BSL-2实验室培训课件

1、BSL-2实验室培训一、病原微生物实验室生物安全政策与管理二、新BSL-2实验室操作规范三、紧急预案一、病原微生物实验室生物安全政策与管理二、新BSL-2实验室操作规范三、紧急预案实验室生物安全生物安全（广义）：防范由生物技术开发和应用/或病原微生物重组和操作对生物物种、生态、人类健康可能构成的危险或潜在风险。生物安全（狭义）：是指防止发生病原体或毒素无意中暴露或外泄的防护原则、技术及操作。病原微生物实验室生物安全政策与管理生物安全实验室在研究传染性疾病或微生物时能避免病原体对实验者、公众造成意外伤害和对环境造成污染的实验室。对外：不能对周边环境产生不利影响。对内：必须要对自己的健康负责。病原

2、微生物实验室生物安全政策与管理实验室生物安全防护重要性1951,1965,1976年美国实验室生物安全专家Sulkin和Pike调查5000多个实验室，发现累计相关感染3921例。原因：1）20%的相关感染由设备故障引起的 2）80%以上由工作人员操作失误引起。病原微生物实验室生物安全政策与管理感染案例一 斯维尔德洛夫斯克炭疽菌泄漏事件病原微生物实验室生物安全政策与管理1979年设在叶卡捷琳堡的一个微生物中心的地下试验场发生了炭疽杆菌的泄漏，至1979年4月20日，造成350人发病，45人死亡，214人濒临死亡。1979年到1989年十年间对叶卡捷琳堡的人口统计表明，契卡洛夫区的人口呈明显下降

3、趋势，男女比例严重失调，新生儿中有中枢神经问题的达到80%。皮肤感染消化道感染呼吸道感染感染案例二德国马尔堡病毒实验室感染事件病原微生物实验室生物安全政策与管理在1967年秋，西德马尔堡、法兰克福和南斯拉夫贝尔格莱德的几所医学实验室的工作人员中同时暴发了一种严重出血热，有31人发病，其中25人是直接感染，当中七人死亡。直接染病的人多是因为接触当地实验室内染有马尔堡病的猴子而致病。另外六人是二次感染，他们都是与直接感染的病人有紧密接触。两名医生是在抽血时不慎接触病者血液染病。这次爆发的来源经调查后，发现是来自非洲乌干达一种品种为 Cercopithecus aethiops 的猴子。西德的一家公

4、司入口该批染有病毒的猴子，原意是用来研制小儿麻痹症的疫苗。经粘膜和破损的皮肤传播感染案例三实验室感染SARS事件病原微生物实验室生物安全政策与管理03年9月，新加坡以为27岁的博士后在两个和SARS研究有关的实验室工作时感染了SARS病毒。台湾一位军方人员在实验室感染SARS病毒。04年国家某病毒所发生两例实验人员感染SARS病毒事件。呼吸道感染感染案例四东北农大实验室感染病原微生物实验室生物安全政策与管理2011年3月至5月，该校27名学生及1名教师陆续确诊感染布鲁氏菌病的乙类传染病。主要原因：购买实验山羊，相关教师未要求出具相关检疫合格证明。实验前相关教师未对实验山羊进行现场检疫。指导学生

5、实验过程中，相关教师未能严格要求学生遵守操作规程，采取有效防护等措施，如口罩和手套。皮肤感染消化道感染呼吸道感染2000-2009年实验室获得性感染病原微生物实验室生物安全政策与管理引起实验室获得性感染病例的病原微生物有19种,其中细菌15种,占78.9;病毒4种,占21.1。报道病例83例,其中细菌性病例60例,占72.3;病毒性病例23例,占27.7。感染途径以摄入和吸人性感染为主,分别占32.5和31.3,感染主要原因为意外事故,占47.0.实验室工作人员注重安全意识,遵守安全操作规程,仍是预防控制实验室获得性感染发生的关键。海恩法则每一起严重事故的背后，必然有29次轻微事故和300起未

6、遂先兆以及1000起事故隐患。病原微生物实验室生物安全政策与管理实验室管理混乱会引发事故不断！国际组织和国外的相关法规（一）世界卫生组织（ WHO ）分别在1983年、1993年和2003年编写了实验室生物安全手册。主要内容：生物安全一般原则、不同等级防护实验室安全指南（包括实验室设计、设备、人员培训等）、标准的生物操作技术（包括标准微生物操作技术、感染性样本和材料的包装运输、消毒和突发事件的预案等）。病原微生物实验室生物安全政策与管理病原微生物实验室生物安全政策与管理病原微生物实验室生物安全政策与管理病原微生物实验室生物安全政策与管理Category A “602 package” Labe

7、ls: UN 2814 UN 2900 BiohazardCategory B, “650 package” UN 3373No biohazard label Triple packages病原微生物实验室生物安全政策与管理病原微生物实验室生物安全政策与管理国际组织和国外的相关法规（二）美国国立卫生研究院编写了微生物和生物医学实验室生物安全手册。主要内容：微生物实验室标准操作、实验室设计和安全设备的不同组合，形成14级的实验室生物安全防护等级；并依据微生物对人的危险程度分为四级危险组，在实验室实际操作中加以应用；在实验室三级和四级的设计、感染性微生物的国际运输等问题。法律：中华人民共和国传染

8、病防治法病原微生物实验室生物安全政策与管理我国的法律法规行政法规：病原微生物实验室生物安全管理条例（国务院2004第424号令）；医疗废物管理条例（国务院2003第380号令）病原微生物实验室生物安全管理条例第一章 总则管理机关及其职责实行分类管理、分级管理；实行统一的实验室生物安全标准。第二章 病原微生物的分类和管理 将微生物分为四类；制定人间传染病原微生物名录；病原微生物样本的采集条件；运输条件；保藏条件和管理办法。第三章 实验室的设立与管理实验室认证制度；备案制度；科研项目审批；新技术新方法审批；实验活动审批；实验室制度和档案建立情况。第四章 实验室感染控制专人负责、及时报告、启动预案、

9、认真处理。第五章 监督管理人民政府卫生主管部门、兽医主管部门、环境保护主管部门履行监督管理职责。第六章 法律责任造成传染病传播、流行或者其他严重后果的，由实验室的设立单位对主要负责人、直接负责的主管人员和其他直接责任人员，依法给予撤职、开除的处分；有资格证书的，应当吊销其资格证书；构成犯罪的，依法追究刑事责任。第七章 附则其他我国的法律依据、技术卫生标准病原微生物实验室生物安全政策与管理第一类病原微生物，是指能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物，以及我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物。第二类病原微生物，是指能够引起人类或者动物严重疾病，比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间

10、传播的微生物。第三类病原微生物，是指能够引起人类或者动物疾病，但一般情况下对人、动物或者环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有效治疗和预防措施的微生物。第四类病原微生物，是指在通常情况下不会引起人类或者动物疾病的微生物。第一类、第二类病原微生物统称为高致病性病原微生物。我国的法律依据、技术卫生标准病原微生物实验室生物安全政策与管理感染性物质航空运输规范（GB23240-2009）微生物和生物医学实验室生物安全通用准则（ws 233-2002）人间传染病的病原微生物菌（毒）种保藏机构设置技术规范（ws315-2010）生物安全柜JG170-2005二级生物安全

11、柜YY0569-2011上海市人民政府办公厅转染市交通港口局等三部门进一步规范本市生物试剂运输管理工作意见（沪府办发2012 35号）关于在本市开展病原微生物实验室备案工作的通知（沪卫科教2006 28号）上海市一、二级病原微生物实验室生物安全管理规范 （沪卫科教2006 34号）上海市卫生监督检查病原微生物实验室生物安全政策与管理开展病原微生物实验室生物安全专项检查；区县卫生监督所负责辖区内P1、P2实验室的检查；市卫生监督所负责P3实验室和菌毒种保藏中心检查；对本市P2实验室全覆盖督导检查、整改复查；检查内容：生物安全规章、制度，相关应急预案；菌毒种、生物样品保存，双人双锁实施情况；实验室

12、门禁系统，出入登记情况；个人防护用品穿戴；废弃物处置；高压消毒灭菌仪器使用；生物安全柜使用、维护；样品接收；危害评估；仪器设备有效期等；一、病原微生物实验室生物安全政策与管理二、新BSL-2实验室操作规范三、紧急预案神经所新P2实验室简介新BSL-2实验室操作规范新生命大楼 A2406管理体系新BSL-2实验室操作规范所级中心管理委员会（兼生物安全委员会）实验室负责人实验室安全管理员每日负责巡视BSL-2实验室，确保本实验室的工作在尽可能安全的条件下进行。控制准入权，并保存所有来访者和维护人员的准入登记。对于严重并重复违反本操作规程的准入人员，BSL-2实验室主任要告知所级中心管理委员会（生物

13、安全委员会），并有权撤销该人员的准入权。在紧急情况下出于维护实验室的需要，BSL-2实验室主任可临时关闭BSL-2实验室。制定、维持、监督实验室安全计划，阻止不安全行为或活动的权力，直接向所级中心管理委员会（生物安全委员会）报告。全面负责BLS-2实验室的生物安全工作；主要负责制定及更新本安全手册；审查突发事故应急预案，对事故进行评估，提出处理和改进意见；支持相关规章制度的执行，向管理层提供专业建议，以确保维持高水准的生物安全。负责BSL-2实验室的具体工作的实施，并通过培训确保其他工作人员和实验人员掌握本操作规范。实验室管理人员在日常工作中对BSL-2实验室进行监督管理，对于违反本操作规程的

14、个人和行为当场指正，并向实验室主任报告。每天例行工作。应充分认识和理解所从事工作的风险。 应自觉遵守实验室的管理规定和要求。 在身体状态许可的情况下，应接受实验室的免疫计划和其它的健康管理规定。 应按规定正确使用设施、设备和个体防护装备； 应主动报告可能不适于从事特定任务的个人状态。 不应因人事、经济等任何压力而违反管理规定。 有责任和义务避免因个人原因造成生物安全事件或事故。 如果怀疑个人受到感染，应立即报告。 应主动识别任何危险和不符合规定的工作，并立即报告。 新P2实验室内可操作的病原微生物新BSL-2实验室操作规范慢病毒腺病毒腺相关病毒狂犬病毒（G蛋白缺陷型）准入制度新BSL-2实验室

15、操作规范 申请 培训 开通门禁； 实验前预约（8/）； 使用本人门禁卡进入本实验室； 人员、物品通过专用的通道。实验物品带出实验室时必须保证没有受到污染； 实验所用器皿，耗材，包括细胞株，包装病毒材料需经批准带入本实验室，实验动物不得带入本实验室。非本实验室工作人员、外来合作者、进修和学习人员进入实验室参观学习必须经过相关人员批准，由主管工作人员带领进入实验室。严禁儿童进入BSL-2实验室。准入制度新BSL-2实验室操作规范实验室人员在下列情况进入BSL-2实验室内需经实验室负责人同意： 身体出现开放性损伤； 呼吸道感染或其他导致抵抗力下降的情况； 正在使用免疫抑制剂或免疫耐受； 妊娠期人员；

16、 连续工作或者其他原因导致的疲劳状态。 预约网站新BSL-2实验室操作规范预约规则新BSL-2实验室操作规范预约超速离心机时必须预约同等时段的生物安全柜1或2或Rabies房间；每天早上5点-6点不能预约P2实验室。预约时注意红蓝笔的区别，尽量使用蓝笔预约。因为，红笔预约若与蓝笔预约时段和项目一致将删除蓝笔预约项，并且系统会发信通知蓝笔预约方。而蓝笔不能取消红笔预约。红笔预约的权限为一个星期一次。术语 一级屏障： 操作者和被操作对象之间的隔离 二级屏障：生物安全实验室和外部环境的隔离 主实验室：是生物安全实验室中污染风险最高的房间，通常指生物安全柜所在的房间 污染区： 生物安全实验室中被致病因

17、子污染风险最高的区域 清洁区：生物安全实验室中正常情况下无被致病因子污染的区域 半污染区：生物安全实验室中具有被致病因子污染风险的区域，是污染区和清洁区之间的过渡区域。人物流的进入新BSL-2实验室操作规范BSL-2实验室人员进出入登记表上登记日期、姓名、进入时间以及是否使用超速离心机。换下自己的外套。一次性口罩、帽子、鞋套（一更）一次性乳胶手套（一更）实验服（二更）一次性隔离服（二更） 第二副一次性乳胶手套（实验区）人员进入流程新BSL-2实验室操作规范个人生物安全防护装备所涉及的防护部位：1. 眼睛2. 头面部3. 躯体4. 手5. 足防护装备：1. 眼镜（安全镜、护目镜）2. 口罩、帽子

18、3. 防护衣4. 手套5. 鞋套一次性口罩及帽子的佩戴头发必须完全包裹在帽子内，长发的人员应将头发盘在脑后，以防止头发接触到污染物佩戴时必须完全罩住鼻、口及下巴，调整金属鼻夹的形状，保持口罩与面部紧密贴合。个人防护新BSL-2实验室操作规范个人防护新BSL-2实验室操作规范隔离衣穿脱解开颈部和腰部的系带；将隔离衣从颈处和肩部处脱下；将外面污染面卷向里面；将其折叠或卷成包裹状；丢弃在医疗废物箱内。穿隔离衣过程中避免污染衣领、面部、帽子和清洁面； 穿好隔离衣后不得进入清洁区，避免接触清洁物品。个人防护新BSL-2实验室操作规范切记！一次性手套不得重复使用！不得戴着手套离开实验室区域！避免不必要的触

19、摸！摘除外层手套，丢弃于垃圾桶内。做好仪器使用记录。离开实验区须核实所有未设定继续运转的设备是否已关闭，所有实验物品放回原位。在缓冲间内脱去一次性隔离服。在二更内脱去实验服，把一次性口罩、帽子、鞋套、手套等丢入专用的黄色垃圾桶中。在一更内消毒手部，并且在BSL-2实验室人员进出入登记表上登记离开时间，关闭照明灯，然后离开BSL-2实验室。狂犬病毒实验人员，在离开狂犬病毒专用房间后，应额外定时对该房间进行紫外照射1小时。人员离开流程新BSL-2实验室操作规范禁止在BSL-2实验室内新BSL-2实验室操作规范进出BSL-2实验室，必须随手迅速关闭每一道门，禁止同时打开内外两门，以保证室内处于正常的

20、压力范围。在实验室工作时，任何时候都必须穿实验服。严禁戴着可能已被污染的手套的手触摸门把手、电灯开关、电话和其他公共设施。严禁穿实验防护服离开实验室。（如去餐厅，图书馆，休息室和卫生间等）其他进出入注意事项新BSL-2实验室操作规范物品进入流程新BSL-2实验室操作规范刷卡进入外准备间，打开传递窗，放入实验物品。实验物品需经过消毒后才可带入实验区。根据物品的性质，将物品表面喷洒75%乙醇消毒后放入后，并且打开传递窗门旁边的紫外灯开关进行紫外消毒。若物品不能照射紫外（如细胞和培养基等），必须表面喷洒75%乙醇消毒后放入传递窗。待人进入实验室后，关闭传递窗的紫外灯，开门取出物品。实验结束后，所有实

21、验废弃物不准带离实验室，放入专用的垃圾桶后待工作人员处理。实验物品带离实验室，必须经由传递窗传出。带出的物品必须经过消毒处理，可在传递窗经紫外消毒后带出，或者在表面喷洒75%乙醇消毒后，放入传递窗带出。实验室职业暴露可发生在实验室工作或逗留的任何时间。实验室职业暴露感染的途径新BSL-2实验室操作规范呼吸道吸入经口摄入针刺或锐器刺伤皮肤、粘膜感染染严防气溶胶的产生新BSL-2实验室操作规范注射针头离心震荡混匀超声破碎搅拌冷冻干燥枪头吹打相应措施（一）新BSL-2实验室操作规范预先确定实验操作中可能产生气溶胶的实验步骤以及处理病原微生物的感染性材料时是否使用可能产生病原微生物的仪器。禁止用嘴吸液

22、；必须使用辅助移液装置。感染性物质不能使用移液管反复吹吸混合。严禁向含有感染性物质的溶液中吹入气体。移液管应当在消毒剂中浸泡适当时间后再进行处理。离心要在防气溶胶的转头中进行。转子或套管只允许在生物安全柜中打开、装载和卸载。任何有活性的第三类病原体的操作都应在二级生物安全柜中进行，遵守双层防护原则。开放式的实验台不允许操作此类病原体。实验结束后，清洁用过的工作台面和材料，必须用75%乙醇擦拭消毒。紫外消毒生物安全柜台面或房间。任何情况下书籍和实验记录本都不允许带入或带出BSL-2实验室。养成随手关门的习惯，以保证实验区及缓冲区的压差，避免病原微生物外泄。谨防刺伤割伤新BSL-2实验室操作规范相

23、应措施（二）新BSL-2实验室操作规范在BSL-2实验室内实验过程中应使用塑料耗材，玻璃制品只有实验步骤中为必需的方可使用。注射器、针头和刀片只有在绝对需要时才可使用。用过的针头或刀片必须放到专用的利器盒中。碎玻璃或其他锐器，则要使用镊子或硬的厚纸板来收集处理过的物品，并将它们置于可防刺透的容器中以待处理。切勿直接用手进行操作。其他实验操作注意事项新BSL-2实验室操作规范实验室应保持干净整洁。只有当前正在使用的仪器和物品才可放在实验台上。耗材应贮存在缓冲间处指定的架子上或者柜子中，随用随取。实验过程中产生的含有病毒的废液即可弃于废液瓶中，不含病毒的废液可通过吸引器吸走。废液瓶中的溶液切记过满

24、不可超过2/3，及时加15%的84消毒液处理半小时或过夜后，倾倒于废水槽中。实验过程中产生的含病毒固体废弃物置于安全柜内的医废盒中，尖锐物品弃于利器盒中，不含病毒的固体废弃物可弃于安全柜下方的废纸篓中。病毒废液15% 84 消毒液病毒固体废物利器盒生物安全柜新BSL-2实验室操作规范Thermo 1300 A2型气流走向定向气流：风幕HEPA滤器（高效微粒空气过滤器）：分离能力MPPS：99.995%对0.3微米直径颗粒的分离能力：99.999%保证排出气体和内循环气体的无菌状态。不能用于挥发性有毒的化学物质和放射性物质的实验操作。生物安全柜操作规范（一）新BSL-2实验室操作规范 生物安全柜

25、运行正常时才能使用。 操作者不应反复移出和伸进手臂以免干扰气流。 任何情况下，实验人员不应把头探入生物安全柜内。 安全柜内不能使用本生灯或酒精灯，否则燃烧产生的热量会干扰气流并可能损坏过滤器。生物安全柜操作规范（二）新BSL-2实验室操作规范洁净区半污染区污染区 物品按照从洁净区到污染区的方向摆放。 内外通风口不能被纸、仪器设备或者其他物品挡住。 实验前后都要用75%的乙醇清洁台面，实验完毕后照射紫外半小时。违纪处理新BSL-2实验室操作规范 不遵守更衣程序。如不穿专门的防护服和鞋子，以及一直不戴呼吸保护装置。 无视实验室和个人卫生的相关规定。如在实验室内吃东西或喝饮料，每次使用生物安全柜后不

26、进行消毒。 不遵守来访者的规定。如在未经BSL-2实验室主任许可的情况下，让朋友、家人或服务人员进入实验室。使来访者脱离监督留在实验室也属于此范畴。 不及时向管理人员或实验室主任报告意外事故或感染性材料的溢出。 在因安全原因关闭实验室期间进入实验室。 操作BSL-3或BSL-4级别的病原体微生物实验，或者在本所上海市病原微生物实验室备案凭证上的病原微生物范围之外的其他病原微生物实验。 严重违反生物安全标准操作规程，包括但不限于以上情况。 一、病原微生物实验室生物安全政策与管理二、新BSL-2实验室操作规范三、紧急预案紧急预案P2实验室意外事故实验室活动事故病毒溢出病毒接触皮肤或粘膜自然灾害、其

27、他人为因素火灾停电紧急预案（墙上）紧急联系人：施霖宇 54921900；P2实验室管理人员；门卫 54921723。胆大心细，遇事不慌！紧急预案各类病毒所对应的消毒剂慢病毒腺病毒70%酒精、1%次氯酸钠、2%戊二醛、甲醛等1%次氯酸钠、2%戊二醛、0.25%十二烷基硫酸钠、5%酚等乙醇对其无效！腺相关病毒狂犬病毒（G蛋白缺陷型）1%的次氯酸钠、2%戊二醛、0.25%十二烷基硫酸钠等乙醇对其无效！日光、紫外线、超声波、甲醛、升汞季胺类化合物(如新洁尔灭)、脂溶剂、0.01%碘酒、70%酒精等紧急预案各类病毒所对应的消毒剂紧急预案小范围病毒液体泼溅（1ml）根据感染物质的特性选用合适的消毒剂，倾倒

28、于纸巾上，并立即覆盖周围区域。使用消毒剂时，从溢出区域的外围开始，朝向中心进行处理。作用适当时间后（例如30 min），将所处理物质清理掉。若使用含氯的消毒剂时，需要再使用70%的乙醇将台面擦干净，以免造成对于台面的腐蚀。最后将污染材料置于防漏、防穿透的废弃物处理盒中，最后高压灭菌。如果含有碎玻璃或其他锐器，则要使用镊子或硬的厚纸板来收集处理过的物品，并将它们置于可防刺透的容器中以待处理。切勿直接用手进行操作。工作面消毒后应更换手套，并且无论是摘下手套还是更换手套都要洗手。紧急预案生物安全柜内大范围病毒液体泼溅生物安全柜内发生较大范围的病毒溢洒，停止实验，立即通知管理员。液体会通过生物安全柜前

29、面或后面的格栅流到下面去。生物安全柜内所有的物品都应该进行表面消毒后拿出生物安全柜。确保生物安全柜的排水阀被关闭后，将消毒液倒在工作台面上，使液体通过格栅留到排水盘内。所有接触过溢出物品的材料都要进过消毒或高压灭菌处理。生物安全柜内部进行全面的消毒，并且紫外照射1小时。实验室发生大范围病毒泄露在生物安全柜外的事故，请立即联系管理员，紧急疏散所有在BSL-2的实验人员。联系方式见实验室内和大门口。管理人员立即关闭实验室30分钟后进行消毒处理，并在门口设置严禁入内的警示标语。管理人员将对污染区域用纸巾或棉垫将污染液吸干，并且15%的84液从外向中心湿拖，保持30分钟。所有污染的物品均丢弃至黄色垃圾

30、袋中。紫外照射房间1小时后，再开放。在成功消毒后，对所级中心管理委员会(兼生物安全委员会)进行事故报告，并且告知关于溢出区域的污染情况及清除污染工作过程。紧急预案生物安全柜外大范围病毒液体泼溅紧急预案病毒溢出污染离心机在离心病毒时，要使用密封管或者密封的转子或安全桶。在使用前要确保所有的O型环或垫圈都在位并状态良好。在离心结束后，打开离心机盖前要先等候5分钟。遇打开盖子后发现离心机已经被污染，则应重新小心盖好盖子，切断离心机电源，通知工作人员。人员离开实验室至少60分钟，让气溶胶沉降，并且在实验室门口张贴警告标示。开启实验室紫外灯60分钟。然后工作人员戴N95口罩，用镊子和酒精擦拭污染部位。将转子或安全桶转移到生物安全柜中，用70%乙醇或者有效的非腐蚀性消毒剂浸泡一小时。处理完毕后，脱弃外层手套和一次性防护装备，高压消毒。再开紫外照射60分钟。填写意外事故登记表。紧急预案病毒液体接触皮肤粘膜脱掉污染的手套，立即用含75%乙醇消毒液或碘酒的棉球擦拭，切不可用84消毒液，以免灼伤皮肤。并且用大量清水冲洗，至少15分钟。如果遇到针头扎伤或者刀片割伤时，第一时间处理伤口，应立即用力捏住受伤部位，向离心方向挤出伤口的血液，不可来回挤压，同时用流动水清洗伤口，至少