MSC组织再生功能检测资料

1、MSCfi织再生功能检测在机体正常的组织损伤修复过程中，MSC是一种重要的参与组织再生的细胞库。在组织损伤引起的特殊信号作用下， MSC迁徙至损伤部位，在局部增殖，并依据不同的损伤信 息而沿着不同的途径分化。MSC易于分离培养，体外增殖能力旺盛，因此，MSC是一种实用的组织修复种子细胞。 TOC o 1-5 h z 目前关于MSC的组织再生功能有两种理论： 其一，将体外扩增的M5c移植到组织损伤部位， 在局部微环境作用下，定向分化为某一特定类型功能细胞，直接参与组织损伤修复过程；其二，移植于损伤部位的细胞，分泌多种生物活性物质，包括细胞因子和细胞生长因子等，以 改善组织损伤部位再生微循环，促进

2、宿主组织中残存的干/祖细胞增殖分化，MSC间接参与了组织修复过程。MSC改善组织再生微环境，表现为细胞所分泌的生物活性物质具备的多种功能，包括：（1）趋化周阔的宿主干/祖细胞迁徙至损伤那位；（2）促进干/祖细胞的增殖分化；（3）抑 制受损伤细胞的凋亡；（4）促进毛细血管新生；（5）激活周围细胞金属硫蛋白酶活性，抑制 瘢痕形成；（6）调节免疫细胞功能，抑制炎性反应。目前，关于MSCfi织再生功能的检测还没有一个明确的标准。在体外检测中，只能通过检测MSO化为受损组织细胞的能力和MSO泌修复组织损伤有关细胞因子、抗炎因子、营养因子等来鉴定MSC勺组织再生功能，这是判定MSCfi织再生功能的基础，但

3、是这样的评判 也存在很大缺陷的， MSC体外的培养环境和在体内微环境中存在很大差别，微环境下细胞 之间的接触作用，损伤细胞释放的因子对 MSC勺刺激作用和趋化彳用等可能都对MSO泌的细胞因子种类和剂量有影响。因此，通过在各种适应症治疗时，对MSCE微环境中的组织再生功能的相关指标进行检测是必要的。干细胞制剂质量控制和临床前研究指导原则（试行）相关法规中，细胞制剂的质量检验里面对生物学效力试验的有关规定虽然没有明确规定干细胞制剂组织再生能力的标准， 但规定涵盖了干细胞制剂的组织再生能力。法规内容：生物学效力试验可通过检测干细胞分化潜能、诱导分化细胞的结构和生理功 能、对免疫细胞的调节能力、分泌特

4、定细胞因子、表达特定基因和/或蛋白等功能，判断干细胞制剂与治疗相关的生物学有效性。对间充质干细胞，无论何种来源，应进行体外多种类型细胞（如成脂肪细胞、成软骨细 胞、成骨细胞等）分化能力的检测，以判断其细胞分化的多能性（ multipotency ）。对未分化的胚胎干细胞和iPS细胞，须通过体外拟胚胎体形成能力，或在SCID鼠体内形成畸胎瘤的能力，检测其细胞分化的多能性 （pluripotency ）。除此以外，作为特定生物学效应试验， 项目申请者应提供与其治疗适应症相关的生物学效应检验内容及结果。我对间充质干细胞组织再生能力的理解，包括两方面：1、间充质干细胞在体外定向诱导生成组织细胞及组织的

5、能力。2、间充质干细胞在各种适应症中发挥的组织细胞再生或分泌组织细胞再生相关因子的能力。第一方面间充质干细胞在体外定向诱导生成组织细胞及组织的能力，我们可以在体外进行检测，但是第二方面间充质干细胞在各种适应症中发挥的组织细胞再生或分泌组织细胞再 生相关因子的能力， 就需要在各种适应症动物模型中去检测，目前，我们可以通过跟踪做各种适应症的其他小组的治疗进程，与他们协作，在各种适应症治疗过程中，检测组织细胞再生的相关指标，来取得我们想要的检测结果。目前，涉及自体或异体MSC的临床试验项目，已经获得美国国家食品药物监督管理局批准。这些项目包括：（I ）异体MSC用于造血干细胞移植后移植物抗宿主病的治

6、疗；（2）异体MSC治疗克隆氏病；（3）自体MSC治疗多发性硬化症；（4）MSC治疗肝脏纤维化；（5 ）自体 MSC用于急性脊髓损伤；（6）MSC用于骨折后骨不连；（7）MSC治疗半月板损伤;（8）心脏缺血 性疾病的治疗。上述临床试验分别接人1 3期，在国内，相关的实验及临床研究亦获得广泛开展，多家单位已经开展了自体或异体MSC细胞治疗项目.用于包括骨修复、心肌梗死、外周血管病等多种疾病的预防或治疗研究。目前间充质干细胞在体外定向诱导的组织细胞包括：骨细胞、 软骨细胞、脂肪细胞、胰 岛3细胞、神经细胞、肝细胞、心肌细胞、血管内皮细胞、肌肉细胞、脊髓基质细胞等。中国科学院上海生命科学研究院研究员

7、时玉舫最新研究发现，当组织损伤发生时，受损 部位往往释放大量的“创伤信号”，并伴有多种炎症性细胞浸润和炎症因子分泌。在“创伤信号”的作用下，间充质干细胞会被募集或动员至受损部位，发挥调控炎症反应和促进组织修复的作用。组织修复相关因子：HGF、SDF1、BDNF血管形成PCR检测VEGF、PDGF间充质干细胞具有很高的可塑性、可移植性，可用作心肌、神经元等的修复，当组织损 伤发生后，通过各种途径引入的间充质干细胞会定向归巢至损伤处，发挥治疗作用，有助于损伤组织修复。但间充质干细胞参与组织修复的过程是复杂的，其作用机制主要表现在归巢至受损部位，局部微环境的定向正确分化和抑制宿主的免疫反应等。间充质

8、干细胞植入宿主体内进行组织修复需要明确几个问题：1、MSC如何有效的归巢至损伤部位；2、MSC在微环境作用下如何正确定向分化；3、MSC与宿主的免疫排斥反应。损伤组织释放一系列的趋化因子（CK）损伤组织细胞表达特异性受体或配体引导MSC黏附至损伤部位血管损伤后释放SDF-1Msc 表达 CXCR4 CXCR1SDF-1对表达CXCR4勺MSC有趋化作用抗凋亡，促血管再生作用MSC牙周组织修复外伤和炎症造成的关节软骨缺损，软骨组织工程包括种子细胞的选择、组织支架的应用及培养环境的构造。MSC牙周组织修复不同时间点检测：1、左侧下颌骨定位荧光标记阳性MSC细胞的存在（切片DAPI染色）；2、HE染

9、色观察到牙周组织有肉芽组织生成；3、HE染色观察缺损区有无骨组织生成；4、急性炎症趋化 MSC向炎症部位归巢；5、检测MSC分化为骨细胞成熟标志物 OPN和I型胶原；6、MSC的旁分泌作用，营养作用、支持作用、免疫调节作用、抗瘢痕形 成作用、促血管形成作用。胰腺MSC修复坏死胰腺组织造模：处理胰腺组织，造胰腺组织坏色模型：开腹结扎胰腺组织，7-8小时后，胰尾局部组织变黑坏死，周围有炎性细胞浸润。治疗：在胰腺未损伤部位植入胰腺DAPI标记的胰腺MSC细胞。检测指标：观察胰腺组织外观是否趋于正常，切片胰岛细胞是否趋于正常；DAPI标记的阳性MSC在胰腺组织是否存在，数量多少； 治疗组和未治疗组的动

10、物成活率对比； 骨髓MSC通过分泌TCG-3来才制T淋巴细胞的增殖。MSC用于心脏缺血性疾病的治疗MSC分泌的人分泌型卷曲相关蛋白2（sfrp2）是一种分泌型糖蛋白， 调控细胞增殖和凋亡， 在缺血性脑中风模型中起细胞保护作用。在大鼠脑中风 MSC治疗中，MSC静脉注射或移植至脑受损缺血部位，引起体内内皮细胞和星形细胞表达生长和营养因子，分泌的IGF-1和脑衍生神经营养因子（BDNF）可以明显降低大鼠长期的认知功能和动作技能的修复。同时损伤部位检测到类胰岛素生长因子（IGF-1）、bFGF、EGF、VEGF因子表达水平均较对照组升高。提示评价 MSC治疗心脏缺血性疾病时检测如下因子：IGF-1、

11、BDNFbFGF、EGF、VEGF、Sfrp2 等。在小鼠心肌炎模型中，MSC移植可以减少心肌层 CD68+细胞的增加和减少单核细胞趋化 蛋白（MCP-1）的表达。在损伤黑质体 AD-MSC移植治疗中，黑质纹状体的功能恢复机制包括：一小部分MSC分化为多巴胺神经细胞，另一种是通过分泌脑源性神经营养因子（BNDF）、神经胶质细胞营养因子（GDNF）和神经生长因子（NGF）来间接调整氧化应激诱导的神经炎。在低氧环境中，MSC释放HGF和IGF-1刺激心脏祖细胞，促进心脏祖细胞（CP。的成熟、增殖和分化。在体外，BM-MSC分泌到培养上清（CM）中的因子促进了神经前体细胞（NPC）的增殖和胶质纤维酸

12、性蛋白（GFAB的表达。在脑脊髓炎中，MSC条件培养上清中关键的治疗因子包括HGF、bFGF、BNDF和PDGEAkt-MSC与MSC相比，分泌跨膜蛋白2 （Sfrp2）显著升高。Sfrp2在缺血性脑中风模型 中其细胞保护作用。在体内脑中风实验研究中，输注的MSC中仅有3%的MSC表达神经细胞表面标志物。CM神经保护机制依赖于分泌的组织抑制剂：颗粒蛋白酶前体和金属蛋白酶-1 （TIMP-1 ）MSC治疗潜能的机制是通过MSC分泌细胞保护蛋白组和组织修复作用来促进血管新生、抗炎、抗纤维化作用、促细胞新陈代谢作用，组织修复作用包括 抗凋亡和促有丝分裂作用。细胞保护基因Akt-1Akt-1重组基因的

13、MSC培养上清具有促进肾小管微血管新生、抗肾小管细胞凋亡、提高肾脏功能、提高生存率的作用。AK?蛋白激酶B信号作用通道调控细胞增殖和生长，参与包括细胞凋亡和葡萄糖代谢在内的细胞过程。虽然在其他通道构成部分中也发现了激发突变的现象，而以前却不知道有激发癌症的 AKT点突变。在乳腺癌、结肠癌和卵巢癌中发现一种AKT1基因复发突变（recurring mutation ,生物通编者译），这种突变AKT1基因诱导肿瘤细胞增殖，并帮助癌 细胞抵抗某些治疗剂。AKT1是一种蛋白激酶，在细胞生存、增殖和代谢活动中发挥重要作用。有趣的是，其它调控这些网络的蛋白在肺癌、前列腺癌、结肠癌和脑癌中也有突变现象。 A

14、KT1中的这种突变明显证实 AKT1与癌症形成有关。MSC培养上清通过调节肾脏细胞过表达Lnc2基因来抑制细胞凋亡，同时也提高了细胞生长因子的表达。LncRNAs代表了一大类功能性 RNA分子，它们在人类癌症中起着重要的作 用。MSC治疗大鼠中风试验中，一部分MSC分化为脑神经细胞，凋亡神经细胞数量减少，并伴随bFGF因子水平升高，提示 bFGF与脑保护和修复有关。在大鼠脑中风 MSC治疗中，MSC静脉注射或移植至脑受损缺血部位，引起体内内皮细胞和星形细胞表达生长和营养因子，检测到类胰岛素生长因子（IGF-1 ）、bFGF、EGF、VEGF因子表达水平均较对照组升高。MSC静脉注射或移植至脑受

15、损缺血部位，引起体内内皮细胞和星形细胞表达生长和营养因子。分泌的IGF-1和脑衍生神经营养因子 （BDNF）可以明显降低大鼠长期的认知功能和动作技能的修复。MSC通过旁分泌作用促进创伤愈合部位血管新生。TNF-”是一种促炎性因子。促炎性因子包括IL-13、IL-6、TNF-a、INF-丫、一氧化氮合酶等。MSC移植后，在急性肾损伤大鼠模型中，检测到的抗炎f因子包括IL-10、bFGF、TGF-“、Bcl-2等的上调，促炎性因子 IL-13、TNF-a、INF-丫、一氧化氮合酶的降低。在体外，MSC与受损肾小管细胞共培养可以显著降低TNF-a、IL-13的水平。在体内肺损彳模型中，MSC预处理组

16、与对照组相比血清IL-6、TNF-”、INF-丫水平降低。MSC的抗炎性作用还与 MSC抑制T细胞、NK细胞、B细胞的增殖和抑制中性粒细胞产 生的H2O2。在小鼠心肌炎模型中，MSC移植可以减少心肌层 CD68+细胞的增加和减少单核细胞趋化 蛋白（MCP-1）的表达。在损伤黑质体 AD-MSC移植治疗中，黑质纹状体的功能恢复机制包括：一小部分MSC分化为多巴胺神经细胞，另一种是通过分泌脑源性神经营养因子（BNDF）、神经胶质细胞营养因子（GDNF）和神经生长因子（NGF）来间接调整氧化应激诱导的神经炎。在低氧环境中，MSC释放HGF和IGF-1刺激心脏祖细胞，促进心脏祖细胞（CP。的成熟、增殖

17、和分化。在体外，BM-MSC分泌到培养上清（CM）中的因子促进了神经前体细胞（NPC）的增殖和胶质纤维酸性蛋白（GFAB的表达。在脑脊髓炎中，MSC条件培养上清中关键的治疗因子包括HGF、bFGF、BNDF和PDGEMSC抗纤维化方面，经研究 MSC表达丝氨酸蛋白酶、金属蛋白酶、胶原、丝氨酸蛋白 酶抑制剂等，MSC移植后，心肌梗塞大鼠心脏的 1型和3型胶原表达显著降低， 组织金属蛋白酶抑制 齐ij （TIMP-1）、TGF-3表达显著降低。在肝脏疾病中，BM-MSC可以抑制大鼠肝星形细胞合成胶原，虽然不能使HSC达到静止状态，但是可以调节 HSC的增殖，MSC的这种作用与其旁分泌 TNF-a、

18、IL-10、HGF有关。促血管生成因子： VEGF endothelin内皮素、epiregulin表皮调节素anti-apoptotic （Galectin-3, Smad-5, sRFP-1, and sRFP-4）实验证实，BM-MSC 分泌 IL-6, IL-8,TIMP-2, MCP-1, VEGF, and OPG , UM-MSC 与 BM-MSC分泌的因子相似但不完全相同。MSC分泌的囊泡，在治疗急性肾损伤、急性肺损伤、肺纤维化、心血管疾病等有显著 效果。通过细胞保护作用和促血管生成作用来修复受损器官或组织。MSC分泌的囊泡通过释放促血管生成因子：VEGF, bFGF, and

19、 PDGF ,来修复心肌缺血疾病模型。总结MSC促进组织修复再生功能检测方法：1、检测阳性标记MSC在受损组织中是否存在 （）2、观察受损组织的外观、质地与对照组相比是否有恢复的趋势3、观察统计治疗组与对照组动物的精神状态或存活状态（）4、组织切片观察治疗组受损组织结构、功能细胞分布是否趋于正常（）5、检测受损组织的功能（）是否有所改善6、病理切片观察受损组织周围炎性细胞情况，检测炎性因子（）分泌情况7、受损组织中趋化因子（）的含量8、受损组织中促进组织再生修复的因子（）含量9、检测VEGF的分泌，促进新生血管再生，表现为新生血管密度增加10、MSG泌HGF VEGF TGF-1,促进血管新生

20、和神经细胞生成。11、IGF-112、体外，MSG台疗后，检测受损部位与对照组 TNF-”的含量的比较，提示受损部位 炎性的情况。13、体外检测TNF-a、IL-13的水平，提示 MSC抑制炎症的情况。14、在体内肺损彳模型中， MSC预处理组与对照组相比血清 IL-6、TNF-”、INF-丫水平降低。MSC勺组织修复作用促血管生成因子：MS仍泌的HGF（肝细胞生长因子）T、VEGF血管内皮生长因子）T、TGF-1 （转化生长因子）T、bFGF （成纤维细胞生长因子）3 PDGF （血小板衍生因子）3内皮素（endothelin ） T、表皮调节蛋白（ epiregulin ） T等。抗炎性作

21、用：MSC分泌的抗炎性因子有 IL-10 T 、bFGF T、 TGF- a T、 Bcl-2 T , MSC的抗炎性作用还 表现在抑制T细胞、NK细胞、B细胞的增殖和抑制中性粒细胞产生H2O2。抗纤维化作用：纤维化逆转作用：组织金属蛋白酶抑制剂（TIMP-1） J、TGF-3 J的表达MSC移植后，心肌梗塞大鼠心脏的1型和3型胶原表达显著降低，组织金属蛋白酶抑制剂（TIMP-1）、TGF-3表达显著降低。促细胞分裂增殖的因子：HGF （肝细胞生长因子）T、 IGF-1 （胰岛素样生长因子）T、EGF （上皮细胞生长因子）bFGF （成纤维细胞生长因子）PDGF （血小板衍生因子）T , AK

22、T1是一种蛋白激酶，在细胞生存、增殖和代谢活动中发挥重要作用。抗细胞凋亡作用：MSC分泌的VEGF IGF-1 SDF-1” T具有抗细胞凋亡的作用。Galectin-3 （半乳糖凝集素 3,具有促进和抑制细胞凋亡的双重作用），Smad-5基因、sRFP-1基因、sRFP-4基因、Bcl-2基因；MSC通过调节肾脏细胞过表达的Lnc2基因来抑制细胞凋亡，同时也提高了细胞生长因子的表达。促炎性因子：IL-6 J、TNF-a J、INF-丫 J、IL-1 3 J、一氧化氮合酶 J分泌囊泡/小体：MSC分泌的囊泡，在治疗急性肾损伤、急性肺损伤、肺纤维化、心血管疾病等有显著效果。通过细胞保护作用和促血

23、管生成作用来修复受损器官或组织。MSC分泌的囊泡通过释放促血管生成因子：VEGF、bFGF和PDGF来修复心肌缺血疾病模型。神经营养因子的分泌：颗粒蛋白酶前体和金属蛋白酶 -1 （TIMP-1） T、人分泌型卷曲相关蛋白2（sfrp2） T、IGF-1（胰岛素生长因子）T、脑衍生神经营养因子（BDNF） T、神经胶质细胞营养因子 T （GDNF和神经生长因子T （NGF。MSO泌趋化因子：SDF-1 IL-6 IL-8T、CXCT、MCP-1 T （单核趋化蛋白）、TGF-1 等使免疫细胞 归巢至损伤部位。MSO泌造血因子：IL-8 T、GM-CF6、M-CSF TNF-a TMSC分泌伤口愈

24、合因子：IL-6 T、IL-8 T、TGF-1 MCP-1 T、VEGFf、GM-CSF TIMP-1 T各种适应症中MSC勺组织修复作用在机体正常的组织损伤修复过程中，MSC是一种重要的参与组织再生的细胞库。在组织损伤引起的特殊信号作用下， MSC迁徙至损伤部位，在局部增殖，并依据不同的损伤信 息而沿着不同的途径分化。MSC易于分离培养，体外增殖能力旺盛，因此，MSC是一种实用的组织修复种子细胞。 目前关于MSC的组织再生功能有两种理论： 其一，将体外扩增的M5c移植到组织损伤部位， 在局部微环境作用下，定向分化为某一特定类型功能细胞，直接参与组织损伤修复过程；其二，移植于损伤部位的细胞，分

25、泌多种生物活性物质，包括细胞因子和细胞生长因子等，以 改善组织损伤部位再生微循环，促进宿主组织中残存的干/祖细胞增殖分化，MSC间接参与了组织修复过程。MSC改善组织再生微环境，表现为细胞所分泌的生物活性物质具备的多种功能，包括：（1）趋化周阔的宿主干/祖细胞迁徙至损伤那位；（2）促进干/祖细胞的增殖分化；（3）抑 制受损伤细胞的凋亡；（4）促进毛细血管新生；（5）激活周围细胞金属硫蛋白酶活性，抑制 瘢痕形成；（6）调节免疫细胞功能，抑制炎性反应 。目前，关于MSCfi织再生功能的检测还没有一个明确的标准。在体外检测中，只能通过检测MSO化为受损组织细胞的能力和MSO泌修复组织损伤有关细胞因子

26、、抗炎因子、营养因子等来鉴定MSC勺组织再生功能，这是判定MSCfi织再生功能的基础，但是这样的评判 也存在很大缺陷的， MSC体外的培养环境和在体内微环境中存在很大差别，微环境下细胞 之间的接触作用，损伤细胞释放的因子对 MSC勺刺激作用和趋化彳用等可能都对 MSO泌的 细胞因子种类和剂量有影响。 因此，通过在各种适应症治疗时，对MSCE微环境中的组织再生功能的相关指标进行检测是必要的。已有实验证实，尽管 MSCT以归巢到心肌梗死、肾脏损伤部位，但外源的MSC梗死部位存活率很低甚至不存在。很可能是因为局部微环境条件苛刻，MSC生长需要的条件不足，如炎症，氧压，细胞毒性，胞外基质缺乏等。在肾脏

27、损伤中，外源的MSC植后再受损肾脏部位的数量和比例几乎是微不足道的，但是肾脏的保护作用和功能恢复作用及动物的存活率是显著的，因此外源 MSO化为受损细胞并代替原来的细胞的推测还需要几乎被否定，MSC的旁分泌机制很可能是 MSC台疗效果的关键机制。MSC勺旁分泌机制是通过MSCh泌细胞保护蛋白组和组织修复作用来促进血管新生、抗炎、MS泌的细胞小体对受抗纤维化作用，组织修复作用包括抗凋亡和促有丝分裂作用。此外损组织修复有重要作用。MSC治疗肝硬化模型在CC14诱导的肝硬化模型中，MSC通过抑制肝脏胶原合成、诱导肝脏内源干细胞的分化增殖、抑制CC14引起的肝损伤和炎症、促进肝脏血管再生等作用来改善肝

28、脏病变状况。MSC治疗肝脏纤维化硫代乙酰胺（TAA）诱导的大鼠肝脏纤维化，表达核心蛋白聚糖的腺病毒转染BM-MSC细胞（DCN-MSQ与普通腺病毒转染 BM-MSC细胞（CA-MSC作对比，能够抑制主导肝脏纤维化白T TGF-3 /smad通路，降低肝脏胶原的分布、降低肝脏羟脯氨酸含量，修复肝脏功能，从 而改善大鼠肝脏纤维化。分组：1、TAA诱导的肝脏纤维化大鼠2、TAA诱导的肝脏纤维化大鼠 + DCN-MSC3、TAA诱导的肝脏纤维化大鼠 + CA-MSC4、健康大鼠检测指标包括：1、MSC抑制胶原合成作用：肝病变部位胶原的含量2、促细胞生长作用：HGF、bFGF （成纤维细胞生长因子）T、

29、 PDGF （血小板衍生因子）3、纤维化逆转作用：组织金属蛋白酶抑制剂 （TIMP-1） J、TGF-3 J的表达4、炎性和抗炎性因子检测：IL-6 J、TNF-a J、INF-丫 J、IL-1 3 J、一氧化氮合酶J 、 IL-10T、bFGFT、 TGF-od、 Bcl-2 T , MSC的抗炎性作用还表现在抑制T细胞、NK细胞、B细胞的增殖和抑制中性粒细胞产生H2O2。5、促血管生成作用：HGF（肝细胞生长因子）T、VEGF（血管内皮生长因子）T、 TGF-1 （转化生长因子）T、 bFGF （成纤维细胞生长因子）T、 PDGF （血小板衍生因 子）T、内皮素（endothelin ）

30、T、表皮调节蛋白（ epiregulin ） T等。6、检测输注阳性标记 MS%受损组织中是否存在。7、观察受损组织的外观、质地与对照组相比是否有恢复的趋势。8、观察统计治疗组与对照组动物的精神状态或存活状态。9、组织切片观察治疗组受损组织结构、功能细胞分布是否趋于正常。10、检测受损组织的功能是否有所改善。11、病理切片观察受损组织周围炎性细胞情况，检测炎性因子分泌情况。12、受损组织中趋化因子（）的含量。MSC治疗肾损伤模型在急性肾损伤、慢性肾损伤等动物模型中，MSC通过诱导肾脏内源干细胞的分化增殖、肾小管上皮细胞增殖、抑制肾脏损伤和炎症、促进肾脏血管再生等作用改善肾脏功能。检测指标包括：

31、1、促细胞生长作用：HGF、bFGF （成纤维细胞生长因子）T、PDGF （血小板衍生因子）T2、炎性和抗炎性因子检测：IL-6，、TNF- a，、INF- 丫，、IL-1 、一氧化氮合酶 ，、IL-10T、bFGFT、 TGF-af、 Bcl-2 T , MSC的抗炎性作用还表现在抑制T细胞、NK细胞、B细胞的增殖和抑制中性粒细胞产生H2O2。3、促血管生成作用：HGF（肝细胞生长因子）T、VEGR血管内皮生长因子）T、TGF-1 （转化生长因子）T、bFGF （成纤维细胞生长因子）PDGF （血小板衍生因子）T、内皮素（endothelin ） T、表皮调节蛋白（epiregulin ）

32、T等。4、检测输注阳性标记 MSCB受损组织中是否存在。5、观察受损组织的外观、质地与对照组相比是否有恢复的趋势。6、观察统计治疗组与对照组动物的精神状态或存活状态。7、组织切片观察治疗组受损组织结构、功能细胞分布是否趋于正常。8、检测受损组织的功能是否有所改善。9、病理切片观察受损组织周围炎性细胞情况，检测炎性因子分泌情况。10、受损组织中趋化因子（）的含量。MSC修复坏死胰腺组织造模：处理胰腺组织，造胰腺组织坏色模型：开腹结扎胰腺组织，7-8小时后，胰尾局部组织变黑坏死，周围有炎性细胞浸润。治疗：在胰腺未损伤部位植入胰腺DAPI标记的胰腺MSC细胞。检测指标：1、观察胰腺组织外观是否趋于正

33、常，切片胰岛细胞是否趋于正常；2、DAPI标记的阳性 MSC在胰腺组织是否存在，数量多少；3、治疗组和未治疗组的动物精神状态和成活率对比；4、观察受损组织的外观、质地与对照组相比是否有恢复的趋势。5、组织切片观察治疗组受损组织结构、功能细胞分布是否趋于正常。6、检测受损组织的功能是否有所改善。7、病理切片观察受损组织周围炎性细胞情况，检测炎性因子分泌情况。8、受损组织中趋化因子（）的含量9、促细胞生长作用：HGF、bFGF （成纤维细胞生长因子）T、 PDGF （血小板衍生因子）10、炎性和抗炎性因子检测：IL-6J、TNF-a J、INF-丫 J、IL-1 3 J、一氧化氮合酶J 、IL-1

34、0T、bFGFT、 TGF-af、 Bcl-2 T , MSC的抗炎性作用还表现在抑制T细胞、NK细胞、B细胞的增殖和抑制中性粒细胞产生H2O2。11、促血管生成作用：HGF（肝细胞生长因子）T、VEGF血管内皮生长因子）T、 TGF-1 （转化生长因子）T、 bFGF （成纤维细胞生长因子）T、 PDGF （血小板衍生因 子）T、内皮素（endothelin ） T、表皮调节蛋白（ epiregulin ） T等。MSC用于心血管疾病的治疗在心肌梗塞、心肌缺血性损伤等模型中，MSC的治疗作用表现为保护心肌细胞、促进心脏祖细胞的分化增殖、抑制心脏炎症反应、促进心脏血管生成，促进神经细胞再生、改

35、善 心脏功能。检测指标包括：1、观察心脏组织外观是否趋于正常，切片心肌细胞是否趋于正常；2、移植阳性MSC在心脏受损部位是否存在，数量多少；3、治疗组和未治疗组的动物精神状态和成活率对比；4、观察受损组织的外观、质地与对照组相比是否有恢复的趋势。5、组织切片观察治疗组受损心脏组织结构、功能细胞分布是否趋于正常。6、检测受损心脏组织的功能是否有所改善。检测神经前体细胞（NPC）的增殖胶质纤维酸性蛋白（GFAP的表达。7、病理切片观察受损心脏组织周围炎性细胞情况，检测炎性因子分泌情况。8、受损组织中趋化因子（）的含量。9、促细胞生长作用：HGF、bFGF （成纤维细胞生长因子）3 PDGF （血小

36、板衍生因子）T、IGF-110、炎性和抗炎性因子检测：IL-6J、TNF-a J、INF-丫 J、IL-1 3 J、一氧化氮合酶J 、IL-10 T、bFGFT、 TGF-af、 Bcl-2 T , MSC移植可以减少心肌层 CD68+T细胞的增 加和减少单核细胞趋化蛋白（MCP-1）的表达。11、促血管生成作用：HGF（肝细胞生长因子）T、VEGF血管内皮生长因子）T、 TGF-1 （转化生长因子）T、 bFGF （成纤维细胞生长因子）3 PDGF （血小板衍 生因子）T、内皮素（endothelin ） T、表皮调节蛋白（ epiregulin ） T等。12、神经营养因子的分泌：颗粒蛋白酶前体和金属蛋白酶-1 （TIMP-1 ）、人分泌型卷曲相关蛋白2（sfrp2）、IGF-1 （胰岛素生长因子）、脑衍生神经营养因子（BDNF）、神经胶质细胞营养因子（GDNF）和神经生长因子（NGF）。MSC用于肺纤维化模型在博来霉素诱导的肺纤维化模型中，MSC移植可以抑制肺纤维化，同时MSC产生IL-1受体拮抗剂（一种抗炎性的可溶性因子），减轻博来霉素导致的肺损伤。虽然有一些实验证据，但是目前MSC抑制肺脏纤维化还有争议。在体内肺损彳模型中，MSC预处理组与对照组相比血清IL-6、TNF-a、INF-丫水平降低。1、MSC抑制胶原合成作用：肺病变部位 胶原的含量2、促细胞生长