药品gmp检查的指南生物制品

1、. .74/74一机构与人员检查要点 药品生产和质量管理的组织机构对做好药品生产全过程监控至关重要；适当的组织机构与人员配备是保证药品质量的关键因素；人员的职责必需以文件形式明确规定；培训是实施药品GMP工作中的重要环节。0402 生物制品生产企业生产和质量管理负责人是否具有相应得专业知识（细菌学、病毒学、生物学、分子生物学、生物化学、免疫学、医学、药学等），并具有丰富的实践经验以确保在其生产、质量管理中履行其职责。主管生物制品生产企业的生产和质量管理的企业负责人应具备医药与生物学等方面的专业知识和实践经验才能确保其在生产、质量管理中履行职责。 生物制品是药品的一大类别。生物制品是应用普通的或

2、以基因工程（Genetic Engineering）、细胞工程（Cell Engineering）、蛋白质工程（Protein Engineering）、发酵工程（Fermentation Engineering）等生物技术获得的微生物（细菌、噬菌体、立克次体、病毒、寄生虫等）、细胞与各种动物和人源的组织和体液等生物材料制备，其制备过程是生物学过程和无菌操作过程，并用于预防、治疗、诊断疾病的药品。我国目前生产和使用的生物制品有200多种，各生物制品生产企业所生产的品种各不一样，基于生物制品起始原辅材料、生产制备过程与质量控制等的固有特性，细菌类或病毒类疫苗（包括毒素、类菌素、抗毒素与抗血清等）

3、生产企业的生产和质量管理负责人应具备细菌学或病毒学、生物化学、分子生物学、免疫学、流行病学等方面的专业知识；细胞因子与其他活性生物制剂生产企业，应具备生物化学、免疫学、分子生物等方面的专业知识；DNA产品生产企业，应具备现代生物技术、分子生物学、遗传学、免疫学等方面的专业知识；体与体外诊断试剂生产企业应具备生物学、免疫学、生物化学等方面的专业知识；血液制品生产企业，应具备生物化学、分析生物学、病毒学等方面的专业知识。本项规定应具备的相应专业知识，也不可机械地局限到一个人所学的具体专业学科。 例如：医学、药学、生物学专业的，通过学习和培训可以过得和掌握分子生物学、细菌学、病毒学、免疫学等方面的专

4、业知识和实践经验；化学或其他学科专业的通过学习和培训同样可以获得和掌握生物学、分子生物学和微生物学等专业知识和实践经验。实践经验的多与少，也不能仅看从事工作的年限，关键在于学习和掌握的程度，学以致用，学习和掌握了相应专业知识是手段 ，最终目的是运用学习和掌握i的专业知识和实践经验，确保在生产、质量管理 中发现问题和解军问题。0702 从事生产制品制造的全体人员（包括清洁人员、维修人员）是否根据其生产的制品和所从事的生产操作进行专业（卫生学、微生物学等）和安全防护培训。 1生物制品生产企业人员均进行专业培训。“全体人员” 不仅包括所有从事制品生产和质量检验操作的生产、质量检验人员，也包括进入车间

5、和在实验室从事清洁与维修工作的所有清洁、维修人员和其他辅助人员，还包括进入车间和实验室调查、监督与处理问题的企业领导与其相应部门管理人员，以上人员都必须接受培训，了解和熟悉该企业所生产制品的基本特性和注意事项。2“全体人员”，除进行专业培训外，还必须进行安全防护培训。 有些生物制品是采用天然的或人工改造的微生物（包括细菌、病毒等）或动物与人源组织、体液为起始材料，这些生物活性材料，如不按规定进行特定操作和处理，对接触者有一定的感染危险性，甚至危与其生命健康，还可能污染环境，严重的可造成重大的灾难性事故。因此，对生物制品生产企业“全体人员”，特别是进入省查车间，有可能接触感染材料的人员，必须进行

6、相应生物安全防护教育和培训，务必使进入生产车间或检验室的所有人员，了解什么地方有感染危险存在、接触后如何消毒处理、如何处理突发事故（如：感染行为、生物倾斜、接触人体、溅入眼等），以确保生产和人员安全。 二厂房与设施检查要点药品生产的厂房与设施是实施药品GMP的先决条件，其设计布局和建造应能有效避免交叉污染和差错事故，便于清洁与日常维护。*2201 生产用菌毒种与非生产用菌毒种、生产用细胞与非生产用细胞、强毒与弱毒、死毒与活毒、脱毒前与脱毒后的制品和活疫苗与灭活疫苗、人血液制品、预防制品等加工或灌装是否同时在同一生产厂房进行。 本项所举的生物制品生产中涉与到的专业术语均有特定含义，而且又是关系到

7、高危致病因子的安全生产和防护的重大问题，必须明确该项规定的具体要求：凡用于疫苗、毒素、类毒素、抗毒素、抗血清、DNA重组产品等生产用菌种、毒种、工程菌种、细胞、工程细胞均为生产用菌、毒种和细胞。生产用菌、毒种和细胞须经国家药品监督管理部门批准，除此之外的其他菌、毒种与细胞，均为非生产用菌、毒种与细胞。 为了确保生产的安全、有效，只有经检定符合要求并经国家药品监督管理部门批准的上述生产用菌、毒种与细胞才能进入生产车间，其他非生产用菌、毒种与细胞一律不得进入生产车间。如该疫苗生产车间或重组产品生产车间，需交替生产不同制品，必须进行有效清洁、消毒和验证后，后一种制品生产用的菌种或毒种或生产用细胞才能

8、进入车间。强毒细菌与病毒株与弱毒细菌与病毒株，决不允许混放在一起，亦不允许同时在同一实验室进行检定实验，更不允许在同一生产车间进行强毒和弱毒的疫苗生产制备。 强毒与弱毒是指用于生产的细菌或病毒株，为毒力和致病力截然不同的两类菌、毒株。例如：用于生产乙型脑炎灭活疫苗是采用从自然界分离的毒力强、能使人致病、抗原性好的乙型脑炎病毒株制备，经甲醛或其他灭活剂杀死活病毒制成灭活疫苗。一般生产灭活疫苗所用毒力强的菌株与病毒株为强毒株（Strong Toxixity Strain）。乙型脑炎减毒活疫苗，是采用人工减毒，并证明其残留致病力很低，毒力稳定并保留自然相应免疫原性的乙型脑炎减毒疫苗株来制备生产疫苗。

9、一般生产减毒活疫苗所用毒力弱的菌株与病毒株为弱毒株或减毒株（Attenuated Strain）。疫苗生产的活生物体阶段与灭活后死生物体阶段的生产操作区在车间布局时必须严格分开，决不允许在同一生产区域既生产“活毒”，又生产“死毒”。 死毒与活毒是指用强毒的细菌或病毒株制备灭活疫苗的两个生产阶段。灭活疫苗生产时，第一阶段是采用从自然界分离的毒力强、抗原性好的强毒细菌菌株或病毒株进行大规模培养制备。制备出的细菌原液或病毒原液以与使用过 的培养设备和器材含有大量的活细菌或活病毒体，称之为“活毒”( Live Microorganism)，这些活培养物具有致病性，必须在规定的相互独立的洁净区生产区进行

10、制备。在第二阶段，细菌原液或病毒原液收获后加入一定量甲醛或其他适宜灭活剂，在规定温度和时间将活细菌或活病毒全部杀死，变成对人体安全、不含活生物体的死菌液或死病毒液，称之为“死毒”（Inactive Microorganism）。类毒素生产的有毒活素性阶段与脱毒后脱去毒素性阶段的两个生产操作区域在车间布局与空调净化系统等方面都是必须严格分开的，不允许在同一生产区域，既生产脱毒前制品，又生产脱毒后制品。 脱毒前和脱毒后是指类毒素的不同生产阶段。第一阶段，将产毒素菌株（如破伤风梭菌、白喉杆菌等）在其适宜条件下进行繁殖培养，使其生产出大量外毒素。毒素对人体是有致病性的，这一生产阶段称之为“脱毒前”。毒

11、素经加入一定量甲醛或其他适宜脱毒剂，在规定温度和时间，将毒素脱去毒性，变成为类毒素，类毒素失去罗勒毒素的致病性，但保存相应抗原性和免疫原性。对人体安全的类毒素称之为“脱毒后”。血液制品生产车间与疫苗、抗血清制品不能共用，其生产厂房必须为独立的建筑物。 血液制品（Blood Products）是由健康人血浆或特异免疫人血浆分离、提取得血浆蛋白组分或血细胞组分制品，有人血白蛋白、人血免疫球蛋白、人凝血因子（天然或重组的）、红细胞浓缩物等。由于血液制品使用人血浆作原料，可能存在经血液传播疾病的潜在危险性，从而影响其他产品，反之，其他各类制品也可能对血液制品有用现行的检验方法无法鉴别或检出的潜在影响。

12、* 2202 生产用菌毒种与非生产用菌毒种、生产用细胞与非生产用细胞、强毒与弱毒、死毒与或毒、脱毒前与脱毒后的制品和活疫苗与灭活疫苗、人血液制品、预防制品等贮存是否严格分开。解释说明 因为生物制品是采用天然或基因工程等人工改造手段而获得的微生物细胞与各种动物和人源组织、液体为原材料制备的，这些材料与无机物不一样，都是生物活性物质，其成分含有丰富的蛋白质、酶、血浆等营养物质，因此菌种一般在28摄氏度保存；不同病毒的菌种，有的可在-40摄氏度 -70摄氏度保存，有的要在液氮存放；细胞要冻于-130摄氏度以下；血液制品的原料血浆需在-20摄氏度以下冰冻保存等等。不同生物制品的中间体（包括原液与半成品

13、），血液制品的不同组分别规定有其适宜存放温度。生物制品的成品只有存放于上述规定的温度下才能保持其固有生物活性，才能避免污染。 在生物制品生产过程中，除细菌、病毒和细胞培养一般需要在3537摄氏度外，其余操作制备过程，各种制品还有各自规定的最适的温度。血浆的分离提取要在低温乙醇反应罐进行，细菌与病毒疫苗的纯化宜在28摄氏度进行，重组产品的过滤、纯化、提取应在28 摄氏度冷柜进行。 为确保生物制品生产的安全有效性，避免造成差错或重大事故，要求以下各项贮存要严格分开，不允许混合贮存。生产用菌、毒种、与非生产用菌、毒种；生产用细胞与非生产用细胞；强毒与弱毒的菌、毒种；死毒与活毒的细菌原液和病毒原液；脱

14、毒前与脱毒后的制品；减毒活疫苗与灭活疫苗；预防用生物制品、基因重组制品的种子三级批；原液、半成品和成品血液制品各工序中间品要专库保存。* 2203 不同种类的活疫苗的处理，灌装是否彼此分开。 1不同种类的细菌活疫苗和不同种类的病毒活疫苗，不允许同时在同一生产车间进行生产。 无论是细菌类减毒活疫苗（如：卡介苗、鼠疫活疫苗、炭疽活疫苗等），还是病毒类减毒活疫苗（如：麻疹活疫苗、脊髓灰质炎活疫苗、风疹活疫苗等），在 生产制备全过程中（生产用菌种或毒种启开复扩增培养发酵罐培养或转瓶培养菌液或病毒液收集细菌原液或病毒原液配制贮存灌封真空冷冻干燥等）都是处于活生物体状态（即都含有大量的活细菌或病毒），并且

15、这些活疫苗在规模化生产制备过程中，所生产出的减毒活细菌数量或病毒数量是极其巨大的，因此，不允许同时在同一生产车间进行生产。2有些活疫苗所采用的生产用菌、毒种的生物学特性相接近，且其生产工艺与所用培养基或细胞基质相接近（例如麻疹、风疹、腮腺炎疫苗），需要在同一车间进行交替生产时，必须在一种活疫苗生产、灌封完成后，进行有效的消毒和清洁，清洁消毒效果经验证证明是彻底的、可靠的，然后才能在该生产车间进行后一种活疫苗的处理。 3本项中所说“活疫苗处理”的“处理”，是指各种类减毒活疫苗、菌苗的生产制备全过程。 *2004 强毒微生物操作区是否与相邻区域保持相对负压，是否有独立的空气净化系统，排出的空气是否

16、循环使用。 1“强毒微生物”是指在我国卫生部颁布的中国医学微生物菌种保藏管理办法中规定的“一类、二类”菌种和毒种。 菌种分类是根据其危害性决定（包括实验室感染和感染后发病的可能性、症状轻重与愈后情况、有无致命危险与有效的防止实验室感染方法、用一般的微生物操作坊法能否防止实验室感染、我国有否此种与曾否引起流行和人群免疫力等情况）。依其危险程度的大小，我国的菌种分为四类。一类：实验室感染机会多，感染后发病的可能性大，症状重并能危与生命，缺乏有效的预防方法，传染性强，对人群危害性大的烈性传染病，包括国未发现或虽已发现，但无有效防治方法的烈性传染病。如：鼠疫耶尔森氏菌，霍乱弧菌（包括EI-tor弧菌）

17、；天花病毒、黄热病毒（野毒株）、出血热（克里米亚刚果出血热）病毒、东、西方马脑炎病毒、委瑞拉马脑炎病毒、拉沙热（Lassa）病毒、马堡（Marburg）病毒、埃波拉（Ebola）病毒、猴疱疹病毒（猴B病毒）；粗球孢子菌、 荚膜组织胞浆菌、杜波氏组织胞浆菌。二类：实验室感染的机会较多，感染后症状较重与危与生命，发病后不易治疗与对人群危害较大的传染病毒种。如：土拉弗朗西丝氏菌、布氏菌、炭？芽胞菌、肉毒梭菌、鼻疽假单胞菌、类鼻疽假单胞菌、麻风分枝杆菌、结核分枝杆菌；狂犬病病毒（街菌），森林脑炎病毒，流行性出血热病毒，国尚未发现病人，在国外引起脑脊髓炎与出血热的俄其他虫媒体病毒，登革热病毒，甲、乙型肝

18、炎病毒；各种立克次体（包括斑疹伤寒、Q热）；鹦鹉热、鸟疫衣原体、淋巴肉芽肿衣原体；马纳青霉菌、北美芽生菌、副球孢子菌、新型隐球菌、巴西芽生菌、烟曲霉，着色霉菌。三类：仅具一般性危险，能引起实验室感染机会较少，一般的俄微生物实验室采用一般实验技术能控制感染或有对之有效的免疫预防方法的菌种。如：脑膜炎奈瑟氏菌、肺炎链球菌、葡萄状球菌、链球菌、淋病奈瑟氏菌与其他致病性奈瑟氏菌，百日咳博特氏菌、白喉棒杆菌与其他致病性棒杆菌、流感嗜血杆菌、沙门氏菌，志贺氏菌、致病性大肠埃希氏菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌、空肠弯曲菌、副溶血性弧菌、变形杆菌，斯特氏菌、铜绿色绿脓假单胞菌气肿疽梭菌、生产荚膜梭菌、破伤风梭菌与其

19、他致病梭菌；钩瑞螺旋体、梅毒螺旋体，雅司螺旋体；乙型脑炎病毒、脑心肌炎病毒、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒以与未列入一、二类的其他虫媒病毒、辛德毕斯（Sindbis）病毒、滤泡性口炎病毒、流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、腮腺炎病毒、麻疹病毒、脊髓灰质炎病毒、腺病毒、柯萨基（A与B组）病毒、艾柯（ECHO）病毒与其他肠道病毒、疱疹类病毒（包括单纯疱疹、巨细胞、EB病毒、水痘病毒）、狂犬病固定毒、风疹病毒；致病性支原体；黄曲毒，杂色曲毒，梨孢镰刀菌、蛙类霉毒、放线菌属、奴卡氏菌属、石膏样毛癣菌（粉型）、孢子丝菌。四类：生物制品、菌苗、疫苗生产用各种减毒、弱毒菌种与不属于上述一、二、三类的各种低致

20、病性的微生物菌种。对通过分子生物学方法生产的新菌株，应按其原始亲本中的最高类别对待。不允许进行两个菌株完整基因组的重组试验。2 第一类和二类“强毒微生物”，实验室感染机会多，感染后发病的可能性大症状重，并可能危与生命名，是对人群危害性较大的传染病的菌、毒种。为确保“强毒微生物”操作区操作的活生物体不向外扩散逃逸，在建造“强毒微生物”操作间或生产制备间时，必须设置气闸和缓冲区，与其相邻区域保持相对负压，并建立处理突发事故的相应规程和有效措施。 （1）该操作实验室可与其他用途房屋设在一栋建筑物中，但必须自成一区；该区通过适当措施与公共走廊或公共部分隔离。 （2）进入生物安全防护实验室，必须通过缓冲

21、通道，通道设两道连锁门，在缓冲间进行更衣。 （3）生产一类与二类强毒的操作间安装II级或II级以上生物安全柜，一类与二类强毒微生物操作在上午安全柜进行。 （4）操作区应设有高压灭菌锅或化学清洁装置等对废弃物进行原位清毒处理。（5）如需送至生物安全防护区外进行焚烧的污物和废弃物须放置于密封袋，并装入密闭容器直接送至焚烧炉焚烧。（6）相对实验操作间外部，操作间部保持负压，相对压强以-30Pa-40Pa为宜，缓冲间相对压强以-15Pa-20Pa为宜。（7）生物安全防护操作区的通风空调系统应为直排系统，不得采用部分回风循环系统。 （8）为确保操作区的气流由“清洁”区域流向“污染”区域，不应采用上送上排

22、的通风设计。（9）操作区送风应经过初、中、高三级过滤。（10）操作区的排风必须经过高效过滤和经验证的灭活方法进行处理，如火焰灭活或消毒剂灭活，以不低于12m/s的速度直接向空气中排放。（11）生物安全柜排出的经部高效过滤或灭活处理的空气可通过系统排风管直接排至大气中。（12）生物制品生产过程忠的生物安全防护应按照“微生物和生物医学实验室生物安全通用准则”办理。* 2205 芽胞菌制品操作区是否与相邻区域保持相对负压，是否有独立的空气净化系统，排出的空气是否循环使用，芽胞菌制品的操作直至灭活过程完成之前使用专用设备。 1有些细菌在一定条件下变成圆形或卵圆形的小体，称之为芽胞。 医学研究发现，某些

23、需氧芽（如炭疽氧孢菌）和厌芽胞菌。（如肉毒酸菌、破伤风梭菌等厌芽胞菌），在对其生长繁殖不利条件下，诸如营养物质缺乏，特别是氮源或碳源营养物质都缺乏，代产物逐渐增加，译码繁殖体的基因组受到抑制，而译码芽胞有关成分的基因组则被激活，致使原来的杆菌或梭状菌体变成圆形或卵圆形小体，称为芽胞。芽胞携有完整的核质、酶系统与合成菌体成分的各种结构，并保存细菌的全部生命必需物质，在适宜条件下可以发芽又形成细菌的繁殖体。芽胞菌在对其不利生存条件下形成芽胞，而使芽胞菌生存下来的这种固有特性是其他细菌所没有的。细菌的芽胞（Gemma Bacteria）是微生物中对外周环境抵抗力最强的生命单元，芽胞在自然界可存活数十

24、年之久，一般细菌在7080摄氏度热水中迅速死亡，而芽胞菌在100摄氏度可以耐受2小时以上；在70%乙醇中可存活20年；低温核干燥对芽胞菌几乎无任何影响。高压蒸汽灭菌和焚烧是杀死细菌芽胞的最有效手段。 2 由于芽胞菌对温度、湿度、紫外线、化学消毒剂具有很强的抵抗力，一般通用的消毒灭菌方法不能将其杀死，因此，只有在专用生产车间或实验室对其进行操作处理，使用专用设备和专用器具、物料，除此之外，没有其他切实可行的办法。 （1）生产炭疽杆菌、破伤风梭菌、肉毒梭菌等芽胞菌的建筑物须与其他生物制品生产厂房分开。 （2）芽胞菌操作区与相邻区域保持相对负压。 （3）芽胞菌操作区须有独立空气净化系统，不得采用部分

25、回风循环空气净化系统。 （4）芽胞菌制品的操作直至灭活完成之前必须使用专用设备。 （5）芽胞菌制品生产操作中需重复使用的物料和用具必须与其他制品生产所用的物料分开。 （6）芽胞菌菌种保存和处理须有安全防护措施和操作规程等。*2206 各类生物制品生产过程中涉与高危致病因子的操作，其空气净化系统等设施是否符合特殊要求。 1本项中“各类生物制品生产过程中涉与高危致病因子的操作”的“高危致病因子”是指本检察指南的2204项第一款，按“中国医学微生物菌种保藏管理办法”所规定的第一类和第二类细菌和病毒。 2生物制品生产过程中涉与高危致病因子的操作，其空气净化系统、人流、物流应全部分开。 3“其空气净化系

26、统等设施的特殊要求”，详见本检查指南的2204项第2款所述的要求。*2207 生物制品生产过程中使用某些特定活生物体阶段的设备是否专用是否在隔离或封闭系统进行。 1“某些特定活生物体”是指 （1）可能有病原微生物的动物脏器组织； （2）中国医学微生物菌种保藏管理办法中所规定的第一类和第二类强毒细菌和病毒； （3）中国医学微生物菌种保藏管理办法中所规定的第一类和第二类强毒细菌和病毒的培养物； 2对于上述活生物体： （）培养和操作所用培养设备与盛装容器和离心、粉碎、过滤与纯化等设备须专用；（）生产操作间的建造与设施，空气净化系统须符合项第款的要求。只有这样，才能确保这些强毒细菌和病毒活生物体，只局

27、限于规定的隔离或封闭系统，不致扩散或逃逸出来。*2208 卡介苗生产厂房和结核菌素生产厂房是否与其他食品生产厂房严格分开，卡介苗生产设备要专用 卡介苗（Bacillus Calmette & Guerin, BCG）是采用减毒的卡介菌制备的减毒活疫苗，是给广大婴幼儿皮注射接种的4种EPI制品之一，以预防结核菌感染。 卡介苗生产需独立建筑物和厂房。卡介苗生产厂房必须与结核菌类制品生产车间严格分开。卡介苗、结核菌类制品生产厂房要与其他制品生产厂房分开。卡介苗、结核菌素的生产设备要专用。*2209 炭疽杆菌、肉毒梭状芽胞杆菌和破伤风梭状芽胞杆菌制品是否在相应专用设施生产。 1本检查指南2205项中已

28、述：炭疽杆菌、肉毒梭状芽胞杆菌和破伤风梭状芽胞杆菌等在一定条件能形成芽胞，芽胞对外界环境抵抗力极强，用一般常规清洁消毒方法不能将其杀灭，因此，生产炭疽、肉毒与破伤风芽胞菌制品必须在其专用生产厂房进行。 2生产炭疽、肉毒与破伤风芽胞菌制品的生产设备亦必须专用。*2210 设备专用于生产孢子形成体，当加工处理一种制品时是否集中生产，某一设施或一套设施中分期轮换芽胞菌制品时，在规定时间是否只生产一种制品。 基于炭疽等芽胞菌的特性（见2205项）凡芽胞菌生产均须使用专用设备。芽胞菌生产车间只能专用，其他制品不能也不允许利用芽胞菌生产车间来进行生产。因为目前对芽胞菌灭菌最有效的方法是高压蒸汽灭菌，对生产

29、车间和专用设备的彻底灭菌十分困难。因此，芽胞菌类制品生产最好安排在一定时间集中生产。如要在芽胞菌生产车间分期轮换生产下一个芽胞菌制品，必须对生产车间所用专用设备和器材进行彻底高压蒸汽灭菌，必要时应对芽胞菌进行间歇灭菌（即第一次灭菌处理后，将消毒品放置37摄氏度孵放一定时间，使芽胞体繁育成繁殖体，再进行第二次高压蒸汽灭菌），这样才能将全部芽胞体杀死。高压蒸汽消毒灭菌和间歇灭菌法均进行验证。*2211 生物制品生产的厂房与设施是否对原材料、中间体和成品存在潜在污染。 1 所有用于生产的设备，包括蒸汽灭菌柜、干烤箱、空气过滤系统、水处理系统、除菌过滤与超滤设备、洗瓶与灌封系统、冻干机等均应定期进行维

30、修、保养和验证。这些维修和验证工作须得到质量检验部门的认可，以确保最大限度降低潜在污染。生产设备的配置和维修应在重新装配好后再进行消毒灭菌，以防止在设备重新装配过程中发生污染。 2洁净区卫生设备的清洁和灭菌尤其重要，应按规定要求对生产区卫生设备进行经常性彻底清洁。需要消毒的地方，应选择多种消毒方法交替进行以避免生产耐药菌株。 3在生产车间或隔离区域进行活生物体操作的过程中和结束后，对有可能污染的区域和物品，应与时原位消毒清洁，以防止污染扩散。 4生物制品生产过程中生产的污物和废弃物，特别是带有活生物体的污染物，如不能原位消毒处理，需运送到别处消毒时，须放置在密闭容器，用专用运输工具走污物通道，

31、以避免污染扩散和交叉污染。*2212 聚合酶链反应剂（PCR）的省查和检定是否在各自独立的建筑物中进行，防止扩增时形成的气溶胶造成交叉污染。 1为避免靶DNA扩增时形成的气溶胶所造成的交叉污染，聚合酶链反应试剂（PCR）生产车间应远离PCR检查实验室，应在PCR试剂生产车间外的建筑 物设置PCR检查或检测实验室。 （！）聚合酶链反应：对于极微量的靶DNA，运用相应的引物、DNA聚合酶和寡核苷酸，则可将DNA扩增，理论上可无限度扩增放大。引物可以识别靶DNA，以单链DNA为模板合成一条新的DNA链，使目的靶DNA的拷贝数大大增加，从而使病毒或微生物DNA分子较易检测出来，这种核酸检测技术称之谓聚

32、合酶链反应（PCR）。PCR技术是利用现代生物技术方法在分子水平上对疾病进行诊断，其灵敏度极高。 （2）PCR技术对目的靶DNA识别的检测灵敏度虽然极高，可以在分子水平上对极微量检测对象靶DNA进行识别和检测，但是对参与聚合酶链反应各种试剂纯度要求极高，试剂初度不高，尤其含有有机物等杂质，常易导致假阳性结果；另外，采用PCR技术对被检测物进行检测时，需要使目的靶DNA拷贝数大大增加，大量靶DNA可以通过气溶胶微细颗粒弥散在检测实验室大气中，造成交叉污染，导致假阳性检测结果。 2 对于在检验过程中不会对PCR生产过程造成交叉污染的检定（如：荧光PCR检定和经UV酶处理的PCR检定等），可以在于生

33、产车间一样的建筑物进行，但必须在不同区域。*2213 生产人免疫缺陷病毒（HIV）等检测试剂，在使用阳性样品时，是否有符合相应规定的防护措施和设施。 对使用HIV阳性样品的操作间或检测室，须按本检查指南2204项第2 款所列的“微生物和生物医学实验室生物安全通用准则”的二、三级生物安全防护的设计和特殊建造要求进行，以确保该操作期间的HIV阳性材料不会扩散逃逸出来。（1）人免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus, HIV）, 又称艾滋病病毒，有I型和II型两个亚型（HIV-1和HIV-2），是20世纪70年代末到80年代初， 法国和美国学者发现的危害全人类生病健康

34、的极其严重的传染病病原体。HIV病毒通过注射吸毒、不洁性交、母婴垂直传播与使用污染了HIV病毒的血液或血液制品等进行传播，病毒在体大量复制，全面破坏和损伤人体免疫系统，造成HIV感染者免疫功能极度低下，甚至完全丧失免疫功能，极易导致继发感染而死亡。 （2） 目前用于艾滋病检测主要诊断试剂为人免疫缺陷病毒抗体诊断酶联免疫分析（ELISA）试剂盒，该试剂盒由用人免疫缺陷病毒I型和II型（HIV-1和HIV-2）抗原（合成肽或基因重组蛋白）包被的微孔板和酶标记抗人IgG与其他试剂组合而成，应用间接法原理（ELISA法）来检测人血清或血浆中的HIV-1和HIV-2抗体，这种HIV的ELISA试剂盒式用

35、于初筛检测用，如要对艾滋病确定诊断还要用艾滋病确诊试剂。 （3）HIV（1+2）ELISA这段试剂盒除有HIV-1和HIV-2抗原组分、微孔板、酶、显色剂（底物液A、底物液B）以外，还必须配有隐性对照血清（即HIV抗体阴性的正常人血清）和阳性对照血清（即HIV抗体阳性血清）。阳性对照血清有感染性，为确保HIV试剂生产人员和检测人员的安全和防止污染环境，阳性样品处理应在万级洁净区，并保持相对负压。*2214 生产用种子批和细胞库，是否在规定储存条件下专库存放，是否只允许指定的人员进入。 1生物制品生产企业必须指派专人对其保存的生产用菌毒种和细胞的容器贴上或固定上该菌毒种和细胞的标示明确的标签或标

36、牌。这些固定的标签或标牌应能耐受水汽浸泡或超低温冷冻，始终保证标签或标牌的标注名称、传代代次、传代日期等容清晰可辨。因为菌毒种和细胞的标签或标牌字迹不清往往导致发生菌毒种或细胞差错，造成不可弥补的责任事故。 2 生产用菌毒库和生产用细胞库，应指派两人负责保管，其中任何一个人都无法单独取得菌毒种和细胞。非指定的其他人，未经企业主管领导特别批准 一律不得进入该库重地。指派保管生产用菌毒种和细胞库的专人必须对进出库的菌毒种和细胞库的支数（ 或容器）与实际数量进行登记清点，不可有差错。 3储存设施和方法应符合要求。解释说明（！）生产用菌毒种的种子批系统包括三级种子批。原始种子批（Primary See

37、d Lot）：一定数目已验明其来源、历史和生物特性的细菌菌株或病毒株，并经临床研究证明其安全性和免疫原性良好的细菌菌株或病毒株，该原始种子应确保组成单一，并经充分签定。 主种子批（Master Seed Lot）：一定数量的来自原始种子批的细菌菌株或病毒株，每批制备时应达到一定的数量，组成均一，并经全面签定。每次生产时从主种子批中取出1支或数支用于制备生产疫苗用功能工作种子批。工作种子批（Working Seed Lot）：从主种子批传代而得到的活细菌或活病毒，用于生产相关疫苗。一定数量的源自主种子批的细菌菌株、病毒株，每批制备应达到一定数量、组成均一，并经全面检定合格。从工作种子批中取出1支

38、或数支用于疫苗生产。一般冻干的细菌种子批在28摄氏度保存，有些细菌的菌种如钩端螺旋体部分血清型菌种，真空冷冻干燥不能存活，仍需在相应斜面或半固体中保存。病毒的毒种，一般可以冻存于-40 -80低温冰箱保存，有些毒种则需要放置于液氮中保存，总之各种不同的细菌或病毒有其不同的最适保存条件，不可统一要求。（2）细胞库系统亦分为三级。原始细胞库（Primary Cell Bank）：一定数量的经过充分检查的人、动物或其他来源的细胞、源自单一组织或细胞分装于容器，组成均一。主细胞库（Master Cell Bank）：由原始细胞库的细胞制备而成，分装于容器，组成均一。工作细胞库（Working Cell

39、 Bank）：由有线传代水平的主细胞库制备而来的均一性细胞悬液，分装适宜体积于多个容器中，用于疫苗生产。（3）各种病毒所适应不同细胞的原始细胞库、主细胞库和工作细胞库一般保存于液氮罐。（4）生产用菌、毒种种子批和细胞种子库，是每个疫苗或重组产品的起始原材料，必须指定专人保管，定期进行全面检查，以防止在传代过程中出现差错或被外源因子污染。（5）生产用菌、毒种种子批和细胞种子库，至少制备双份，分别贮存于两个适宜贮存条件的专门地方，以防止因低温冰箱停电或液氮罐液氮干涸造成生产用菌毒种和细胞等变异和死亡。（6）生物制品生产和检定用的菌种、毒种建立种子批系统，是确保菌、毒种历史清楚，来源可以追溯，使生产

40、和检定用的菌种、毒种工作种子批与主种子批和原始种子批在生物学特性和遗传学特性上保持一致的重要措施。 *2215 以人血、人血浆或动物脏器、组织为原料生产的制品是否使用专用设备，是否与其他生物制品的生产严格分开。 本项是对以人血、人血浆或动物脏器、组织为原材料生产血液制品、细胞因子与生产药品等的生产厂房和设备的要求。由于人血浆有潜在的病毒污染危害，所以不能与其他生物制品共用一样的生产设备。 众所周知，临床上广泛使用的各种血液制品，诸如人学白蛋白、免疫球蛋白与各种凝血因子、人用血液组分制备的各种细胞因子等，都是治疗和抢救危重病人的重要生物制品，保证其使用安全是首要问题。上述以人血、人血浆为原材料制

41、备的血液制品、细胞因子都是采用大批量混合人血浆、血液组成成分来制备，而人血液可能被各种病原体所污染，特别是被经血液传播的相关病毒污染。国外大量检测资料已确认，人血或血液制品可能携带并传播的病毒主要有：乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）、艾滋病病毒（HIV-1和HIV-2）、人类嗜淋巴细胞I和II型病毒（HTLV-1+2）、丁型肝炎病毒（HDV）、甲型肝炎病毒（HAV）、人类细小病毒（HPV）以与梅素螺旋体、金氏虫病、弓形体等病原体等，目前人们重点关注的主要是HIV（1+2）、HBV和HCV对人血或血液制品的污染，因为这三种病毒感染率高，危害特别严重。人血浆蛋白和动物蛋白属于不用种属

42、免疫原，如果动物蛋白混入人血浆制品，会造成严重的过敏反应。所以，也不能与其他生物制品共用生产设备。为加强血液制品管理，预防和控制经血液途径传播的疾病，1996年12月30日国务院颁布的血液制品管理条例规定。国家实行采血浆站统一规划、统一设置制度，未经审核批准任何单位和个人不能从事采血浆；（2） 必须按国家制定标准，对供血浆者进行健康检查，根据国家制定的血浆采集技术操作标准和程序，采用机械采集血浆，并按单人份冰冻保存，不得混装。（3） 新建、改建或者扩建的血液制品生产单位，须经国务院卫生行政主管部门进行立项审查，依照药品管理法规定审核批准；（4） 血液制品生产单位必须达到国家药品生产质量管理规规

43、定的标准，经审查合格，方可从事血液制品生产。（5）严禁血液制品生产单位出让、出租、出借以与与他人共用药品生产企业许可证和产品批准文号；（6）血液制品生产单位不得向无单采血浆可许证的单采血浆站或者未与其签订质量责任书的单采血浆站收集原料血浆；（7）在原浆投生产之前，必须使用有生产批准文号并经国家药品检验机构逐批检验合格的诊断试剂对每一人份血浆进行全面复检，复检不合格的血浆不得投料生产；（8）血液制品的生产和产品质量，必须符合国家规定的标准，血液制品出厂前必须经过质量检定，不符合国家标准的严禁出厂。*2216 使用密封系统生物发酵罐生产生物制品可以在同一区域同时生产（如单克隆抗体和重组DNA制品）

44、 1我国现行药品生产质量管理规和国际上通行的药品生产检查互相承认公约（PIC）药品生产质量管理规指南、欧共体药品生产质量管理规等均明确规定：使用生物发酵罐密封系统的一些制品可以在同一区域或者同时生产，如单克隆抗体和重组DNA产品。 2采用生物发酵罐这类密封系统生产的单克隆抗体和DNA重组技术设备的产品，从工程菌株或工程细胞接种入发酵罐，在生物反应器（即发酵罐）发酵培养，直到培养过程完成后菌体收集或细胞收集，发酵产物通过管道进入纯化工序等，这一生产制备全过程都是在封闭系统进行，正常情况下不会受到外环境干扰和污染，不会渗漏出来污染周围环境。因此，可以允许一些产品在同一发酵车间生产或者同时在同一发酵

45、车间的不同密封系统进行生产。 3非密闭系统不得在同一区域同时生产。 *2217 各种灭活疫苗（包括重组DNA产品）、类毒素与细胞提取物，在其灭活或消毒后可以与其他无菌制品交替使用同一灌装间和灌装、冻干设施。但在一种制品分装后，必须进行有效的清洁和消毒，清洁消毒效果是否定期验证。 各种灭活疫苗、类毒素（脱毒处理后的毒素）与细胞提取物，均不含有致病性活细菌或活病毒所具有的致病因子，因此，只要对这些制品制备过程中进行有效灭活或消毒，即可以与其他无菌制品交替使用公用的灌装间、灌装设施和冻干设施。但在一种制品分装后，必须对使用过的灌封间、灌装设备和冻干设备等进行有效的清洁和消毒，其清洁、消毒效果哟阿定期

46、进行验证。 *2218 操作有致病作用的微生物是否在专门的区域进行，是否保持相对负压。 1本项“操作有致病作用的微生物”，是指本检查指南2204项第1款中所用的中国医学微生物菌种宝藏管理办法中规定的第一类和第二类的细菌和病毒。 2对操作上述第一类或第二类有致病作用的活细菌或活病毒，须在专门区域 进行，该操作区与相邻区域要保持相对负压。关于操作有致病作用微生物的操作区设计、布局、建造与该操作区空气净化与保持相对负压的要求，参见2004项第2款。 *2219 有菌（毒）操作区与无菌（毒）操作区是否有各自独立的空气净化系统，来自病原体操作区的空气是否循环使用。 1有菌（毒）操作区与无菌（毒）操作区，

47、在本检查指南2201项第2款中已论述，是指生产各种灭活疫苗时，生产过程的两个阶段：第一阶段是采用从自然界分离的毒力强、抗原性好的天然强毒细菌菌株或病毒株，进行大规模培养制备，这一阶段制备出的细菌原液或病毒原液，以与所有使用的培养设备和器材，有大量活的细菌或病毒，又称之谓“活菌”或“活毒”，这些活培养物（生物体）具有致病性，必须在与相邻区域保持相对负压的有生物安全防护区域进行生产操作。在第二阶段，细菌原液或病毒原液收获后，加入一定量甲醛或其他适宜灭火剂，在规定温度和规定时间将活的细菌或活得病毒全部杀死，这时活菌体或活病毒体即变成无活菌或无活病毒了，又称之谓“死菌”或“死毒”。 2 各种灭活疫苗生

48、产的这来那个个阶段，是紧密相连的过程，但又是必须严格分开的过程。为了适应灭活疫苗的生产工艺流程的连续性，在设计和建造灭活疫苗生产车间时，必须将该灭活疫苗生产车间，分隔成有菌（毒）操作区与无菌（毒）操作区两个独立的部分，有各自独立的空气净化系统。有菌（毒）区域的空气净化系统采用直排系统，不得采用部分回风循环系统。详见2204项第3款的要求。 3 血液制品原料（人血浆）可能被经血液传播的病毒和细菌污染，因此血浆破袋、合并血浆区与血浆蛋白分离区的生产设施、设备、用具应严格分开。 *2220 来自危险度为二类以上病原体的空气是否通过除菌过滤器排放，滤器的性能是否定期检查。使用二类以上病原体强污染性材料

49、进行制品生产时，对其排出污物是否有有效的消毒设施。 来自危险度二类以上病原体，是指按中国医学微生物菌种保藏管理办法所规定的第一类和第二类所列的细菌或病毒。在操作危险属二类以上病原体（包括细菌或病毒）的活生物体要在防护操作区域操作，其通风空调系统应为直排系统，不得采用部分回风循环系统，该操作区通风经初、中、高三级过滤；操作区排风必须经过高效过滤或其他方法处理，以不低于12m/s的速度直接向空气中排放；生物安全柜排出的经部高效过滤得空气可通过系统排风管排至大气中。该生物安全防护操作区，应设有高压蒸汽菌锅或化学消毒装置来对废弃物进行消毒处理。如需要运至生物安全防护操作区外进行焚烧的污物和废弃物，应装

50、入密闭容器高压消毒后运至焚烧炉焚烧。 *2221 用于加工处理活生物体的生物制品生产操作区和设备是否便于清洁和去除污染，能耐受熏蒸消毒。 1加工处理活生物体的生物制品生产操作区的地面、物体、天棚、应光洁、不产生尘粒、易于清洁消毒。因为经常要进行清洁消毒，地面、物体和天棚等应采用能耐受消毒剂或熏蒸消毒的材料。 2用于加工处理活生物体的设备，如发酵罐、冻干机、离心杯等应能原位消毒清洁。其他用于加工处理活生物体的玻璃器皿和不锈钢用具等亦应在操作区先经过高压消毒或化学消毒后才能清洗。 3欧洲共同体药品生产质量管理规对生物制品设备和生产区的清洁、消毒推荐使用熏蒸消毒法，因为在生产区有些地方用化学消毒方法

51、不能进行彻底清洁和消毒。WHO于1994年颁布的生物制品生产企业GMP检查指南对生物制品生产厂房的设计亦要求能进行薰蒸消毒。 *2802 生物检定、微生物限度检查是否分室进行。解释说明 生物制品不得含有杂菌（有专门规定者除外），灭活疫苗不得含有活的该菌或活的该病毒。分装后的制品按规定要求进行无菌试验，作为最终检定。 生物检定：采用微生物、细胞或实验动物来检定或判定制品效价与安全性的方法称为生物检定法。 微生物限度检查：微生物限度检查法系指检测非规定灭菌制剂与其原、辅材料受微生物污染程度的一种检查方法，包括杂菌量与控制菌的检查。生物制品无菌试验应在专用100级洁净室或万级洁净室中的100级洁净工

52、作台进行。非无菌试验的其他试验不得在此无菌试验室进行。对用于生产的主细胞库、工作细胞库、病毒种子批、对照细胞、培养液以与临床治疗用细胞进行支原体检查时（包括培养法或DNA染色法）应在专用100级的洁净操作室或万级洁净室中的100级洁净工作台进行。进行生物制品的无菌试验和支原体检测的专用洁净室，不应进行无菌试验，培养基和支原体培养基的灵敏度检测试验，如要做培养基灵敏度测验，必须在其他操作室进行。微生物限度检查时，其被检测样品是非无菌制剂，检测标准允许有限量的真菌或非致病的杂菌存在，因此，微生物限度检查与生物制品无菌试验的目的和要截然不同的，可在100，000级洁净室中的100级洁净工作台进行。为

53、确保制品无菌试验检测结果准确，不受外部环境的影响，生物制品无菌试验检测洁净室，必须要与微生物限度检测室分开，不可混用。 *3302 用于生物制品生产的动物室、质量检定动物室是否与制品生产区各自分开。 1 该项规定，在文字表达上下不够准确合理，易使人造成不必要的疑义和误解。如现行的人用狂犬病疫苗、肾综合征出血热灭活疫苗，乙型脑炎减毒活疫苗，乙型脑炎灭活疫苗、森林脑炎灭活疫苗、猴肾脊髓灰质炎活疫苗等，都是将疫苗生产用病毒株接种感染地鼠肾细胞或沙鼠肾细胞或猴肾细胞。这些地鼠、沙鼠和猴肾细胞均是原代细胞，只有从活得动物体取出鲜活的肾脏，消化制备原代细胞才能用于疫苗生产，从解剖动物取肾、消化制备细胞等是

54、有关疫苗生产的不可分开的工艺步骤，只能在疫苗的生产车间进行。因此，3002项宜改为“用于生物制品生产的动物的繁殖饲养区、质量检定动物室是否与制品生产区各自分开”。 2 用于生物制品生产的动物繁殖饲养区，必须与做制品质量检查用动物室（系指制品异常毒性试验、热原试验以与效力试验动物室）各自分开，更要与制品生产区分开。 *3003 生物制品所使用动物的饲养管理要求，是否符合实验动物管理规定。 国家科技部下设中国实验动物管理委员会，各省、直辖市、自治区的科技厅（局）设有省级试验动物管理委员会或试验动物管理中心，负责制定实验动物检测和试验动物设施评定标准，发放实验动物等级合格证书和实验动物饲养条件证书。

55、因此，GMP认证检查时，应要求被检查单位提供省级实验动物管理部门核发的“实验动物登记合格证书”和“实验动物饲养条件可许证书”。如被检查单位所用的实验动物是外购的，应要求被检查单位提供与出售实验动物单位签订的实验动物供货合同与相应实验动物质量标准，并提供动物供应单位的“实验动物等级合格证书”（复印件）和“实验动物饲养条件许可证书”（复印件）。 解释说明生物制品生产与检定所用实验动物按其所携带的微生物可分为四个不同等级。 （1）普通级动物（一级动物）：应排除人畜共患病与动物烈性传染病病原体；实验动物设施为开放系统，要求通风良好，保持清洁。 （2）清洁级动物（二级动物）；除应排除人畜共患病与动物烈性

56、传染病原体外，还应排除影响动物健康的动物传染病与对动物实验结果影响大的疾病原体；清洁级动物须在有相应洁净级别的亚屏障系统繁殖饲养。 （3）SPD动物（三级动物）：除排除普通级、清洁级动物应排除的病原体外，还应排除动物隐性感染的所致干扰动物实验结果的病原体；SPD动物须在万级洁净级别的屏障系统繁殖饲养。 （4）无菌动物（四级动物）：无可检定的一切微生物体，无菌动物必须在规定洁净级别的隔离系统繁殖饲养。 （5）悉生动物（四级动物）：无菌动物体植入已知微生物的实验动物；悉生动物必须如无菌动物一样在隔离系统饲养。 上述四个等级实验动物评定标准，以与实验动物饲养设施要求，国家实验动物管理部门均已制定有相

57、关标准。 2中国生物制品规程要求有关预防与治疗用制品生产与检定实验动物小鼠、豚鼠、地鼠与沙鼠为清洁级动物；鸡胚为SPF鸡胚。 由于到目前为止，能繁殖和供应清洁级以上小鼠、大白鼠和豚鼠的，国只有中检所等少数几家单位。要达到清洁级以上等级动物，不是建造有洁净级别的动物饲养室就能达到的，其中还要有无特定病原体动物种群的选育系统和建立对实验动物病原菌、病毒、寄生虫等的各种检定和检测方法，对动物饲养人员、管理人员和检测人员的系统培训，涉与围很多，投资成本较高，不是短时间就能实现的。再如日本、欧盟等国家和地区，到目前为止，对生产用胚数量巨大的流行性感冒疫苗和水痘疫苗也没有完全采用SPF鸡胚。 综上，国家食

58、品药品监督管理局拟在中国生物制品规程（2005年版）中考虑实施。三、设备检查要点 设备的设计、选型和安装应有利于避免交叉污染、避免差错并便于清洁与日常维护。3103 生物制品生产使用的管道系统、阀门和通气过滤是否便于清洁和灭菌，封闭性容器（如发酵罐）是否用蒸汽灭菌。 1药品生产检查国承认公约（PIC）1992年颁布的药品生产质量管理规指南“厂房和设备”中要求：生物制品生产管路系统、阀门和通风口过滤器的设计都应便于清洁和灭菌。应鼓励使用“原位清洁”和“原位灭菌”系统。发酵罐与其阀门应采用蒸汽彻底灭菌。空气出口过滤器应是疏水的，并应验证其预计使用寿命。欧洲共同体1992年颁布的药品生产质量管理规中

59、亦有上述规定。 2生物制品生产所用的各种反应罐、发酵罐与其管道等系统和阀门，在生产操作结束后，如不进行彻底清洁和灭菌，在容器、管道系统和阀门处极易残留生物活性物质，是细菌或病毒生长繁殖的物质基础，必须与时进行清洁和灭菌。灭菌可以用化学消毒剂 ，如体积较小的容器、可拆卸阀门和软管道等可以完全浸没于化学消毒剂中，其消毒效果是可靠的；但大的反应罐、发酵罐和不可拆卸的管道、阀门等采用消毒剂喷雾消毒或擦拭消毒或冲洗消毒，可能有消毒不到的死角，其消毒效果不与蒸汽消毒可靠，因此，清洁完后应采用蒸汽消毒灭菌。 3由于通风口过滤的滤材多为纸板、纤维材料或发泡材料，不宜采用蒸汽或薰蒸消毒，可采用用臭氧消毒、环氧乙

60、烷消毒、紫外线或辐射消毒等方法，但所用方法需经验证。*3402 注射用水的制备、储存和分配是否能防止微生物的滋生和污染，储罐的通气口是否安装不脱落纤维的疏水性除菌过滤，储存是否采用80摄氏度以上保温、65摄氏度以上保温循环或4摄氏度以下存放。 1世界卫生组织（WHO）1994年颁布的生物制品生产企业GMP检查指南“注射用水系统”中规定，生物制品生产注射用水应是=80摄氏度循环贮存，如不是循环贮存，其注射用水贮存24小时后就要排放掉或转作其他用途。 WHO的上述要求与我国现行药品生产质量管理规的有关规定存在不一致的地方，只能作为一种建议列出，不作为认证检查时判定“通过”或“不通过”的依据，只是希