长期毒性第二军医大学新药评价中心新药评价

1、长期毒性试验 目的意义基本内容和要求Mechanic? Innovative ?长期毒性第二军医大学新药评价中心新药评价目的意义 毒性剂量 Toxic dosage安全范围 Safety margin 毒性反应 Toxic reaction: 性质、程度、量毒关系、产生时间，达峰时间, 持续时间及反复产生毒性反应时间、迟发性、蓄积性、耐受性 毒性反应靶器官 Target organ 毒性反应是否可逆 Reversibility长期毒性第二军医大学新药评价中心新药评价ProceduresAnimals Housing Test articleRoute Dosage and groupAdmin

2、istration duration Observation长期毒性第二军医大学新药评价中心新药评价Procedures 1- animals rodent non-rodent rat beagle dog mouse mongrel dog monkey长期毒性第二军医大学新药评价中心新药评价基本内容和要求 - 动物二种动物，啮齿类首选大鼠，非啮齿类用犬(Beagle犬), 必要时用猴动物应写明供应单位及邮编，品系及生产合格证号大鼠6-8周龄，体重差异不超过平均体重的20。3个月以上可选5-6周龄大鼠Beagle犬4-12月龄各半 长期毒性第二军医大学新药评价中心新药评价Procedure

3、s 2- housingDiet, T, humidity, light, ventilationRat: 5 /cage or separated， acclimation 1wDog: TB test, anthelmintic acclimation: 1-2w / 1m长期毒性第二军医大学新药评价中心新药评价Procedures 3- test articletest article / solvent / excipient name, batch No. , source, specification, purity, preserve condition, etc same qu

4、ality criterion长期毒性第二军医大学新药评价中心新药评价基本内容和要求 - 给药途径与临床给药途径一致混入饲料或饮水中灌服时保证受试药分布均匀在配制饲料或溶于饮水后仍旧稳定计量准确临床iv 时, 大鼠给药周期1月，可用ip代替，im或sc应变换注射部位必要时改变给药途径长期毒性第二军医大学新药评价中心新药评价基本内容和要求 - 剂量及分组三个给药组, 单位: mg(ml,IU) /kg 或 /m2以不等浓度等容量给药低剂量组-高于有效剂量，不出现毒性反应中剂量组-产生轻微或中等度毒性反应高剂量组-产生明显或严重的毒性反应，或个 别动物死亡空白对照-溶媒或其它赋形剂，若溶媒或赋形

5、剂有毒性时则增加正常对照组长期毒性第二军医大学新药评价中心新药评价基本内容和要求 - 剂量及分组 5 g/kg, iv 2g/kg仍无毒性反应和死亡或仅个别有毒性反应, 可只做一个50ACD(犬用30ACD)的剂量组 长期毒性第二军医大学新药评价中心新药评价Procedures 6- ad. duration Tab.Correspond duration of clinical ad. with animal ad. clinical ad. durationanimal ad. duration 13d 14d 1w 1m 4w 3m 1m 6mduration 3m ad. 6 day

6、weekly(mon. to sat. )长期毒性第二军医大学新药评价中心新药评价Procedures 7- Observations Clinical Examinations rodent non-rodent signs of ill health +pupil , T behavioral changes breath, sialosis reaction to treatment vomitingDead or moribund animal: necropsy within 1h长期毒性第二军医大学新药评价中心新药评价Procedures 7- Observations Hemat

7、ology Red blood cell count(RBC) Hemoglobin(Hb) Erythrocyte indices (MCV, MCH, MCHC) Hematocrit(Hct) Platlet count White blood cell count and percent differential Coagulation time(CT) Reticulocyte count, Bone marrow smear长期毒性第二军医大学新药评价中心新药评价Procedures 7- ObservationsClinical chemistry Alanine aminotr

8、ansferase (ALT)（丙） Aspartate aminotransferase (AST)（草） Alkaline phosphatase (ALP) Total bilirubin（Tbill） Blood urea nitrogen（BUN） Creatinine（Cr） Total protein（TP） Albumin（Alb） Glucose (Glu) Total cholesterol （Tch） 长期毒性第二军医大学新药评价中心新药评价Procedures 7- ObservationsUrinalysis Color and appearance pH gluco

9、se ketones urobilinogen blood specific gravity nitrite protein bilirubin WBC microscopy of centrifuged deposit长期毒性第二军医大学新药评价中心新药评价Procedures 7- Observations Pathology Organ weight assessment: heart liver thyroid lobes and spleen lung parathyroids kidneys brain (lobes weighed pituitary adrenals toget

10、her) ovaries testescalculate organ weights relative to body weight , paired organs weigh together 长期毒性第二军医大学新药评价中心新药评价Procedures 7- Observations Pathology Histopathological examination: heart liver spleen lung kidney brain adrenals pancreas stomach duodenum jejunum ileum colon cecum（盲） pituitary thy

11、mus spinal cord prostate testes uterus ovaries optic nerve injection site bone and marrow(sternum) urinary bladder lymph nodes(mesenteric) thyroid lobes( and parathyroids)长期毒性第二军医大学新药评价中心新药评价Procedures 7- Observations Pathologytissues(c+h embedding dead+ sectioningtarget) staining examination长期毒性第二军

12、医大学新药评价中心新药评价基本内容和要求 - 检测指标心电图导联大动物长期毒性必须做 主要观察指标：心率、P波电压、P-R间期、R波电压、QRS时间、ST段、T波电压和Q-T间期长期毒性第二军医大学新药评价中心新药评价Procedures 7- ObservationsRecoveryObservation : 1/31/2 animal, 24w Late toxic reaction and reversibility Items : same as treatment periodNot reversible?长期毒性第二军医大学新药评价中心新药评价Procedures 7- Obser

13、vations Frequency of lab. investigations rat 3m Non-rodentlast ad. interim twice pretreatmentrecovery end last ad. once every 1-1.5m recovery end last ad. recovery end长期毒性第二军医大学新药评价中心新药评价基本内容和要求 - 资料整理 首页写明: 负责者的姓名、职称、实验开始及结束日期、实验承担单位、研究室负责人和资料保存单位试验指导者、课题负责人、病理学检查、血液生化指标测定、血液学指标测定及给药观察者第二页书写试验摘要第三页

14、开始写正文、引言、材料与方法、结果合理的统计图、表有差异的指标应进行统计处理应客观地描述尸检及组织病理学检查结果对各种异常现象可用半定量的方式表述，揭示量-时关系 长期毒性第二军医大学新药评价中心新药评价Problems Pretest Dosage Animal & Housing Route Duration Observation Parameters Data handling Archives长期毒性第二军医大学新药评价中心新药评价Problems 1- pretestWhat depend on?Overseas pre-clinical / clinical dataAcute

15、toxicity , pharmacodynamics and pharmacokinetics or intended clinical doseHow long? 2w - 1mRecombinant article: antibody?长期毒性第二军医大学新药评价中心新药评价Problems 2- dosage LD50 MTD MBS ACD 3m 6m 1/10 1 10Cmax 50100 30 50 1/50 1/3 5Cmax 3050 1525 1/100 1/10 Cmax 1020 510 half for dog and monkey长期毒性第二军医大学新药评价中心新药

16、评价有关问题2-剂量表 常用动物等效剂量折算表 项 目 人 犬 猴 兔 豚鼠 大鼠 小鼠成年时体重(kg) 70 12 4 1.5 0.4 0.2 0.02换算常数(k) 12.3 11.6 11.8 12 10.5 10.5 10每公斤用药量折算(mg/kg) 1 1.5 2.2 3.1 4.3 5.4 11.0体表面积折算等效剂量比 1 0.32 0.16 0.07 0.031 0.018 0.0026长期毒性第二军医大学新药评价中心新药评价有关问题2-剂量由于溶解度(注射剂)关系, 剂量无法再增加时,应允许以最大可溶浓度和最大允许容量给药一些腔道用药、血浆代用品的高剂量也应采用类似方法防

17、止犬与大鼠剂量倒置必要时增加阳性对照组长期毒性第二军医大学新药评价中心新药评价Problems 3- animal rodent non-rodentWistar Beagle dog(4-12m)Sprague Dewley monkey (3y)6-8wbody weight CV1月，长毒可改用ip注射，im或sc可采用四肢多点轮流注射 临床有用药后加上照光(血卟啉类激光)或X-照射(CM-Na光敏剂-射线)，动物上只给药没有其他条件，观察到的毒性较加照光后的毒性低 长期毒性第二军医大学新药评价中心新药评价有关问题4-给药途径特殊情况下可改变给药途径 胆道给药溶解胆结石肿瘤局部注射给药(

18、肝瘤注射)舌下给药腔道给药(阴道、关节腔注射、硬膜或脊髓腔给药、滴耳药)内病外治、穴位给药(肝脐贴药或其他穴位给药,)艾炙加中药药酒治病、中药加烤电雾化吸入抗肝癌导向药物动脉注射Vd可改用iv代替，反之则否长期毒性第二军医大学新药评价中心新药评价Problems 5,6- observations Western Chinese Recombinant 34 times 2 times antibody 6mToxic reaction: properties, degree, dose-toxicity relationship, initiating time，peak time, las

19、ted time, late reaction toxicity, accumulating toxi-city, tolerance everyday or 6 days a week?长期毒性第二军医大学新药评价中心新药评价Problems 7- parametersPossible Toxic Reactionspharmaco- chemical pretesting publishedlogical effcts structure results data长期毒性第二军医大学新药评价中心新药评价Problems 7- parametersOverloadingReticulocyt

20、e countAST ALP BUN Alb长期毒性第二军医大学新药评价中心新药评价Problems 7- parametersTissue: free of fathalf rationed： no changes(-) 0, suspected （）0.5，mild（）， median（+）， severe （+)Local inflammation, WBC infiltration, local bleeding , haemostasis, suspected cell degeneration self-infected, sacrifice induced长期毒性第二军医大学新药

21、评价中心新药评价有关问题7-测试方法 测试方法必须公认，有文献依据新的测试方法要经同行专家认可对于某一指标的不同测试方法，应交待清楚选择的理由方法选择原则是简便、快速、灵敏、准确长期毒性第二军医大学新药评价中心新药评价有关问题7-测试次数 能反映动态变化 一般行为活动宜每天观察记录食量宜每天称重大鼠体重宜每周一次，按体重给药其它生理指标每半月至月一次大动物心电图用II导联，至少给药前、给药期间、给药后及停药结束各测一次发现有阳性指标应加大观察密度 长期毒性第二军医大学新药评价中心新药评价有关问题7-测试次数大动物生化检测，给药前2次、给药期间-次，停药时及实验结束各1次，这样就可看出动态变化，并能了解是否可逆，不仅可以进行组间比较，也可进行自身对照大鼠长毒未强调动态观察，只是指出必要时给药期可测一次，主要是因为生化指标较多，采血量大长期毒性第二军医大学新药评价中心新药评价有关问题7-停药观察 时间的长短取决于给药周期，一般可1/3 - 1/2给药周期，或2-6周了解毒性反应在停药