核酸诊断试剂的质控和评价ppt课件

1、体外诊断试剂的临床研讨 .体外诊断试剂的种类化学或生化检测试剂免疫学检测试剂抗原检测抗体检测核酸检测试剂核酸杂交技术核酸扩增技术其他试剂.核酸扩增技术目的片段的扩增聚合酶链反响PCR以转录为根底的扩增技术TAS链取代的扩增技术SDA探针的扩增衔接扩增反响LAR以FEN-1 DNA聚合酶为根底的扩增循环探针信号扩增.免疫检测的原理直接法间接法.免疫反响中按标志物分类同位素标志的放射免疫法酶标志的酶联免疫法生物素标志化学发光物质标志的化学发光法荧光素标志时间分辨法其他标志物.临床研讨的意义以及目的临床前样品虽有代表性，但数量毕竟有限并不能完全代表临床情况经过临床实验对临床前制定的各项目的进展修正可

2、以发现或预测在实践运用中遇到的问题，在阐明书中提示用户留意.临床研讨的根本要求伦理思索普通样品特殊样品对研讨对象严密临床前研讨结果.对临床研讨单位以及人员的要求从事相应的任务具有相应的技术人员有相应的仪器设备 假设试剂对仪器无特殊要求，那么应选择不同品牌或不同型号有不同专业人员参与至少两家省级单位对实施实验单位的才干进展评价 指综合才干包括检测才干、仪器设备和人员等,主要检测盲样，符合要求这方能参与.对照方法或试剂的要求新诊断试剂疾病病症以及临床诊断相关试剂研讨对象的追踪随访疾病的判别规范已有同类产品的试剂 可选择同类试剂; 假设评价试剂所用的原料为基因工程产品，运用非基因工程 原料制备的试剂

3、进展评价；对结果不一致样品的处置 .临床样品的选择人群: 根据试剂的顺应症选择不同的人群样品: 应为自然人群，尚未用同类试剂进展筛查过选择不同地域: 代表被测物的不同流行率，代表被测物的不同基因型或血清型疾病的时期: 样品的数量: .检测方法盲法平行检测结果不一致样品的进一步分析.诊断试剂的临床评价目的 灵敏度 Sensitivity：在阳性样品中检出阳性样品的百分比特异性Specificity：在阴性样品中检出阴性样品的百分比样品分布 (eg. STDEV; ) Suitability of cut-off阴性预期值 (NPV)：假设样品没有反响，那么不含检测物的能够性阳性预期值 (PPV)

4、：假设样品有反响，那么含检测物体的能够性反复性Reproducibility准确性Accuracy) 准确性 (Precision.灵敏度定义：试剂的检测限制方法：检测一定数量的阴性样品，计算均值和规范差 均值和规范差，临界值等于均值加上2个规范差意义：在临界值以上的样品有95%为真阳性 临界值的评价：检测一系列正常人群、非正常人群和特殊人群对临界值进展核对表示方法：以量值表示如ng，单位，CFU/ml，PFU/ml，拷贝数等；以稀释度表示 .影响灵敏度的要素特殊疾病 有一些特殊的病人，其代谢异常能够影响标志物的检测干扰物质或抑制物质 可以来自与病人药物；也可来自于样品的处置过程反复冻融，溶血

5、等；或样品本身存在抑制物等样品基因型和血清型的影响 有些被测物存在多种基因型或血清型，假设原资料没有广谱性，那么可影响灵敏度试剂的灰区： 对特殊的试剂要制定灰区，如FDA要求HCV抗体试剂临界值以上均为灰区，对灰区样品要加倍重试.核酸检测抑制物的作用原理核酸扩增需求酶的参与酶发扬作用需求辅助因子以及特殊的条件辅助因子与酶的特殊部位物理结合后发生反响任何结合辅助因子、改动环境或阻止酶与辅助因子特异结合的物质均抑制反响.核酸扩增常见的抑制物血红素及其代谢物影响DNA聚合酶的反响，不同来源的DNA聚合酶受影响程度不同痰中的酸性多聚糖或糖蛋白均影响DNA聚合酶的反响脑脊液和尿中能够含有抑制物，但详细物

6、质不明确粪便中的胆汁盐是PCR反响的强抑制剂肝素可与DNA聚合酶结合，对不同的酶抑制程度不同核酸提取试剂中的某些物质具有抑制造用：EDTA，SDS，盐酸胍等.内标的种类未修饰性的内标异源性内标修饰性的内标.特异性定义：主要指假阳性的检出情况评价方法：主要是经过检测部分样品，或特殊样品尤其是性质相近的标志物如不同基因型或血清型样品，分析出现假阳性的情况；而且分析时要留意在不同量时的特异性.呵斥非特异性的要素原料：主要纯度不够，原料本身存在非特异反响 物质反响方式：如孵育时间缩短非特异反响可提高 3-4倍，非常短时可高达10倍样品中的干扰物质：病人本身：如本身免疫性疾病高免疫球蛋白血症等，黄疸类、

7、溶血类和高脂类病人病人运用特殊药物样品处置过程：如不同抗凝剂，不同试管，某些 化学或去污剂以及样品反复冻融等要素.核酸检测中呵斥非特异性的要素交叉反响：主要是引物序列与被测物中序列存在一定程度的同源性样品之间的污染：气溶胶中含有目的微生物，对照的污染等扩增产物的污染：扩增产物聚集在器皿、台面、设备以及通风设备上等呵斥污染.污染的处置酶的灭活UNG 主要用于灭活产物光化学处置 用可溶性psoralen的衍生物处置，在用长紫外照射 即可灭活产物、也可减少样品的污染化学处置方法 用于外表的处置 10%次氯酸钠 紫外照射物理的: 公用移液器、一次性试管架、紫外灯、PCR任务罩、滤芯吸嘴。.样品典型的正

8、态分布NegativepopulationPositivepopulationFrequency of observations0100110Percentage of maximum signal (log)Cut-off.特异性与值关系的分析企业假阳性特异性（%）值金豪万泰GBI耀华科华丽珠华美新创普生绿科中山理利Murex梅里埃 32510327151822114 99.7099.8099.4999.9010099.7099.8099.2998.4899.9099.1997.7798.8899.59 -3.985-3.688-3.423-3.364-3.687-2.741-4.337-3

9、.636-2.261-3.060-2.778-1.774-3.551-4.311 样品库有985份样品。特异性与其“值相关性系数为0.691,具有显著的统计学意义(P=0.004 . d - d+ 值的计算以及意义 delta = d / SDcut-offlog10 OD/COXX 0FrequencyOD/CO data must be transformed to log10 values before the analysis.数值的计算样品的实际状态 + - +检测结果 - A B C D A+B C+D A+C B+D灵敏度= A/A+C);特异性=D/B+D阳性预期值:1)简单的

10、计算方法即：PPV=A/A+B 可以给出一个大约的数值; 2)准确的计算方法即：PPV= 流行率敏感性/流行率敏感性+1-流 行率1-特异性)阴性预期值:1)简单的计算方法即：NPV=D/C+D 可以给出一个大约的数值 2)准确的计算方法即：NPV=(1- 流行率特异性/1-流行率 特异性 + 流行率1-敏感性) .准确性(Precision)作用：评价试剂的随机误差经过反复检测某一或某些特定样品并分析其一致性，通常以变异系数或相对规范误来表示样品的要求：最好应含有高、中、低三类每一类样品至少检测4次，实践上检测10次或10次以上.准确性accuracy)主要评价试剂的系统误差，反映样品的检测值和真实值的一致性表示方法： 偏向%=检测值-真实值X100/真实值评价方法： 1.在某一样品中加上知量的检测物反复检测，计算检测值与预期值的偏向 2.检测知量的参考品，计算检丈量与标化量的偏向.定量范围定义：可以给出准确量值的范围建立的方法：主要对系列稀释样品的反复检测 制定的定量曲线：线性或非线性要求：对定量范围的上限和下限样品进展检测 时，其准确性仍能符合要求.反复性Repr