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文档简介

1、羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁

2、芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅

3、肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀

4、芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄

5、腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈

6、羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃

7、膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿

8、肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄

9、艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈

10、膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂

11、羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇

12、膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁

13、肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈

14、芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂

15、肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆

16、羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁

17、膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅

18、肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿

19、芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆

20、肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀

21、羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅

22、膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿

23、羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃

24、节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇

25、肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂

26、莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿

27、膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄袁肄蒈蚆肇羀蒇蝿袀芈蒆蒈蚃膄蒅蚁袈膀蒄螃螁肆蒃蒃羆羂蒂薅蝿芁蒂蚇羅膇薁螀螇肃薀葿羃

28、罿蕿薂螆芈薈螄羁芄薇袆袄腿薆薆聿肅膃蚈袂羁膂螁肈芀膁蒀袁膆芀薂肆肂芀蚅衿羈艿袇蚂莇芈薇羇芃芇虿螀腿芆螁羅肅芅蒁螈羁芄薃羄艿莄蚆螇膅莃螈羂肁莂薈螅肇莁蚀肀羃莀螂袃节荿蒂聿膈莈薄 细胞生物学讲义精华版 细胞生物学 学 习 方 法 细胞生物学课程是生命科学的四大基础学科之一 从显微、超微和分子三个层次来认识细胞的结构与 功能 将分子生物学、生物化学、遗传学、生理学等课程知识与细胞生物学课程中讲到的坚持知识的真知来源于实验室 时刻注意培养自主学习能力、利用各种学习资源的能力、提高学习效率和利用时间的能力 提高英文水平,紧跟世界学科发展第一章 绪论第一节细胞生物学研究的生命体是多层次、非线性、多侧面的复

29、杂结构体系, 动的基本单位,有了细胞才有完整的生命活动。 子水平)上以研究细胞结构与功能、细胞增殖、分化、衰老与凋亡、细胞信号传递、真核细胞基因表达与调控、细胞起源与进化等为主要内容。核心问题是将遗传与发育在细胞水平上结合起来。二、细胞生物学的主要研究内容细胞结构与功能、细胞重要生命活动:细胞核、染色体以及基因表达的研究生物膜与细胞器的研究细胞骨架体系的研究细胞增殖及其调控细胞分化及其调控细胞的衰老与凋亡细胞的起源与进化细胞工程三、当前细胞生物学研究的总趋势与重点领域(21世纪细胞生物学发展趋势)细胞生物学与分子生物学(包括分子遗传学与生物化学) 相互渗透与交融是总的发展趋势。1、“一切生物学

30、的关键问题必须在细胞中找寻”细胞是一切生命活动结构与功能的基本单位。2、细胞生物学研究的核心内容:遗传与发育的关系问题,两者的关系是,遗传在发育过程中实现,发育又以遗传为基础。3、细胞生物学的主要发展趋势:用分子生物学及其它相关学科的方法,深入研究真核细胞基因表达的调节和控制,以期从根本上揭示遗传与发育的关系、细胞衰老、死亡及癌变的机理等基本的生物学问题,为生物工程的广泛应用提供理论依据。4、两个基本点:一是基因与基因产物如何控制细胞的生命活动,包括细胞内外信号是如何传递的;二是基因表达产物蛋白质如何构建和装配成细胞的结构,并使细胞正常的生命活动得以进行。5、蛋白质组学:生命科学的研究已经进入

31、后基因组时代,随着一大批模式生物基因组结构的阐明,研究的重心将回归到在细胞的水平研究蛋白质的结构与功能,即蛋白质组学的研究,同时对糖类的研究将提升到新的高度。基因、细胞到发育将是贯穿21世纪生命科学研究的一条主线。真核细胞基因组结构及其功能调控是未来分子细胞生物学研究的核心问题。 结构基因组计划的主要细胞学与细胞生物学发展简史一、细胞的发现1665年:Robert Hooke(英国物理学家)二、细胞学说的建立及其意义德国植物学家施莱登(M.J.Schleiden),德国动物学家施旺(M.J.Schwann)共同提出 细胞学说:一切植物、动物都是由细胞组成的,细胞是一切动植物体的基本单位三、细胞

32、学的经典时期1、原生质理论的提出1840年普金耶(Pukinje)和冯.莫尔(Von Mohl)首次将动物、植物细胞的内含物称为原生质。1861 年舒尔策(Max Schultze)提出了原生质理论,认为有机体的组织单位是一小团原生质,这种物质在一般有机体中是相似的。1880 年Hanstein 提出原生质体的概念,因此细胞的最后概念就变成由细胞膜包围的一团原生质,分化为细胞核与细胞质。此时这一名词显然比cell(细胞、小室)更确切。2、细胞分裂的研究1881 年Remak 发现鸡胚血细胞的直接分裂,其后Flemming 在动物细胞中,Strasburger 在植物细胞中发现有丝分裂(mito

33、sis),并证实有丝分裂的实质是核内丝状物(染色体)的形成及其向两个子细胞的平均分配。1883 年Van Beneden 与1886 年 Strasburger 分别在动物与植物细胞中发现减数分裂,至此发现了细胞分裂的主要类型。3、细胞器的发现1883年Van Beneden 和Boveri 发现中心体。1884年1894 年Altmann 发现了线粒体,Golgi 发现了高尔基体。四、实验细胞学与细胞学的分支及其发展细胞遗传学的发展细胞生理学的研究细胞化学(一) 细胞遗传学的发展1876 年O.Hertwig 发现了动物的受精现象。1883 年Van Beneden 发现了蛔虫的卵和精子的染

34、色体只有体细胞的一半。1888 年Strasburger 1893 年Overton 等在植物体也发现了受精现象,并证明生殖细胞的染色体也比体细胞少一半。1900 年孟德尔在34 年前发表的遗传法则被重新发现。1905 年Wilson 发现性别与染色体的关系。魏斯曼(Weissman)推测遗传单位有序地排列在染色体上。随后,德国的Borveri 与美国的Sutton不谋而合地提出遗传的染色体学说。 1910 年摩尔根(Morgan)做了大量的实验遗传学工作,证明基因是决定遗传性状的基本单位,而且直线排列在染色体上,建立了基因学说。(二) 细胞生理学的研究1909 年创立了组织培养技术,为研究细

35、胞生理学开辟了一条重要途径。1943年用高速离心机从活细胞内把核和各种细胞器,如线粒体、叶绿体分离出来,分别研究它们的生理活性细胞生理学主要是研究细胞对其周围环境的反应、细胞生长与繁殖的机制,细胞从环境中摄取营养的能力,机体代谢功能与其复制方法,细胞的兴奋性、收缩性、分泌和细胞活动的其他表现机制,生物膜的主动运输和能量传递与生物电等。物质跨膜运输与分选、信号跨膜转导与细胞内信号传递等也是当前研究的热点之一。(三)细胞化学1924 年福尔根(Feulgen)等首先用Feulgen 反应法专门作为脱氧核糖核酸(DNA)的定性方法。1940年Brahcet 用甲基绿派洛宁染色方法来测定细胞中的DNA

36、 与RNA。1936 年、1940 年Casperson 用紫外光显微分光光度法测定DNA 在细胞中的含量,并认为蛋白 质的合成可能与RNA 有关。当前细胞组分分离技术、放射自显影术和超微量分析等方法的广泛应用,对细胞细胞的统一性与多样性一、细胞是生命活动的基本单位(一)一切有机体都由细胞构成,细胞是构成有机体的基本单位(二)细胞具有独立的、有序的、自控代谢体系,细胞是代谢与功能的基本单位(三)细胞是有机体生长与发育的基础(四)细胞是遗传的基本单位,细胞具有遗传的全能性(五)没有细胞就没有完整的生命(六)关于细胞概念的一些新思考二、细胞的基本共性1.所有细胞都有相似的化学组成2.脂-蛋白体系的

37、生物膜3.DNA-RNA的遗传装置4.蛋白质合成的机器-核糖体5.一分为二的分裂方式第二节 原核细胞与古细胞 一、最小、最简单的细胞支原体支原体的特征:1支原体具有典型的细胞膜。2作为遗传信息的载体是一个环状的双螺旋DNA。3MRNA 与核糖体结合为多聚核糖体,指导合成约700 多种蛋白。4 是以一分为二的方式分裂繁殖。这此特征与作为非细胞形态的病毒是根本不相同的。 5支原体的体积很小,直径一般是0.1-0.3um。仅为细菌的十分之一。6很多支原体能寄生在细胞内繁殖。7支原体具有多形态性。因为它没有细胞壁,形态可以随机变化。8细胞膜所需的脂肪酸需要从外界的生长培养基中摄取,自身不能合成。 9支

38、原体的环状双螺旋DNA 较均匀地散布于细胞 N-乙酰胞壁酸NAM分子上有四肽侧链,相邻聚糖纤维之间的短肽通过肽桥(革兰氏阳性菌)或肽键(革兰氏阴性菌)桥接起来,形成了肽聚糖片层,像胶合板一样,粘合成多层。C荚膜(capsule):细菌最外表的一层多糖类物质。功能:抵御不良环境;保护自身不受吞噬;选择性的粘附到特定细胞的表面上。 D鞭毛鞭毛是某些细菌的动物器官,鞭毛的结构与真核生物的鞭毛完全不一样,结构十分简单,是由一种称为鞭毛蛋白(flagellin)的弹性蛋白所构成。E菌毛:是菌体表面及其蛋白纤细,须用电镜观察。与细菌运动无关。分为普通菌毛和性菌毛两类。普通菌毛与细菌吸附和侵染宿主有关;性菌

39、毛为中空管子,与传递遗传物质有关。4.核糖体:约含500050000个。部分附着在细胞膜内侧,大部分游离于细胞质中。沉降系数为70S。由大亚单位(50S)与小亚单位(30S)组成。30S的小亚单位对四环素与链霉素敏感, 50S的大亚单位对红霉素与氯霉素敏感。5.除核区DNA外,可进行自主复制的遗传因子,是裸露的环状DNA分子,所含遗传信息量为2200个基因。6.能自我复制,有时能整合到核DNA中去。质粒常用作基因重组与基因转移的载体。 细菌细胞内生孢子7.某些细菌处于不利的环境,或耗尽营养时,就容易形成内生孢子,又称芽孢,是对不良环境有强抵抗力的休眠体。细菌细胞内的重要物质,特别是DNA,积聚

40、在细胞的一端,形成一种含水量较丰富的致密体,外被很厚的壁,内生孢子折光性很强,不易染色,具有度过恶劣环境的能力,可以在杀死普通细菌或营养型细菌的条件下依然存活。(二)蓝藻又称蓝细菌,是最简单的自养生物。没有叶绿体,但有质膜内陷形成的捕光装置。 DNA分子环状,但遗传信息量很大,可与高等植物相比。体积比其它原核细胞大得多,直径约10m左右。属单细胞生物,但有些蓝藻经常以丝状的细胞群体存在。蓝藻的大小与种类蓝藻比其它原核细胞大,直径一般为10m,甚至有的达70m。蓝藻的分布十分广泛。其种类可因所含的色素不同,可有多种。如含蓝藻素与叶绿素,使细胞呈绿色蓝藻,也有含有黄色素,红色素等而呈各种颜色。1.

41、 中心质在光镜下可观察到蓝藻细胞中央部位较周围原生质明亮,是遗传物质DNA 所在部位,它相当于细菌的核区,称为中心质或中央体。胞质与中心质之间无明确的界限,蓝藻的DNA 也为裸露的,不与碱性蛋白质结合,复制也是连续的,不局限于某一个特定时间内进行。与细胞的核区不同,中心质DNA 含量大,有些种类的DNA 平均量比高等动物细胞的含量还多,其量变化也很大。故有人称蓝藻的中心质具有多倍染色体的性质。2、光合(作用)片层光合片层是位于细胞质部位的同心环样的膜片层结构,上面规则地排列着直径约35nm 左右的小体,称为藻胆蛋白体,它由几种藻胆蛋白构成。藻胆蛋白包括藻蓝蛋白、异藻蓝蛋白(内含有藻蓝素)和藻红

42、蛋白(内含有藻红素)3 类。藻胆蛋白分子均由、 两个亚基构成,其上各带有14 个色素团。藻胆蛋白的作用是将光能传递给叶绿素,即:光能藻胆蛋白叶绿素。蓝藻的光合作用效率低,因为它仅含有叶绿素a,而真核细胞含叶绿素a、b。故它是一种原始的光合作用。蓝藻的光合作用又与某些具有光合作用的细菌不一样,蓝藻在进行光合作用时能放出氧气,而光合细菌则不能放出氧气。3、细胞质内含物蓝藻细胞质内含有许多各具特点的内含物,如蓝藻淀粉、脂滴、蓝藻颗粒体、多磷酸酯体、多角体等等。这些内含物各自有其特征性的细胞化学染色性能。4、细胞表面结构蓝藻细胞膜外有细胞壁和一层胶质层。在电镜下可见细胞壁有4 个结构层,化学分析表明,

43、蓝藻的细胞壁除了有与和高等植物一样的纤维素成分外,还有与细菌相似的肽聚糖。细胞壁外的胶质层也称鞘,易被碱性染色着色,其成分可能是酸性粘多糖和果胶质。鞘内有丰富的纤维丝状结构分布在不定形基质中上,这些纤维的方向随种的不同而具有不同的特征。鞘对于蓝藻抵抗不利环境很重要。5、细胞分裂蓝藻的藻体有单细胞体、群体和丝状体。它们的繁殖主要靠细胞分裂,分裂时细胞中部向内生长新横隔壁,将中心质与原生质分为两半。一般情况下,两个子细胞在一个公共的胶质包围下保持在一起,并且不断进行分裂而形成多细胞的群体三、古核细胞(古细菌)无核膜及内膜系统;以甲硫氨酸起始蛋白质的合成,核糖体对氯霉素不敏感、RNA聚合酶和真核细胞

44、的相似、 具有内含子和组蛋白。细胞膜中的脂类不可皂化,细胞壁不含肽聚糖。生活在极端环境中,如:产甲烷菌、极端嗜盐菌、极端嗜热菌。各类生物能忍受的上限温度:古细菌113细菌90真菌60藻类55-60原生动物56维管束植物49鱼类和其他水生脊椎动物38第三节 真核细胞 一、真核细胞的基本结构体系(一)生物膜系统以脂质及蛋白质成分为基础的生物膜结构系统。(二)遗传信息表达结构系统以核酸(DNA或RNA)与蛋白质为主要成分的遗传信息表达系统。(三)细胞骨架系统由特异蛋白分子装配构成的细胞骨架系统。二、细胞的大小细胞体积的守恒规律。三、细胞形态结构与功能的关系细胞的形态与功能具有相关性与一致性。四、原核

45、细胞与真核细胞的比较原核细胞与真核细胞基本特征的比较原核细胞与真核细胞的遗传结构装置和基因表达的比较植物细胞与动物细胞的比较第四节 病毒及其与细胞的关系一、病毒的基本知识1.病毒的特征绝大多数病毒必须是在电子显微镜下才能看到。病毒虽然具备了生命活动的最基本特征(复制与遗传),但不具备细胞的形态结构,是不完全的生命体。因为它们的主要生命活动必须在细胞内才能表现,在宿主细胞内复制增殖。病毒是彻底的寄生物。2.病毒的增殖过程,主要是以病毒的核酸为模板进行复制、转录,并翻译成病毒的蛋白质,由这些物质装配成新的子代病毒。因此,一般把病毒的增殖称为复制。3.病毒的成分与结构很多病毒仅由核酸与蛋白质组成,有

46、不少病毒还含一定量的脂质,糖复合物与聚胺类化合物。每个病毒仅含有一个核酸分子,即一个DNA 分子或一个RNA 分子,在一种病毒内两种核酸不能兼得,这是病毒的最基本的特点之一。也是与细胞的最根本的区别之一。4.病毒的结构壳体(capsid):主要由蛋白质组成,少数病毒还带有酶蛋白与糖蛋白。它有保护核酸的作用。壳体又由更小的形态单位子粒所构成。有些病毒在核壳之外,还有包膜,其主要成分为脂质与蛋白质。在包膜表面具有包膜小体,主要成分为糖蛋白类,有识别的功能,并具有一定的抗原性。核壳:壳体与核酸构成病毒的核壳体二、病毒在细胞内增殖(复制)病毒侵入细胞,病毒核酸的侵染病毒核酸的复制、转录与蛋白质的合成

47、病毒的装配、成熟与释放三、病毒与细胞在起源与进化中的关系病毒与细胞在起源上的关系,目前存在3种主要观点:生物大分子病毒细胞 病毒生物大分子细胞生物大分子细胞病毒 第三章细胞生物学研究方法第一节 细胞形态结构的观察方法(自学)一、光学显微镜技术(一)普通光学显微镜(二)荧光显微镜 Fluorescence microscope特点:光源为短波光;有两个特殊的滤光片;照明方式通常为落射式。(三)激光共聚焦扫描显微境(四)暗视野显微镜 dark field microscope聚光镜中央有挡光片,视野背景是黑的,只允许被标本反射和衍射的光线进入物镜,物体边缘是亮的。可观察 4200nm的微粒子,分辨

48、率比普通显微镜高50倍。(五)相差显微镜原理用途:观察未经染色的玻片标本。(六)偏光显微镜polarizing microscope用于检测具有双折射性的物质,如纤维丝、纺锤体、胶原、染色体等。进入显微镜的光线为偏振光,镜筒中有检偏器 (与起偏器方向垂直的偏振片)。 载物台可以旋转。(七)微分干涉差显微镜 Differential interference contrast microscope (DIC) 1952年Nomarski发明,利用两组平面偏振光的干涉,加强影像的明暗效果,能显示结构的三维立体投影。标本可略厚一点,折射率差别更大,故影像的立体感更强。(八)倒置显微镜 inverse

49、 microscope物镜与照明系统颠倒;用于观察培养的活细胞,通常具有相差或DIC物镜,有的还具有荧光装置。(九)当代显微镜的发展趋势采用组合方式,集普通光镜、相差、荧光、暗视野、DIC、摄影装置于一体;自动化与电子化。二、电子显微镜(一)透射电子显微镜transmission electron microscope, TEM1. 原理以电子束作光源,电磁场作透镜。电子束波长与加速电压(通常50120KV)的平方根成反比; 由电子照明系统、电磁透镜成像系统、真空系统、记录系统、电源系统等5部分构成; 分辨力0.2nm,放大倍数可达百万倍;用于观察超微结构(小于0.2m)。2. 制样技术1)超

50、波切片技术2)负染技术 用重金属盐(如磷钨酸) 染色;吸去染料干燥后,样品凹陷处铺了一层重金属盐,而凸的出地方没有染料沉积,从而出现负染效果,分辨力可达1.5nm左右。3)冰冻蚀刻 freeze-etching(二)扫描电子显微镜工作原理:是用一束极细的电子束扫描样品,在样品表面激发出次级电子,次级电子的多少与样品表面结构有关,次级电子由探测器收集,信号经放大用来调制荧光屏上电子束的强度,显示出与电子束同步的扫描图像。为了使标本表面发射出次级电子,标本在固定、脱水后,要喷涂上一层重金属膜,重金属在电子束的轰击下发出次级电子信号。(三)扫描隧道显微镜scanning tunneling micr

51、oscope,STM原理:根据隧道效应设计,当原子尺度的针尖在不到一个纳米的高度上扫描样品时,此处电子云重叠,外加一电压(2mV2V),针尖与样品之间形成隧道电流。电流强度与针尖和样品间的距离有函数关系,将扫描过程中电流的变化转换为图像,即可显示出原子水平的凹凸形态。分辨率:横向为0.10.2nm,纵向可达0.01nm。用途:三态(固态、液态和气态)物质均可进行观察。三、显微操作技术是在倒置显微镜下利用显微操作器进行细胞或早期胚胎操作的一种方法。包括细胞核移植、显微注射、嵌合体技术、胚胎移植以及显微切割等。细胞核移植技术已有几十年的历史,1952 年,Briggs和King等将不同阶段的蛙胚细

52、胞核注入去核的蛙卵,构建核移植胚。Gordon(1962)证明原肠胚以后的细胞核移植能发育到成体。1997年,Wilmut等克隆了绵羊Dolly。第二节 细胞组分的分析方法一、离心技术是分离细胞器及各种大分子基本手段。转速1025kr/min的离心机称为高速离心机。转速25kr/min,离心力89Kg者称为超速离心机。超速离心机的最高转速可达100000r/min,离心力超过500kg。(一)差速离心 Differential centrifugation 特点: 介质密度均一; 速度由低向高,逐级离心。 用途:分离大小相差悬殊的细胞和细胞器。 沉降顺序:核线粒体溶酶体与过氧化物酶体内质网与高

53、基体核蛋白体。 可将细胞器初步分离,常需进一步通过密度梯离心再行分离纯化。(二)密度梯度离心用介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯度,将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部,通过离心力场的作用使细胞和细胞成分分层、分离。类型:速度沉降、等密度沉降。常用介质:氯化铯、蔗糖、多聚蔗糖。分离活细胞的介质要求:1)能产生密度梯度,且密度高时,粘度不高;2)PH中性或易调为中性;3)浓度大时渗透压不大;4)对细胞无毒。1. 速度沉降 velocity sedimentation用途:分离密度相近而大小不等的细胞或细胞器。特点:介质密度较低,介质的最大密度应小于被分离生物颗粒的最小密度。原理:介质密度梯度平

54、缓,分离物按各自的沉降系数以不同的速度沉降而达到分离。2.等密度沉降 isopycnic sedimentation (二)显示方法金属沉淀法:如磷酸酶分解磷酸酯底物后,反应产物最终生成CoS或PbS有色沉淀,而显示出酶活性。Schiff反应:醛基可使Schiff试剂中的无色品红变为红色。用于显示糖和脱氧核糖核酸(Feulgen反应)。联苯胺反应:过氧化酶分解H202。产生新生氧,后者再将无色联苯胺氧化成联苯胺蓝,进而变成棕色化合物。脂溶染色法:借苏丹染料溶于脂类而使脂类显色。茚三酮反应:显示蛋白质。三、特异蛋白抗原的定位与定性免疫荧光与免疫电镜是最常见的研究细胞内蛋白质分子定位的重要技术,而

55、对蛋白质进行体外分析定性则常采用免疫印迹(western blotting)、放射免疫沉淀和蛋白质芯片、质谱分析等技术(一)免疫荧光技术是利用抗体同特定抗原专一结合的原理,对抗原进行定位测定的技术。常用的标记物有荧光素和酶。免疫荧光法(immunofluorescent technique):如异硫氰酸荧光素、罗丹明等。 酶标免疫法(enzyme-labeled antibody method):如辣根过氧化物酶。免疫荧光技术免疫荧光技术是将免疫学方法(抗原抗体特异性结合)与荧光标记技术相结合用来研究特异蛋白抗原在细胞内分布的方法。主要步骤包括:荧光抗体的制备、标本的处理、免疫染色和观察记录等

56、过程。所采用的标本有组织切片、冷冻切片、整装细胞均可。在实验过程中要注意设立各种实验对照以检验结果的可靠性。(二)免疫电镜技术免疫电镜技术也是利用抗原抗体反应的原理,它能提高样品的分辩率,在超微结构水平上研究特异蛋白抗原的定位。免疫电镜技术可分为免疫酶标技术、免疫胶体金技术、免疫铁蛋白技术。后者已少用。 免疫电镜技术最关键的问题是同样要保持样品中的蛋白的抗原性,并且要设立严格的对照。主要用途:分析蛋白分泌、胞内酶、膜蛋白、骨架蛋白的定位与定性。四、细胞内特异核酸序列的定位与定性原位杂交技术(in situ hybridization)通常被用来分析细胞内特异核酸(DNA或RAN)序列的定性与定

57、位。原位杂交是指用标记的核酸探针通过分子杂交确定特殊核苷酸序列在染色体上或在细胞内的位置的方法。原位杂交的探针,一般用放射性同位素或荧光素标记。五、放射自显影技术六、定量细胞化学分析技术(一)流式细胞仪流式细胞仪(flow cytometry)可定量测定某一细胞中的DNA、RNA 或某一特异蛋白的含量,以及细胞群体中的上述成分含量不同的细胞的数量。实验时,对细胞群进行分散后对待测的某种成分进行特异染色,然后将悬液中的细胞以1 个细胞/ms 的速度(1000 万细胞/h)一个个地通过流式细胞仪,此时检测器便可测出并记录每个细胞中的待测成分的含量,并根据要求将该成分含量不同的细胞分离出来。(二)显

58、微分光光度测定技术第三节 细胞培养、细胞工程与显微操作技术一、细胞培养(一)动物细胞培养群体培养(mass culture):将含有一定数量细胞的悬液置于培养瓶中,让细胞贴壁生长,汇合(confluence)后形成均匀的单细胞层; 克隆培养(clonal culture):培养高度稀释的细胞悬液,细胞贴壁生长,每一个细胞形成一个细胞集落,称为克隆。(二)植物细胞培养外植体培养:诱发产生愈伤组织。用于研究植物的生长发育、分化和变异;进行无性繁殖;制取代谢产物。悬浮细胞培养:适合于进行产业化大规模细胞培养,制取植物代谢产物。原生质体培养:培养脱壁后的细胞,特点:比较容易摄取外来的遗传物质,如DNA

59、;便于进行细胞融合,形成杂交细胞;适宜条件下可产生细胞壁,经诱导分化成完整植株。单倍体培养:通过花药或花粉培养可获得单倍体植株。二、细胞融合通过培养和介导,两个或多个细胞合并成一个双核或多核细胞的过程称为细胞融合(cell fusion)或细胞杂交。同核体:相同基因型的细胞融合而成。异核体:不同基因型的细胞融合而成。自发融合:同种细胞在培养过程中自发合并的现象。诱发融合:异种间的细胞必须经诱导剂处理才能融合。诱导细胞融合的方法:生物方法(仙台病毒、副流感病毒和新城鸡瘟病毒 )、化学方法(聚乙二醇PEG)、物理方法(电击和激光)。(三)细胞拆合细胞拆合是指把细胞的核与质分离开来,然后把不同来源的

60、细胞质和细胞核相互配合,形成核质杂交细胞。细胞拆合有两种方法:物理方法:用机械方法或短波光把细胞核去掉或使之失活,然后用微吸管吸取其他细胞的核,注入去核的细胞质中,组成新的杂交细胞。这种操作必须在显微操作仪下进行。 化学方法:用松胞素B处理细胞,使细胞出现排核现象,再结合离心技术,将细胞分拆为核体和胞质体两部分。由于核体外表包有一层细胞膜和少量胞浆,因而在PEG 或仙台病毒的介导下,核体可同另一胞质体融合,形成重组细胞显微操作技术显微操作技术(micromanipulation)在显微镜下,用显微操作装置对细胞进行解剖和微量注射(microinjection)的技术。采用细胞拆合、显微技术与现

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