人血白蛋白多聚体含量及人血丙种球蛋白中lgG各组份测定_第1页
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文档简介

1、人血白蛋白多聚体含量及人血丙种球蛋白中lgG各组份测定（高压液相凝胶柱色谱法）1仪器1.1高压液相泵1.2高压液相色谱柱：TSKG3000SW(直径7.5mm,长60cm)。TSkGuardColumnSW（直径7.5mm，长7.5cm）。2试剂2.1贮存液A：0.5mol/LNaH2PO4,pH4.8称39gNaH2PQ42H2O，用超纯水溶解，并稀释至500ml。2.2贮存液B：0.5mol/LNa2HPO4称179.1gNa2HPO412H2O，用超纯水溶解，并稀释至1000ml。2.3工作液C：0.2mol/L磷酸盐缓冲液，Ph7.0（含1%异丙醇）准确量取200ml贮存液A、420m

2、l贮存液B、914.5ml超纯水、15.5ml异丙醇，混匀，用0.45m水溶性膜过滤并超声脱气。3样品处理用生理盐水将样品稀释至4mg/ml，然后用0.45m水溶性膜过滤。4操作用工作液C以0.6ml/分钟流速平衡高压液相系统至基线平稳。取处理过的样品25l上柱，用工作液C以0.6ml/分钟流速洗脱，同时在紫外检测器280nm波长下记录色谱图及有关数据。记录数据的时间为60分钟。5计算5.1人血白蛋白多聚体含量计算用高压液相系统的色谱工作站或积分仪对试验结果进行数据处理，算出多聚体相对面积百分含量。再根据转化公式换算成相对重量百分含量。转化公式*X（%）=Y1.6504/1.6359其中X为凯氏定氮结果，Y为高压液相结果（如Y值小于1.6504，结果不用转化成重量百分含量，但在试验报告中需注明为相对面积百分含量）。5.2人血丙种球蛋白中IgG各组份相对含量计算。5.2.1IgG各组份峰的划界。图谱中各峰的界限为两峰间最低点到基线的垂直线。5.2.2IgG各组份相对含量计算。用高压液相系统的色谱工作站或积分仪对试验结果进行数据处理，算出各组份相

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