NF-KB信号通路ppt课件

1、NF-B信号通路1主要内容 背景引见 IKK复合物的上游信号 IB激酶的构造和激活方式 IB蛋白的作用 NF-B的转录调理2一、背景引见1. NF-B信号通路2. NF-B家族3. IB蛋白家族4. IB激酶复合物 NF-B信号通路的活化 3背景1NF-B信号通路最根本的NF-B信号通路，包括受体和受体近端信号衔接蛋白， IB激酶复合物， IB蛋白和NF-B二聚体最常见的是p50/p65。 当细胞遭到各种胞内外刺激后，IB激酶被激活，从而导致IB蛋白磷酸化，泛素化，然后IB蛋白被降解， NF-B二聚体得到释放。 NF-B二聚体经过各种翻译后的修饰作用而被进一步激活，并转移到细胞核中。在细胞核里

2、，它与目的基因结合，以促进目的基因的转录。4NF-B经典和非经典通路NF-B的 经典信号通路和非经典信号通路的主要区别就在于：经典信号通路中， IB蛋白的降解使NF-B二聚体得到释放。非经典信号通路中，经过P100到P52的加工处置，使信号通路激活。567(A) Non-canonical control of RelA:p50. RelA:p50 is inhibited by not only IB, -, -, but also IB. Whereas inflammatory canonical signals lead to degradation of IB, -, -, deve

3、lopmental signals engage the non-canonical pathway to disrupt IB activity; however, both result in the nuclear translocation of RelA:p50. Interestingly, prior canonical signaling history results in an enhancement of the non-canonical-RelA:p50 axis, due to inducible expression of p100. (B) Canonical

4、control of RelB:p52 activation. Expression of p100 and RelB are dependent on RelA:p50 activity and therefore canonical signals. The amount of basal RelB expression, controlled by constitutive canonical pathway activity, rather than the inducible p100 expression, is the main determinant of the streng

5、th of non-canonical signaling.Crosstalk between canonical and non-canonical pathways8NF-B家族背景2NF-B家族由P50、P52、P65、c-Rel和RelB五个成员组成。它们分别由NFKB1, NFKB2, RELA, REL和RELB基因进展编码。都有一个N端Rel同源构造域RHD，担任其与DNA结合以及二聚化。在P65、c-Rel和RelB中，存在着转录激活区域TAD，对基因表达起正向调理的作用。 P50和P52不存在转录激活区域，它们的同型二聚体可以抑制转录。9NF-B二聚体的存在方式 NF-B二聚

6、体与IB蛋白结合 NF-B二聚体与DNA结合 NF-B二聚体构造 氨基末端为免疫球蛋白类似区域，对某一种方式的B位点具有选择性。 C-末端疏水区域提供NF-B各亚基之间的衔接。 普通， NF-B是以二聚体的方式存在的，而它的二聚体又有两种存在方式。10NF-B二聚体11背景3IB蛋白家族IB蛋白家族包括八个成员：IB、IB、IB、 IB(zeta) 、IB、Bcl-3、p100和p105 。作用：在细胞质中与NF-B二聚体结合，并对信号应对具有重要作用。IB蛋白的构造特点：存在锚蛋白反复区域即多个严密相连的钩状反复序列，每个反复序列含有33个氨基酸 。12NF-B家族与IB蛋白家族13背景4I

7、B激酶复合物 IKK/IKK1 (CHUK) IKK/IKK2(IKBKB) 调理亚基 NEMO 在特定的NF-B 信号通路中，IKK和IKK是选择性需求的。1415NF-B activation cascade in the canonical pathways.背景5NF-B 的 活 化S-NO: S-nitrosylation;Oxy:S-glutathionylation;SCF: Skp1-Cul1-Roc1-F-box ubiquitin lipase complex16TLR4 signaling pathways that lead to NF-B activation.171

8、8NF-B activation plays a central role in the pathophysiology of septic shock. 19例： 20例： NF-B信号通路的活化在微循环妨碍发生开展中的作用1. NF-B介导的微管内皮细胞的损伤1.1炎症性浸润引发的损伤 知ICAM-1基因启动子上有1个根本的NF-B位点，VCAM-1基因有2个NF-KB位点，E-sel基因有3个NF-KB位点 。 P-sel参与介导内皮细胞与中性粒细胞、单核细胞的粘附。 NF-B 经过调控IL-8及MCP等化学趋化因子的表达，从而募集大量的单核巨噬细胞、中性粒细胞，引发炎症浸润和损伤。 N

9、F-B能促进IL-2受体，T细胞受体、链的表达，从而介导了IL-2的毒性损伤以及T细胞与内皮细胞粘附，导致内皮细胞受损。211.2 NF-B活化后促内皮细胞的凋亡，致微血管损伤在许多促调亡基因：C-myc、TNF及IL-1转化酶IL-1 converting enzyme,ICE启动子上都发现了NF-B 位点。 TNF-诱导凋亡中出现了NF-B的伴随活化。 胸腺细胞能活化NF-B而诱导细胞凋亡。经过去除NF-B的诱导物活性氧ROS能抑制凋亡的发生。222. NF-B活化影响凝溶的动态平衡，促微血栓构成 NF-B活化促进血管性血友病因子(von Willebrand Factor)的表达。vWF

10、是因子的相关因子，与因子结合，能有效防止在血浆中迅速降解。vWF与结合，一端与血小板糖蛋白Ib结合，另一端与内皮细胞下的胶原纤维衔接，介导血小板粘附血管内皮，促进微血栓构成。 NF-B调控内皮细胞合成组织因子Tissue factor，这是一种亲脂性蛋白能作为受体与因子和a结合而构成复合物，使IX和X裂解，从而既激活外凝系统又激活内凝系统。 NF-KB的活化能紊乱微血管的纤溶系统: 纤溶酶原激活抑制物-2PAI-2启动子上有两个NF-B位点。TNF-能刺激NF-B促PAI-2的表达。p65的继续活化那么能促进uPA的表达，由于uPA启动子上也发现了一个NF-B位点。23 很多胞外刺激信号都可以

11、引起NF-B 信号通路的激活：前炎性细胞因子，如TNF、IL-1；与细胞分裂、增殖有关的要素，如抗原、植物血凝素PHA、刀豆素AConA和佛波酯PMA；细菌毒性产物LPS、病毒、双链RNA等；物理化学因子，如紫外线、吐根碱、放线菌酮等；致凋亡因子，如离子射线、化疗药物。 虽然这些胞外刺激所产生的胞内早期信号途径各不一样，但普通以为，大多数此类胞外刺激起始的信号传送反响将最终激活IKK复合物。在这个传送过程中，衔接蛋白起着重要的作用。 二、IKK复合物的上游信号24NF-B is a central regulator of the transcriptional responses to a

12、wide variety of physiological and environmental stimuli.25 NF-B活化途径26 在很多NF-B信号通路中，许多的信号中间物都是共有的，特别是IKK复合物的上游信号。不同的信号通路可利用一些共有的信号元件激活和抑制通路。 TRAFsTNF受体相关因子 IKK复合物的上游信号衔接蛋白 RIPs受体作用蛋白 TAK1TGF-激活性激酶1 IKK复合物的激酶 NIKNF-B诱导激酶27281. TRAFsTNF受体相关因子 TNF受体相关因子-TRAFs家族成员是一大类胞内接头蛋白，能直接或间接与多种TNF 和IL-1/Toll-like 受

13、体家族成员结合。介导多种下游信号通路的信号传导 ，其中包括NF-B 信号通路。从而影响细胞的生存、增殖、分化和死亡，并参与多个生物学过程的调控。 在几乎所用的NF-B信号通路中，TRAFs都是关键的信号中间物。 TRAF蛋白家族： TRAF蛋白家族一共有7个成员，分别是TRAF1、 TRAF2、 TRAF3、TRAF4、 TRAF5、 TRAF6、 TRAF7。 29 TRAF蛋白质在构造上具有很高的同源性，同源性普通大于30%，其特征性的构造是一切成员在羧基端都有一个C-末端TRAF构造域，即包括一个卷曲螺旋构造，介导同型和异型蛋白之间的相互作用。 另外，TRAF2-7的N-末端存在一个RI

14、NG指构造，其可以作为E3泛素衔接酶起作用，即将泛素转移到目的蛋白上。RING 指构造后还有5 到7 个锌指构造域。TRAF蛋白的构造30TRAFS的功能1 经过TNFR1相关的死亡蛋白(TRADD)，TRAF2和 TNF-的受体TNFR1结合，进而激活IKK。在此过程中，其RING指区域作为E3衔接酶是必需的。但其详细作用机制还需求深化研讨。 在TNFR1信号通路中，单一敲除TRAF2或TRAF5， NF-B信号通路的激活仍会出现。但是双敲除TRAF2和TRAF5，那么会呵斥 NF-B信号通路中，IKK复合物的激活出现缺陷。因此，在TNFR1信号通路中，需求TRAF2和TRAF5的共同作用。

15、31 在Toll-like/IL-1信号通路中， TRAF6可与受体复合物发生作用，激活IKK。但是， TRAF6的E3衔接酶作用机制也是需求进一步证明。 因此，在NF-B信号通路中， TRAF2、TRAF5和TRAF6在激活IKK复合物方面起着重要的作用。232 TRAF蛋白家族成员中， TRAF3也是较广泛的研讨成员。 TRAF3是既可介导NF-B经典信号通路，也可介导非经典信号通路。在经典信号通路中，其可与受体直接作用激活IKK复合物。而在非经典信号通路中， TRAF3经过NIKNF-B诱导激酶激活IKK，从而激活信号通路。 在一些情况下， TRAF3可诱导NIK的泛素化和降解，抑制信号

16、通路的激活。但是这时候，其他 TRAF家族成员可介导TRAF3的降解，结果呵斥NIK的积累和活化，促进非经典信号通路正向激活。 因此，不论在经典还是非经典信号通路中， TRAF蛋白在诱导IKK激活方面发扬着很重要的作用。332. RIPs受体作用蛋白 RIPs是经典NF-B信号途径中的关键的衔接蛋白。 RIPs既可经过蛋白结合区域直接作用于信号通路的上游，也可经过与NEMO结合激活IKK复合物。并且，在大多数的TRAF依赖型信号通路中， RIPs都被牵涉其中。 RIP蛋白家族一共有7个成员，分别为RIP1-7。 RIP蛋白的构造特征是：都具有保守的丝氨酸/苏氨酸激酶区域。 34RIP1 RIP

17、1具有一个死亡构造域，可以介导其他衔接蛋白和受体的死亡构造域之间的相互作用。 RIP1不仅可以招募IKK复合物，其更重要的作用是激活IKK复合物。 RIP1激酶区域对IKK的激活并不是必需的，普通的作用是集合一个信号复合物元件，经过NEMO的寡聚化，和IKK的自磷酸化，诱导IKK复合物的激活。 RIP1只出如今NF-B经典信号通路中，而对于CD40或LTR介导的非经典信号通路中是不需求RIP1的。35RIP2 RIP2包括一个C-末端半胱天冬酶活性和招募区域CARD，可介导受体和衔接蛋白之间的相互作用。这个CARD区域，也使RIP2在一个特殊的NF-B信号通路中起着重要的作用，即抗原受体信号通

18、路。在抗原受体信号通路中，有着显著的CARDS作用，由于，BCL10和CARD11属于CARD包含蛋白，在抗原受体信号通路中对于激活IKK有着决议性的作用。这个信号通路是需求RIP2。同样，细胞内构造识别受体NOD-LRR家族成员也属于CARD包含蛋白，也需求RIP2来激活IKK。 与RIP1类似， RIP2的激酶区域对IKK的激活也不是必需的， 在NF-B经典信号通路中， RIP2与TAK1和TRAFS作用，直接诱导NEMO的泛素化，和下游信号通路激活。36 在NF-B信号通路中， RIP3由于和RIP1具有同型作用基序 RHIM，所以与RIP1具有同等功能。但是在信号通路中， RIP3的重

19、要性远远比不上RIP1，由于当RIP3缺失时，大多数的NF-B信号通路是正常的。在特殊情况下， RIP3能够影响和妨碍RIP1诱导的NF-B信号通路的激活。RIP蛋白总结： RIP1作为一个死亡构造域和NEMO的衔接蛋白与RIP2作为一个CARD到NEMO的衔接蛋白，在一些NF-B经典信号通路中扮演着类似的角色。经过与NEMO结合，RIP蛋白招募IKK复合物。经过NEMO的寡聚化或泛素化依赖机制直接介导IKK复合物的激活。RIP3373. TAK1TGF-激活性激酶1 NIKNF-B诱导激酶 TAK1和NIK作为IKK激酶出如今NF-B信号通路中。其中TAK1涉在经典信号通路。而NIK在非经典

20、信号通路中有诱导IKK激活和P100磷酸化的作用。 TAK1 TAK1普通在RIP蛋白激活IKK的信号通路中例如：抗原受体和NOD-LRR信号通路，都要被涉及。但其作用机制并不明。主要表如今：在不同的经典信号通路中， TAK1的基因被敲除， NF-B信号通路的激活会出现不同程度的缺陷。 TAK1能否作为一个IKK-K直接或经过一个媒介激酶如：MEKK3介导IKK的激活，这是不清楚的。经过许多一样的信号中间物，LTR介导的IKK的激活是不需求TAK1的。 因此，对于TAK1的作用机制我们还需求更深化的研讨。38NIK: NF-B诱导激酶 在RIP蛋白缺失的情况下， NIK主要担任激活NF-B的非

21、经典信号通路。 NIK可直接磷酸化，激活IKK。NIK遭到结合的TRAF蛋白，CIAP1和CIAP2E3衔接酶的调理，当TRAF蛋白，CIAP1和CIAP2发生降解时，可导致NIK的积累和IKK的激活。39NIK stabilization as a mechanism of non-canonical NF-B signaling.40A model of noncanonical NF-B regulation41小结在NF-B非经典信号通路中，TRAF和NIK可以不经过NEMO，充分激活IKK，从而使信号通路激活。在NF-B经典信号通路中， TRAF、RIP蛋白和TAK1都是必需的。42

22、 对于NF-B信号通路的激活，IKK是非常重要的。因此，了解IKK活性的调理曾经成为掌握NF-B信号通路激活的中心。 1. IKK复合物 2. IKK的激活 3. IKK的酶作用底物三、IB激酶的构造和激活方式431.IKK复合物 IKK又称IKK1，85kDIKK又称IKK2，87kDNEMO又称IKK，48kD 具有较高的序列同源性和类似的构造。在N-末端均含有蛋白激酶区,接近中间区域的亮氨酸拉链区(LZ) 及螺旋-环-螺旋(HLH)包括大段的卷曲螺旋(coiled-coil) 及接近C-末端的亮氨酸拉链区 虽然一些实验证明在IKK复合物中，能够会含有一些其他成分，,如IKK关联蛋白1(

23、IKKAP1) 、促分裂原活化蛋白激酶1 (MEKK1) 、NF-B 诱导激酶(NIK) 及调理蛋白IKAP 等，但是需求进一步的证明。IKK复合物的组成：44IKK复合物各组分的作用 在经典的NF-B信号途径中， IKK并不是必需的。它在NF-B 受体活化因子( receptoractivator of NF-B, RANK) 引起NF-B 活化转导途径及NF-B 活化变卦途径中是必需的。IKK的缺失可导致许多发育上的缺陷。 IKK是促炎症反响因子刺激诱导NF-B 的激活的主要激酶。IKK缺陷的细胞对TNF和IL-1 等刺激不会 引起NF-B 的活化。IKK的活化是防止因部分缺血或充血引起严

24、重炎症反响而导致多组织功能丧失所必需的。 在经典的NF-B信号通路中， NEMO是必需的。 NEMO能够经过与IKK和IKK的直接作用而介导IKK复合物的组装, 并且还能促进IB 蛋白与IKK激酶复合物的相互作用。 IKK：IKK：NEMO：45IKK复合物的组装 IKK、 IKK和 NEMO共同组成了IKK复合物(NEMO2/IKK1/IKK1)2。 IKK和 IKK可经过亮氨酸拉链区域构成二聚体，即IKK：IKK异型二聚体。其实IKK和 IKK也具有其同型二聚体，但是在正常情况下很难存在。 经过IKKC-末端的NBD区域，IKK和 IKK可与NEMO结合，结合的部位是第一个卷曲螺旋构造的4

25、7-80残基。其中， IKK与NEMO结合的亲和力要高于IKK。46 虽然， IKK复合物的中心构成只包括IKK/ IKK/ NEMO，但是其中还有两个很重要的特征需求我们留意： 激酶伴侣蛋白HSP-90/Cdc37。研讨证明，伴侣蛋白HSP-90是与IKK复合物结合的，同时伴侣蛋白HSP-90的抑制物会抑制IKK复合物的激活，因此，可以说IKK复合物的激活是需求HSP-90的。由于HSP-90还与NF-B信号通路中的其他激酶结合，Cdc37曾经渐渐取代了HSP-90在IKK复合物的激活中发扬作用。 ELKS转录激活因子ETS样蛋白。其作为一个IKK复合物的调理成分。但是其对IKK复合物的重要

26、性还需求进一步证明。472.IKK的激活IKK复合物的激活首先是需求IKK亚基的T环丝氨酸的磷酸化。但是目前这种磷酸化的机制并不明确。其中，IKK的磷酸化位点是丝氨酸177和181， IKK的磷酸化位点是丝氨酸176和180。另外，激活的T环丝氨酸假设突变成谷氨酸那么会产生IKK激活，而突变成丙氨酸那么会取消信号应对。 IKK复合物的激活中一个普遍的元素是：对TRAF家族成员的需求和诱导TRAF的寡聚化从而向下传送信号。这阐明信号复合物的集合对于IKK的激活的重要性。 NEMO的C-末端区域介导IKK的激活。被RIP1介导的NEMO的可诱导的寡聚化被以为可以激活IKK，并且这一点曾经得到了证明

27、。但是，根据以上的发现，我们并不能得到IKK激活的详细机制。IKK激活需求的条件48最近的一些发现为研讨IKK的激活的机制提供了线索：在酵母中，野生型的IKK表达的激酶活性被NEMO的共表达所提高，而那些T环被突变成谷氨酸的IKK，其活性也很高，但是其活性不会随着NEMO 的共表达发生变化。阐明：IKK的激酶活性被NEMO所提高，是经过IKK的T环磷酸化促进而发生的。研讨发现，反式自磷酸化作为NEMO和IKK的一种天性的高次构造构成结果而发生，其展开的分子量近似激活的IKK。阐明：反式自磷酸化能够是IKK激活的主要机制。IKK的NBD区域的丝氨酸残基的磷酸化，可以抑制IKK的活性，和阻止经过与

28、NEMO的共表达而发扬作用的IKK活性的添加。阐明：NBD/NEMO之间的作用对于NEMO介导的IKK激活很重要。IKK激活机制的探求 因此，在IKK激活中，反式自磷酸化是主要的作用机制。49 IKK激活途径能够是一个反响调理的重要机制。接受刺激后，NEMO与IKK的结合区域被磷酸化，磷酸化位点为丝氨酸68。这个磷酸化可诱导NEMO二聚体的分别，和妨碍IKK与NEMO之间的相互作用，从而终止信号通路。这种构象的变化可被伴侣分子HSP-90或IKK复合物的磷酸化酶所识别，经过HSP-90或者NEMO在丝氨酸68的脱磷酸化的作用，可以使IKK复合物恢复活性。 根据以上的研讨发现，IKK的激活模型被

29、提出。见下页 IKK激活的反响调理50IKK的激活模型 1.在静息形状下，(NEMO2IKK1IKK1)复合物中，IKKs经过与NEMO相互作用而被抑制。 2.在有刺激物的情况下，NEMO结合一个RIP蛋白NEMO泛素化，使IKK的蛋白激酶区域暴露，诱导T环丝氨酸残基的反式自磷酸化或者由IKK-K磷酸化T环丝氨酸残基。 3.被激活的IKK可磷酸化下游的酶作用底物如IB s，从而激活NF-B信号通路。 被激活的IKK还可磷酸化IKK的丝氨酸740和NEMO的丝氨酸68,使得NEMO二聚体与IKK的分别,阻止激酶的反复激活。 4. Cdc37/HSP-90伴侣分子和 PP2A/PP2C磷酸化酶可以

30、介导IKK复合物的重组。51小结 在NF-B信号通路中，寡聚化的出现是一个共有的主题。 TRAF蛋白的寡聚化使其可以顺利向NF-B信号通路下游传送信号。 RIP蛋白的寡聚化在NF-B经典信号通路中是必需的。其与NEMO相互作用诱导IKK复合物的积聚。 NEMO的寡聚化/泛素化在激活NF-B信号通路中也是很重要的。 同时，NEMO的泛素化在DNA损伤反响中也很重要。52 一个复杂的NF-B信号通路中，对于IKK的激活，是需求上游信号元件的寡聚化和泛素化。 但是在非经典信号通路中，RIP介导的NEMO的寡聚化不会发生，IKK是经过NIKS直接介导T环磷酸化所激活的。IKK对于NEMO的低亲和力也促

31、使NIK进入IKK的T环发扬作用，而不是IKK。 IKK的激活是一个短暂事件，其从属于反响调理机制。 多数的反响调理机制造用于上游信号元件，其中作用最显著的是脱泛素化酶A20和CYLD。 IKK的C-末端NBD的磷酸化也是一种重要的反响调理环的元件。 蛋白磷酸酶2APP2A，也可以经过转移T环磷酸化来妨碍IKK的激活。533.IKK的酶作用底物 自在的IB家族成员： IKK、IKK可磷酸化IB丝氨酸32、36和 IB的丝氨酸19、23。其中，作为IKK的酶作用底物， IB要优于IB。大多数情况下，IB降解速度比IB慢。 IKK可以磷酸化P100的丝氨酸672。 与NF-B结合的IB： 是一种更

32、好的IKK的酶作用底物。54 IB蛋白的主要作用是掩盖NF-B的核定位信号，阻止其入核，及其与DNA的结合，使NF-B以非活化方式存在于细胞的胞质中 。因此，对于研讨NF-B信号通路来说， IB蛋白的研讨很重要。 典型的IB蛋白IB, IB和IB 前体IB蛋白p100 和 p105 非典型的IB蛋白IB 和 Bcl-3四、IB蛋白的作用55IBIBIB1、典型的IB蛋白 三种经典的IB蛋白，它们有其各自独一的功能特征。另外，在应激反响引起的经典NF-B信号通路中，这三种类型的IB蛋白都是必需的。 在三种经典的IB蛋白中，IB是NF-B活化过程中最强的负反响因子,保证NF-B 活化的迅速发生和封

33、锁;而IB和IB那么能缓冲系统活化的动摇趋势从而使NF-B 坚持一个相对较长的呼应时间。 IB、IB专注性抑制含有RelA和c-Rel的二聚体。56IB蛋白家族最广泛的研讨成员：IBIB是IB蛋白家族最经典的成员。在NF-B信号通路中， IB可以与最普遍的NF-B二聚体P65：P50结合，防止其入核及与DNA结合。因此，在IB缺失的情况下，已激活的NF-B信号通路的终止是显著推迟的。 IB与P65:P50异源二聚体结合后，只粉饰P65的核定位序列NLS，而P50的NLS那么暴露。P50的NLS与IB的核导出序列NES结合，使IB与NF-B二聚体的复合物在细胞质和细胞核之间穿越运动。当经典信号通

34、路激活的时候， IB迅速降解，释放出多个NF-B二聚体。在非经典信号通路中， IB普通不是必需的。57IB的降解58IB和IB IB的表达最初是在造血细胞中发现的，与IB相比，其降解和再合成具有明显的延迟景象。它的降解依赖于IKK复合物，它的表达遭到NF-B的调理。 IB的功能目前还没有确定，它的缺失并不能显著影响NF-B信号通路。最近的研讨阐明， IB能够在细胞核中起调理NF-B二聚体与B位点结合的作用。但是这一结果需求进一步验证。592.前体IB蛋白p100 和 p105 p105作为一个IB蛋白，可以被已激活的IKK复合物诱导降解。SCF复合物 Skp1、Cdc53/Cullin和F-b

35、ox蛋白质是泛素-蛋白酶系E3中的组成之一。-TRCP-transducin repeat-containing protein，转导反复相容蛋白作为F盒蛋白的一员，特异识别磷酸化的IB和-catenin，介导后者经泛素-蛋白酶复合体途径降解。 p105经过20s蛋白酶体加工处置后构成p50，在此过程中，发生在翻译阶段。不需求SCF -TRCP。另外， p105基因3端也可以编码一个独立的调理因子IB。60p100 p100主要出如今非经典通路中，在其加工过程中需求IKK和 SCF -TRCP，最后被降解成p52 。因此，p100加工处置成p52的过程是一个包括磷酸化和泛素化的受调控的过程。

36、p100是RelB的独一调理因子，由于包含RelB的NF-B二聚体只结合p100。 p100也可以作为传统的IB蛋白，调理p65包含的IKK下游复合物的活性。同时，其也可以限制p65的NF-B活性，起反响调理的作用。 因此， p100可以对NF-B的活性有正向和反向的调理。61因此， p100对于NF-B信号通路的调理是很重要的。 P100具有选择性调理特殊的NF-B复合物的功能。 p100作为IB蛋白，在特殊的NF-B信号通路的下游区域发扬作用。 p100具有特殊NF-B二聚体的根底活性的调理功能。P100加工处置成p52的过程P100： RelB异源二聚体IKKSCF -TRCP导致P10

37、0的泛素化使P100磷酸化，磷酸化位点:丝氨酸866、870、872构成P52：RelB异源二聚体，从而激活NF-B信号通路。623.非典型的IB蛋白Bcl-3和IBBcl-3 Bcl-3伴随着p50和p52构成的同型和异型二聚体在细胞核中被发现。 p50同型二聚体可以与目的DNA的B位点结合，从而抑制NF-B 信号通路。Bcl-3有两种作用方式：可以经过从B位点转移p50同型二聚体的方式，介导转录抑制物的释放， B位点暴露，从而激活NF-B 信号通路。 也可以稳定p50同型二聚体，和阻止p65、p50或者其它含有TAD的二聚体进入B位点的方式，抑制信号通路。Cyclin D1是一种Bcl-3

38、调理基因。去泛素化酶CYLD，可以经过阻止Bcl-3在细胞核积累，及其与p50，p52同型二聚体的共激活作用，来反向调理Bcl-3功能。 Bcl-3也以经过正常或者癌细胞中加强Hdm2基因的表达，来调理p53。63IB IB与Bcl-3较为类似，与其他的IB蛋白只需较弱的同源性。 IB在IL-1 和 TLR4诱导的NF-B反响中表达上调，并且其表达主要集中在细胞核中。 NF-B激活的通路中， IB可以被诱导表达。其一旦表达，会直接和p50同型二聚体结合。可以说， IB是作为p50同型二聚体的一个共激活因子起作用的。IB也可以反向调理包含p65的NF-B复合物。 因此，可以说， IB也可以选择性

39、的抑制和激活NF-B信号通路。64小结 经过对IB蛋白的深化讨论，我们觉得，仅仅把IB蛋白作为NF-B信号通路的抑制因子曾经不太恰当了，由于IB蛋白也可以作为NF-B信号通路的辅助要素，选择性的与各种NF-B二聚体发生作用。尤其是非典型的IB蛋白，这种作用更加明显。 所以说，对于经典的IB蛋白的作用主要是与NF-B二聚体结合，阻止其入核，与DNA结合，从而抑制NF-B信号通路。而对于非典型的IB蛋白来说，其可以选择性的激活或者抑制NF-B信号通路。65 随着NF-B信号通路的深化研讨，人们渐渐将重点转移到NF-B的转录调理是怎样样开场和终止的。 1. 共激活因子的调理 2. NF-B信号通路的

40、终止五、NF-B的转录调理作用66Potential targets for inhibiting the NF-B activation pathway671.共激活因子的调理现以P65：P50为例，来阐明NF-B的转录调理。NF-B转录调理中的激酶： PKA蛋白激酶A，存在在一个带有细胞溶质NF-B： IB的复合物中，随着IB的降解，其在细胞质中磷酸化P65，磷酸化位点是丝氨酸276。这个磷酸化可以促进P65和转录辅助激活因子CBP-cAMP反响元件结合蛋白/P300的相互作用。 MSK1和MSK2分裂素和压力激活激酶 ，可在细胞核中磷酸化P65的丝氨酸276.MSK1、MSK2与PKA享

41、有共同的酶作用底物，即特异性的P65。但是其详细作用机制还需求进一步证明。68P65的磷酸化调理 PKA在细胞质中磷酸化P65的丝氨酸276。 MSK1和MSK2在细胞核中磷酸化P65的丝氨酸276。 IKK和IKK可磷酸化P65的丝氨酸536。 P65的丝氨酸529可以被CK2蛋白激酶诱导磷酸化。 PKC能磷酸化P65的丝氨酸311。 由此看来， P65的磷酸化位点主要发生在两个区域：一个是RHD的二聚体化的功能域包括丝氨酸276和311，一个是C-末端TAD区域包括丝氨酸529和536。 这些磷酸化中的每一种都能够有助于经过诱导构象变化促进CBP/P300与P65的结合。从而完成P65的激

42、活。69The domainwithin the C-terminal TAD of p65 that interacts with CBP/p300 (amino acids 477504A model for how phosphorylation of p65 regulates itstranscriptional activity through recruitment of CBP/p300.70P65的乙酰化调理 P65的乙酰化发生在细胞核中，能够被CBP/P300和结合的HATS组蛋白乙酰转移酶 诱导，乙酰化的位点是P65的赖氨酸310。P65的乙酰化使其和IB的结协作用大大减弱，促进转录活性。但是其在核内可以被HADC3组蛋白去乙酰化酶脱去乙酰基，从而促进P65和IB的有效结合，构成的复合物在CRMI核质运输蛋白的协助下被排出核外，终止转录活性。 因此，P65的乙酰化可加强目的基因转录活性。71 P65的乙酰化需求两个根本条件： P65的磷酸化对于赖氨酸310的乙酰化是必需的。 丝氨酸276磷酸化的缺乏或过表达具有催化活性的