免疫学检验第十五章流式细胞仪分析技术及应用

1、第十五章 流式细胞仪分析技术及应用(Chapter 17 Detection of complement and its application)课程承担：济宁医学院免疫学教研室课件制作：医学免疫学省级教学团队主 讲 人：戴 军授课班级：2010级医学检验本科授课时间：2013年10月8日临床免疫学检验第十五章 流式细胞仪分析技术及应用第一节 流式细胞仪的分析及分选原理第二节 数据的显示与分析第三节 流式细胞仪免疫分析的技术要求第四节 流式细胞术在免疫学检查中的应用第一节 流式细胞仪的分析及分选原理流式细胞术（flow cytometry，FCM）是以流式细胞仪为检测手段的一项能快速、精确的对

2、单个细胞理化特性进行多参数定量分析和分选的技术。通过流式细胞仪我们可以干什么？相对细胞大小相对细胞颗粒密度和内部复杂度细胞表面及内部分子的表达（多参数）分离纯化细胞比较形态学观察，免疫组化第一节 流式细胞仪的分析及分选原理一、流式细胞仪分析的工作原理喷嘴荧光信号或侧向散射光前向散射光鞘液激光第一节 流式细胞仪的分析及分选原理基本组成结构液流系统：样本，鞘液光学系统：激光光源，分色反光镜，光束成形器，透镜组，光电倍增管数据处理系统：计算机和软件一、流式细胞仪分析的工作原理第一节 流式细胞仪的分析及分选原理基本组成结构基本工作原理一、流式细胞仪分析的工作原理第一节 流式细胞仪的分析及分选原理分选的

3、基本原理二、分选基本原理第二节 数据的显示与分析前向散射光（FS）反映细胞或颗粒的大小侧向散射光（SS）反映细胞或颗粒内部结构复杂程度、表面光滑程度荧光（FL）反映细胞或颗粒被染上荧光数量的多少一、参数第二节 数据的显示与分析前向散射光（SS）反映细胞或颗粒的大小二、散射光的测定第二节 数据的显示与分析前向散射光（SS）反映细胞或颗粒的大小二、散射光的测定第二节 数据的显示与分析侧向散射光（FS）反映细胞或颗粒内部结构复杂程度、表面光滑程度二、散射光的测定第二节 数据的显示与分析侧向散射光（FS）反映细胞或颗粒内部结构复杂程度、表面光滑程度二、散射光的测定第二节 数据的显示与分析荧光信号检测与

4、放大器反映细胞或颗粒被染上荧光数量的多少 激发光：荧光素吸收激光能量 荧光：荧光素将吸收能量释放，释放较入射光波长更长的光量子 荧光素抗体：荧光抗体与细胞抗原结合越多，产生的荧光信号越强 三、荧光测量第二节 数据的显示与分析荧光信号检测与放大器反映细胞或颗粒被染上荧光数量的多少三、荧光测量第二节 数据的显示与分析荧光信号检测与放大器反映细胞或颗粒被染上荧光数量的多少放大器 线性放大器 对数放大器三、荧光测量第二节 数据的显示与分析单参数直方图四、数据显示方式第二节 数据的显示与分析单参数直方图四、数据显示方式第二节 数据的显示与分析单参数直方图四、数据显示方式第二节 数据的显示与分析单参数直方

5、图四、数据显示方式第二节 数据的显示与分析双参数散点图（点图）四、数据显示方式人外周血白细胞第二节 数据的显示与分析双参数散点图（点图）四、数据显示方式人外周血白细胞中的T细胞第二节 数据的显示与分析流式细胞仪的多参数分析四、数据显示方式人外周血白细胞中的T细胞亚群“门”的设置第二节 数据的显示与分析流式细胞仪的多参数分析四、数据显示方式“门”的设置第三节 流式细胞仪免疫分析的技术要求制备单细胞悬液外周血淋巴细胞样品的制备培养细胞的样品制备 悬浮生长贴壁生长新鲜实体组织单细胞悬液的制备单细胞悬液的保存 深低温保存法 乙醇或甲醇保存法 甲醛或多聚甲醛固定法一、免疫检测样品的制备第三节 流式细胞仪

6、免疫分析的技术要求异硫氰酸荧光素（FITC）激发光：488nm绿色荧光PE（藻红蛋白）激发光：488nm橙色荧光二、免疫分析中常用的荧光染料与标记染色第三节 流式细胞仪免疫分析的技术要求二、免疫分析中常用的荧光染料与标记染色第三节 流式细胞仪免疫分析的技术要求二、免疫分析中常用的荧光染料与标记染色第三节 流式细胞仪免疫分析的技术要求二、免疫分析中常用的荧光染料与标记染色第三节 流式细胞仪免疫分析的技术要求荧光染料荧光标记直接免疫荧光染色法间接免疫荧光染色法细胞自发荧光三、免疫分析中常用的荧光染料与标记染色第四节 流式细胞术在免疫学检查中的应用T细胞（CD3 CD4 CD8）一、淋巴细胞及其亚群

7、的分析第四节 流式细胞术在免疫学检查中的应用T细胞（CD3 CD4 CD8）一、淋巴细胞及其亚群的分析第四节 流式细胞术在免疫学检查中的应用T细胞（CD3 CD4 CD8）一、淋巴细胞及其亚群的分析第四节 流式细胞术在免疫学检查中的应用B细胞（CD19 CD5）一、淋巴细胞及其亚群的分析第四节 流式细胞术在免疫学检查中的应用NK细胞（CD3-CD16+CD56+）一、淋巴细胞及其亚群的分析第四节 流式细胞术在免疫学检查中的应用细胞介导细胞毒试验细胞内细胞因子测定二、淋巴细胞功能分析T细胞内IFN-g的测定第四节 流式细胞术在免疫学检查中的应用三、淋巴造血系统分化抗原及白血病免疫分型总结掌握流式细胞仪的分析和分选原理掌握FS、SS、FL参数及其意义熟悉单参数