀，镊子量筒，酒精灯，滤纸，蒸馏水，小刷子纱布，棉塞，牛皮纸，标签纸，肥皂，酒精喷壶.试剂95%乙醇，70%酒精，70%酒精棉球四、培养基的配方 1香石竹的生芽培养基MS+ IAA (0.1mg/L) + BA( 2.0mg/L)+NAA(0.2mg/L)+ 蔗糖 30g/L +琼月旨(8g/L), pH5.8-6.0配制0.3L,用小培养瓶分装1015瓶。另外，需要制备无菌水20瓶大培养瓶，每人 34 瓶， ，纱布、碟子假

3、设干，后二者分别用报纸包好一同灭菌。 2香石竹的继代培养基MS+ BA( 0.3mg/L)+NAA(0.2mg/L)+ 蔗糖30g/L +琼脂 (8g/L),pH5.8-6.0jSE制0.3L,用小培养瓶分装10-15瓶。另外，需要制备无菌水20瓶大培养瓶，每人 3-4瓶， ，纱布、碟子假设干，后二者分别用报纸包好一同灭菌。 3香石竹的生根培养基MS+生根培养基为 1/2MS+NAA(0.075mg/L)+ 蔗糖(30g/L)+琼脂 (8g/L), pH5.8-6.0配制0.3L,用小培养瓶分装10-15瓶。另外，需要制备无菌水20瓶大培养瓶，每人 3-4瓶，纱布、碟子假设干，后二者分别用报纸

4、包好一同灭菌。五、实验步骤.灭菌 1实验室及超净台消毒先进展无菌室消毒，用紫外线照射30-45分钟，地面消毒，紫外灯关闭约 20min 前方可进去工作。对超净工作台进展消毒，开启无菌风开关，开启紫外，让无菌风吹上15-20min前方可工作。并用70%的酒精棉台擦净工作台 2外植体灭菌取从市场上购置的康乃馨枝条，去掉大的叶片，剪取带腋芽的节结，用肥皂洗洁精清洗外表，再用自来水冲洗30-60S然后在无菌室超净工作台用70%酒精浸没20-40秒根据材料的木质化程度掌握具体的浸没时间。用0.2%勺次氯酸钠溶液浸泡10-15min再用无菌水冲洗3-4次，放入已灭菌的培养皿中的滤纸上待用。.接种接种时先点

5、燃酒精灯，镊子和剪刀都要先浸泡在70%的酒精溶液中。用酒精灯上灼烧好的镊子、剪刀取出一个侧芽或小段茎，迅速翻开三角瓶口，将材料插入瓶，注意材料上下端的极性，不能倒插。在酒精灯边塞回锡箔纸，用记号笔在标签纸上写明材料、日期、实验人，并将标签贴在相应试剂瓶上。.培养条件25c光照13h/天，光照10001%4.继代培养： 1无菌操作准备将培养基及各种接种用具放入超净工作台，开紫外灯，照射消毒20-30min开送风开关，关紫外灯，通风10min后，翻开照明日光灯。洗手， 用纱布吸取75%酒精擦手，擦拭超净台，擦拭培养基和无菌水瓶，点燃酒精灯，镊子、解剖刀、剪刀等接种工具灼烧灭菌，待冷却后使用。2无菌

6、操作接种酒精灯火焰旁翻开香石竹芽苗培养基，用镊子取出香石竹芽苗，置于无菌培养皿，用解剖刀将芽苗簇切割成含23 芽苗， 然后切去芽 苗的上端。 3培养将培养瓶外表用酒精擦拭消毒，置于培养室进展光照培养。整理、清洁超净工作台。 4观察记录定期观察培养情况，包括观察日期、生长情况、以及污染情况等，并做好记录。.诱导生根：用低浓度的吲哚乙酸或者萘乙酸或无激素的N6 培养基诱导 1无菌操作准备将培养基、无菌水、及各种接种用具放入超净工作台，开紫外灯，照射消毒20-30min开送风开关，关紫外灯，通风10min后，翻开照明日光灯。洗手，用纱布吸取75%酒精擦手，擦拭超净台，擦拭培养基和无菌水瓶，点燃酒精灯

7、，镊子、解剖刀、剪刀等接种工具灼烧灭菌，待冷却后使用。2无菌操作接种酒精灯火焰旁翻开香石竹培养瓶，用镊子取出香石竹芽苗，置于无菌不锈钢碟子，用解剖刀将芽苗的每个小芽分开。用镊子将单个小芽插入生根培养基，每瓶接3 个。盖上瓶盖，贴上标签，注明材料名称、接种日期和。 3培养将培养瓶外表用酒精擦拭消毒，置于培养室进展黑暗培养。整理、清洁超净工作台。 4观察记录定期观察培养情况，包括观察日期、生长情况、以及污染情况等，并做好记录。.试管苗移栽1缓苗移栽试管苗在移栽前几天一般都需要进展炼苗，让它有个逐步适应环境的过渡阶段，一般方法是先将培养瓶从培养室拿到常温下放置，然后将试管苗容器口上包扎的塞子或纸去掉

8、放置几天，此时需注意保持空气湿度，并防止杂菌污染，尤其是在炎热的夏季，由于气温较高，当封口翻开后，该容器就由原来的无菌状态转为有菌状态，杂菌容易很快生长而污染试管苗。在去掉封口时采用培养基上加薄层水的处理效果较好， 即可提高湿度又可减少杂菌生长，但假设放置时间较长那么需换水。待试管苗逐步适应外界的光照、温度和湿度后再进展移栽，即可提高移栽成活率。（二 ）移栽技术移栽时， 首先将试管苗从所培养的瓶中取出，取时要用镊子小心地操作， 切勿把根系损坏，然后把根部粘附的琼脂漂洗掉，要求全部除去，而且动作要轻，以减少伤根伤苗。琼脂中含有多种营养成份，假设不去掉，一旦条件适宜，微生物就会很快滋生，从而影响植株的生长，甚至导致烂根死亡。移栽前，先将基质浇透水，并用一个筷子粗的竹签在基质中开一穴，然后再将植株种植下去，最好让根舒展开，并防止弄伤幼苗。种植时幼苗深度应适中，不能过深或过浅，覆土后需把苗周围基质压实，也可只将容器摇几下待基质紧实即可，以防损伤试管苗的细弱根系和根毛。移栽时最好用镊子或细竹筷夹住苗后再种植在小盆，移栽后需轻浇薄水，再将苗移入高湿的环境中，保证空间湿度达90%以上。六、实验结果与分析七、参考文献1王莲英，朱秀珍， 虞佩