多糖的分离纯化技术研究

1、多糖的分离与纯化Contents多糖的基本认识 多糖的提取 多糖的分离与纯化 多糖的生产现状与前景 4123多糖 多糖又称多聚糖(polysaccharide)，由单糖聚合成聚合度大于 10 的极性大分子，分子量为数万至数百万，是构成生命活动的4大基本物质之一，与生命的多种生理功能密切相关。多糖的分类按来源可分为动物多糖、植物多糖、微生物多糖和藻类多糖；按酸碱性可分为酸性多糖、中性多糖及碱性多糖；按溶解性可分水溶性多糖、水不溶性多糖、酸性多糖和碱性多糖等；按组成成分可分为均多糖和杂多糖。多糖的功能与应用多糖具有显著的药效功能, 如增强免疫功能、 抗肿瘤、 降血糖、 抗衰老、 抗病毒作用等，广泛

2、应用于制药领域。 除此，还在食品、石油和化工等多个领域应用广泛，比如制成保鲜剂、胶凝剂、成膜剂、乳化剂。 多糖的提取 多糖提取方法有热水浸提法、酸提、碱提、有机溶剂提取、酶法提取等，常以微波和超声波辅助强化。 水溶性多糖可采用水提法，水不溶性多糖一般用碱或酸法提取。 常规水提法三氯乙酸法(TCA法)配制质量浓度为l%的粗多糖溶液，加入1%TCA，振摇20min后静置30min，然后离心除去沉淀，取上清液重复以上操作2次氯化钙法配制质量浓度为1%的粗多糖溶液，调节pH值为8一9，加热至85，加氯化钠使其浓度为5%，搅拌，冷却，离心。盐酸法配制质量浓度为l%的粗多糖溶液，向溶液中逐滴加入2mol.

3、l一1的盐酸溶液，调pH值为3，4oC放置12h，离心。 分离与纯化1、DEAE-52 离子交换柱层析 将提取得到的蛹虫草粗多糖分别配制成浓度为 10 mg/mL 溶液后用 DEAE-52 阴离子交换柱进行层析，依次用蒸馏水、0.1 mol/L、0.2 mol/L 和 0.3 mol/L NaCl 溶液洗脱，用苯酚-硫酸法跟踪检测，得到 4 种粗多糖的洗脱曲线见图 2.2。 从图中可以看到 四种粗多糖都有两个洗脱峰，第一个峰是穿透峰，为蒸馏水洗脱的多糖组分，为不带电荷的中性多糖；第二个峰即主峰则为 NaCl 溶液洗脱的带负电荷的酸性多糖组分。 分别收集这 4 个主峰部分的洗脱溶液，透析后冻干得

4、到乳白色絮状的 4 种蛹虫草酸性多糖组分，将进一步用 Sephadex G-100 凝胶柱纯化。2、Sephadex G-100 凝胶柱层析 将经 DEAE-52 柱层析后所得到的 4 种酸性多糖组分，再利用 Sephadex G-100 层析柱的分子筛作用进行进一步纯化。用蒸馏水作为洗脱液，洗脱曲线如图 2.3 所示。 由图可见，4 种酸性多糖组分经 Sephadex G-100 凝胶柱分级纯化后均得到一个单一对称的洗脱峰，说明已经得到只含单一组分的纯多糖。分别收集对称峰尖处的溶液，冻干后即得乳白色絮状的 4 种蛹虫草纯多糖组分 CM-jd-CPS、CM-hs-CPS、CM-js-CPS和

5、CM-jd(Y)-CPS。多糖的现状与前景 目前，全世界微生物多糖年需求量约为80- 100万吨，工业年产值可达50- 100亿美元 世界上微生物多糖的产量和年增长量均在 10%以上，特别是一些新型多糖年增长量在30%以上 。 我国在该领域的研究相对起步较晚，对其研究尚处于初级阶段，大部分集中在食品 食品添加剂和造纸应用等方面，在生物医用材料上的开发应用报道较少。 在现有基础上更广泛的开展微生物多糖应用基础的研究，拓展其应用领域；根据不同用途，研究下游分离提取工艺，降低生产成本，开发不同规格的产品系列，满足多元化市场需求，具有积极的现实意义。 但是如何改进适于工业化生产的提取、分离、纯化方法以提高资源的利用率，节省能源，也显得极为重要。参考文献1 王涛,赵谋明.多糖的研究进展J. 现代食品科技. 2007(01) 2吴凤瑶,杜仲争.蛹虫草多糖的分子结构及生物活性研究.江苏科技大学.2011(04)3 申利红,王建森,李雅,张大海,朱廷春.植物多糖的研究及应用进展J. 中国农学通报. 2011(02) 4 黄汉武,曾伟,陈桂光.微生物多糖工业化研究进展J. 轻工科技. 2012(05) 5 方积年, 丁侃. 天然药物: 多糖的主要生物活性及分离纯化方法J.中国天然物, 2007, 5(5): 3