水和污水中微生物检验记录

1、第 页 共 页( )水中微生物检验记录样品编号： 检验开始时间： 年 月 日样品名称： 检验完成时间： 年 月 日检测项目： 检测依据： 菌落总数测定：无菌操作吸取充分混匀的样品10mL加入到装有90mL的灭菌水三角烧瓶中（可放有适量玻璃珠）混匀，做成110稀释液。取110稀释液1mL加入到9mL灭菌水中混匀，做成1100稀释液。以上法制备10-3、10-4稀释液（稀释倍数按水样污浊程度而定）。选择合适的稀释度，吸取1mL加入到无菌平皿中，每一稀释度做2个平皿。同时另找两个平皿只倾注营养琼脂培养基做空白对照。加入冷至461的营养琼脂培养基约15mL，混匀，凝固后，翻转平板倒置于 日 时 分置3

2、6 1开始培养， 日 时 分，取出平板，共培养 小时 分钟。计数平板上菌落数（CFU）。稀 释 度10010-110-210-310-4空白对照菌 落 数（CFU/板）平 均 值（CFU/板）计算及结果： 细菌菌落总数（CFU/ mL）： 二、 总大肠菌群测定（多管发酵法）：接种量 mL1010101010111110.10.10.10.10.1培养时间（h）培养温度（）空白开始结束共初发酵试验37平板分离37革兰氏染色/复发酵试验37注： eq oac(,+)产酸产气；+产酸不产气或有可疑菌落；-不产酸不产气或无可疑菌落；G-b革兰氏阴性杆菌；G+b革兰氏阳性杆菌；G+c革兰氏阳性球菌。结果

3、：根据证实为总大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，得 MPN/100mL。电子天平编号： 使用状况 试验前： 试验后：培养箱编号： 使用状况 试验前： 试验后：检测人： 校核人： 审核人：样品编号：总大肠菌群测定（滤膜法）：用灭菌过的滤膜及滤器过滤水样（待过滤水样量根据所预测的细菌密度而定），水样抽滤完，再抽5s，关上滤器阀门取下滤器，用灭菌镊子夹取滤膜边缘部分移放在品红亚硫酸钠培养基上，滤膜截留面细菌面朝上，滤膜应与培养基完全贴紧，两者间不得留有气泡。然后平皿倒置放于37恒温培养箱培养24h，后挑取典型菌落染色，镜检。（凡革兰氏阴性无芽孢杆菌，需于乳糖蛋白胨培养液培养，经37，24h培养产酸

4、产气者为总大肠菌群阳性）。接种量，ml培养时间（h）培养温度()空白开始结束共菌落数（个/板）37革兰氏染色/乳糖蛋白胨培养37 eq oac(,+)产酸产气；+产酸不产气或有可疑菌落；-不产酸不产气或无可疑菌落；G-b革兰氏阴性杆菌；G+b革兰氏阳性杆菌；G+c革兰氏阳性球菌。计算结果： 总大肠菌群数（个/L）=（滤膜上生长的大肠杆菌菌落数*1000）/过滤水样量（ml）结果： 总大肠菌群测定（快速测定法）：每份预监测水样，接种水样总量为55.5ml，分别接种大纸片5张，小纸片10张。每张大纸片接种10ml水样，五张小纸片每张接种1ml，另五张小纸片接种1:10稀释水样1ml，放于37恒温培

5、养箱培养24h，观察结果。接种量 mL1010.1培养温度（）培养时间（h） 空白开始结束共结果判定1：紫红菌落（片状红晕）周围有黄圈（阳性）372：纸片一种颜色无菌落生长（阴性）3：紫红色或紫色周围无黄圈（阴性）4：酸在水样接种后变黄无紫色菌落（阴性）5：纸片变色且呈不典型菌落作复发酵实验验证复发酵试验37 eq oac(,+)产酸产气；+产酸不产气或有可疑菌落；-不产酸不产气或无可疑菌落；G-b革兰氏阴性杆菌；G+b革兰氏阳性杆菌；G+c革兰氏阳性球菌； 结果：根据阳性纸片张数，查MPN检索表（若稀释后接种，查MPN表后乘以稀释倍数，报出结果），得1L水中总大肠菌群数 。电子天平编号： 使

6、用状况 试验前： 试验后：培养箱编： 使用状况 试验前： 试验后：检测人： 校核人： 审核人：样品编号：三、 粪大肠菌群测定（多管发酵法）：根据水样污染程度确定水样接种量（若接种量为10ml，试管中则装有三倍乳糖蛋白胨培养液5ml，若接种量为1ml或小于1ml,则接种于单倍培养液10ml试管内）接种量 mL培养温度（） 培养时间（h）空白开始结束共初发酵试验370.5复发酵试验44.50.5注： eq oac(,+)产酸产气；产气； + 产酸不产气或有典型菌落；-不产酸不产气或无典型菌落。结果：根据证实为耐热大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，得 MPN/100mL。粪大肠菌群测定（滤膜法）：

7、用灭菌过的滤膜及滤器过滤水样（水样量根据细菌受检测的特征和水样中预测的细菌密度而定），使用M-FC培养基，置于44.50.5恒温培养箱培养24h 后观察。（必要时可疑菌落接种EC培养液，44.50.5恒温培养箱培养24h，如产气怎证实为粪大肠菌群。接种量，ml培养温度()培养时间（h）空白开始结束共菌落数（个/板）44.50.5革兰氏染色/EC培养44.50.5 eq oac(,+)产酸产气；+产酸不产气或有可疑菌落；-不产酸不产气或无可疑菌落；G-b革兰氏阴性杆菌；G+b革兰氏阳性杆菌；G+c革兰氏阳性球菌。计算及结果： 总大肠菌群数（个/L）=（滤膜上生长的粪大肠菌菌落数*1000）/过滤

8、水样量（ml）结果： 粪大肠菌群测定（快速测定法）：每份预监测水样，接种水样总量为55.5ml，分别接种大纸片5张，小纸片10张。每张大纸片接种10ml水样，五张小纸片每张接种1ml，另五张小纸片接种1:10稀释水样1ml，放于44.5+1恒温培养箱培养18-24h，观察结果。接种量 mL1010.1培养温度（）培养时间空白开始结束共结果判定1：紫红菌落（片状红晕）周围有黄圈（阳性）44.52：纸片一种颜色无菌落生长（阴性）3：紫红色或紫色周围无黄圈（阴性）4：酸在水样接种后变黄无紫色菌落（阴性）5：纸片变色且呈不典型菌落作复发酵实验验证复发酵试验37 eq oac(,+)产酸产气；+产酸不产

9、气或有可疑菌落；-不产酸不产气或无可疑菌落；G-b革兰氏阴性杆菌；G+b革兰氏阳性杆菌；G+c革兰氏阳性球菌； 结果：根据阳性纸片张数，查MPN检索表（若稀释后接种，查MPN表后乘以稀释倍数，报出结果），得1L水中粪大肠菌群数 。电子天平编号： 使用状况 试验前： 试验后：培养箱编： 使用状况 试验前： 试验后：检测人： 校核人： 审核人：样品编号：四、 粪链球菌测定（多管发酵法）：根据水样污染程度，接种三个不同量的水样于叠氮化钠葡萄糖培养液内，每一不同量水样分别接种5管，即共接种15管。混匀后置于37的恒温培养箱，培养24h，（若培养后未见明显浑浊生长，则继续再培养24h，）经24h或48h

10、培养后叠氮化钠葡萄糖培养液呈现浑浊有细菌生长，则表示推测实验为阳性，需进一步做验证试验。在推测试验阳性管内取一环接种于乙基紫叠氮化钠葡萄糖培养液中，置于37的恒温培养箱，培养24h，若试管底部显现紫色沉淀小圆块或培养液有明显浑浊生长表示证实试验阳性。反之，再取保留在培养箱推测试验阳性管内一环接种培养24h后观察。编号试验培养温度（）培养时间空白开始结束共推测性试验加样量（ml）叠氮化钠葡萄糖培养液37叠氮化钠葡萄糖培养液37证实性试验乙基紫叠氮化钠葡萄糖培养液37乙基紫叠氮化钠葡萄糖培养液37注： +生长或有可疑菌落；-不生长或无可疑菌落；G+c革兰氏阳性球菌；G-c革兰氏阴性球菌结果：根据证

11、实为耐热大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，得 MPN/100mL。粪链球菌测定（滤膜法）：根据水质污染情况确定稀释倍数，用无菌镊子夹取滤膜边缘部分，将粗糙面向上，贴在滤床上，固定好滤器，过滤。每张滤膜过滤250mL水样或稀释液。将过滤后的滤膜直接转移至KF链球菌琼脂培养基上，同时避免在滤膜和培养基之间夹留着气泡。将平皿倒扣，放置在37的恒温培养箱，培养48h后，取出挑去可疑菌落进行镜检，并且计数。从滤膜上挑取典型菌落，接种到胆汁-七叶苷-叠氮化物琼脂培养基上，在440.5培养48h，做证实性试验，如有菌落生长，则作过氧化氢酶实验证实是否存在粪链球菌。编号试验培养温度（）培养时间空白开始结束共

12、推测性试验过滤器加样量（ml）KF链球菌琼脂培养37红色菌落数粉红色菌落数染色镜检证实性试验胆汁-七叶苷-叠氮化物琼脂培养440.5过氧化氢酶(阳性/阴性)注： +生长或有可疑菌落；-不生长或无可疑菌落；G+c革兰氏阳性球菌；G-c革兰氏阴性球菌。计算及结果：水中的粪链球菌数（CFU/ 1000mL）： 电子天平编号： 使用状况 试验前： 试验后：培养箱编号： 使用状况 试验前： 试验后：检测人： 校核人： 审核人：样品编号：五、沙门氏菌测定： 水样量根据水中沙门氏菌浓度而定。前增菌：将获得的水样转入含100ml缓冲蛋白胨水瓶中，样品量在10-100ml，加等体积双倍浓度缓冲蛋白胨水，样品量在

13、1-10ml加10倍普通浓度缓冲蛋白胨水，在37下培养16-20h。增菌：将前增菌样品以1:10比例转入增菌液（非沙门氏浓度很高情况下1:100比例转入为好），接种在四硫磺酸盐培养液，孔雀绿-氯化镁培养液，双倍浓度的亚硒酸盐F培养液于培养箱内培养。划平板：增菌培养后，将培养物接种到煌绿酚红琼脂和亚硫酸铋琼脂上放入培养箱培养。培养后观察菌落形态。选择可疑菌落进行生化实验，血清学实验。水样量ml前增菌缓冲蛋白胨水温度：37时间h：20h开始结束共可疑菌落形态增菌增菌液：温度：时间h：/四硫磺酸盐培养液432244h/孔雀绿-氯化镁培养液3722h/双倍浓度亚硒酸盐F培养液3724h/分离培养（注：+生长或有可疑菌落；-不生长或无可疑菌落）平板温度：时间h：/煌绿酚红琼脂3724h亚硫酸铋琼脂372448h生化反应血清学实验结果六、蛔虫卵的测定：过滤：充分摇匀样品，转入不锈钢开口直壁容器至10L刻度（如样品中含有草梗，纸渣等较大杂质，需过筛网并用吐温80溶液清洗筛网及杂质，洗液并入10L样品中）。沉淀：过滤后样品在15-25室温静置过夜沉淀12-24h，用虹吸管吸取并弃去上清液，避免扰动，直至保留90-100ml含沉淀物质的样品。离心：沉淀浓缩后的样品转移至3个螺口尖底离心管，以1000g的离心力离心15min，用巴氏滴管吸取并弃去上清液，少量留之，避免带出沉淀。用少量吐温80溶液将3