发热患者血检疟原虫血片制作及染色过程回顾性分析

1、2011年发热患者血检疟原虫血片制作及染色过程回顾性分析疟疾是由疟原虫寄生于人体、经蚊传播的寄生虫病，临床表现以周期性发冷、发热、出汗和脾大、贫血为特征。为按期实现本县消除疟疾任务目标，落实好各项防治措施，根据山东省全球基金疟疾项目两年工作计划和山东省消除疟疾实施方案的要求，结合本县实际防控，制定了具体的技术方案，对全县各医疗卫生单位的检验人员进行了全员培训，现将血片制作及染色过程中的注意事项总结如下。血片制作之前，一定要将玻片清洗干净，玻片的清洁与否影响血片的质量。新载玻片常有游离碱质，应用清洗液或10%盐酸或铬酸洗液浸泡24h，然后再彻底清洗，晾干，最后用干净柔软的棉巾将玻片擦净晾干。已用

2、过的载玻片应先浸泡于洗涤剂溶液中12d,或浸泡于煮沸的5%巴皂水1h左右，再移到新配置的洗涤剂溶液中12h,再用热水将肥皂和血膜洗去，用清水反复冲洗，然后擦干或烤干备用。将血片分为6等份，第1、2格贴标签及编号备用，厚血膜涂在第3格中央，薄血膜涂在第4格前缘至第6格中部。用推片的左下角，从取血部位刮取45以血量，使血滴与平置的载玻片接触，用推片的一角将血由内向外旋转24圈，涂成厚薄均匀，直径为0.81.0cm左右的圆形厚血膜，过厚易于脱落，过薄达不到检出率的要求。制薄血膜时，用推片一端边缘的中点，从取血部位取11.5以血量，使血滴与平置的载玻片接触，待血液沿推片边缘展开约2cm长度时（玻片宽度

3、为2.5cm，即两边稍留一点），使推片与载玻片呈3045,均匀而迅速的轻轻从右向左推成舌状薄膜，制成的薄血膜应在玻片上形成平铺的血细胞，细胞之间互相接触而不相互重叠，每张载玻片上分别做1个薄血膜和1个厚血膜。至此，1份完整的血检疟原虫的血片制作完成。薄血膜中疟原虫形态完整，被感染红细胞未被破坏，容易识别和鉴别虫种，但原虫密度低时容易漏检。厚血膜由于原虫集中易检获，检出率是薄血膜的1525倍，但制片过程中红细胞溶解，原虫形态有所改变，虫种鉴别较困难。将制作好的血片放在阴凉干燥处自然晾干，室温大约在2530c左右，干燥4h左右后，用甲醇固定薄血膜，厚血膜端稍高于薄血膜端，让甲醇从薄血膜流下，让薄血

4、膜自然晾干。甲醇固定完薄血膜后，再对厚血膜进行溶血。用蒸储水23滴，均匀覆盖在厚血膜上12min,滴蒸储水时要轻轻的滴，待厚血膜中央的红色随水晃动时，轻轻冲洗去厚血膜上的蒸馏水，待厚血膜自然干燥后染色。夏天标本尽可能在2448h内固定染色，冬天也不能超过72h。放置时间越久，血膜越不易溶血脱色，染色效果也差。吉氏染液的配置取吉氏粉10g，甘油500ml，将吉姆萨粉10g置于研钵中，加入少量甘油小心充分研磨，溶解缓慢，应边加边磨，至500ml甘油加完研磨均匀为止。然后倒入1000ml的容量瓶（或有塞玻璃瓶中）中。每次加入少量甲醇至研钵中，多次洗涤研钵中的残留液，至洗净为止，洗液均并入容量瓶中。最

5、后加全部剩余甲醇正好稀释至1000ml刻度，塞紧瓶塞，充分摇匀，置于5560c水浴中或温箱内24h,或室温内35d。期间经常用力摇动此溶液几分钟。然后可储存至玻璃瓶中塞紧备用。伊红在水溶液中遇到美兰或天青即可互相化合而产生沉淀，从而失去染色能力，因此，吉氏母液绝对不能进水。5将染色储备液（母液）加入蒸储水作1:201:15稀释（取吉氏母液12滴，加中性蒸储水1030滴）混合均匀后，将适量染液覆盖厚薄血膜，染色2030min,轻轻漂洗掉染液即可。然后将染色后的玻片用清水冲洗干净后，将它放在阴凉干燥处晾干即可。至此，一张完整的合格的血片制作完成。6血片染色好坏除了玻片是否清洁，血片制作质量和染色技术等有关外，还受到以下几个因素的影响。6.1染料和溶剂的质量以及染液的新旧。必须用分析纯的甲醇和中性甘油，而且配置时所用的器具必须干净而无水分。如果试剂不纯，常使配置的染液偏酸或偏碱而影响染色效果。新配置的染液染色效果较差，染液存放时间越长，染色力越强。盛放染液的瓶子应加塞密闭，以防吸潮而影响染液质量。6.2染液的稀释浓度及稀释后使用时间。染液的浓度高，则着色快而深，颜色常偏碱。染液浓度低，则着色慢而浅，颜色偏酸。稀释后的溶液必须当时使用，一般在30min内染色力最强。经过对发热患者进行涂片镜检，也得出了很多，对血片制作染色过程中的温度、染液浓度、染色时间的长短、及染液浓度的配制和时间的相