高效液相色谱法的应用的研究报告进展

1、-. z高效液相色谱法的应用的研究进展收稿日期：2015/5/03 星期天作者简介：武瑶，女，西南科技大学材料科学与工程学院应用化学 1202武瑶(材料工程与科学学院应用化学1202， 621000)摘要：综述了高效液相色谱法的原理方法及在各方面的应用，并对它的前景进展了展望。关键词：高效液相色谱法；应用；研究进展中图：O657.7+2 文献标识码：AThe Research andDevelopment of HPLCs ApplicationYao WuApplied Chemistry 1202, School of Materials Science and Engineering,S

2、outhwest University of Science and Technology,Mian Yang 621000Abstract: The HPLC was summarized, the various aspects of application was talked about,and its prospect was discussed.Keywords:HPLC;application;Research and Development高效液相色谱法是色谱法中的一个重要分支，英文名称High Performance Liquid Chromatography，简称HPLC，

3、又称高压液相色谱、高速液相色谱、高别离度液相色谱、近代柱色谱等1。20世纪60年代中期，人们从气相色谱法的高速和高灵敏度得到启发，在经典液相色谱法的根底上，采用高压泵，加快液相色谱法中液体流动相的流动速率，改良固定相，以提高柱效能，采用高灵敏度检测器，从而实现了分析速度快、别离效能高和操作自动化。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等科学领域中重要的别离分析技术。1高效液相色谱法的别离原理及应用围高效液相色谱法以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱各成分被别离后，进入检测器进展检测，从而实现对试样的分

4、析。按照固定相的性质不同可以分为以下几种。1.1液固色谱法液固色谱法是液相色谱法中最先发起来的一种别离模式。液固色谱法的流动相为液体，固定相为多孔的固体颗粒物质吸附剂，在其外表具有活性的吸附中心，它是根据物质吸附作用的不同来进展别离的，其作用机制是试样分子与溶剂分子对吸附剂活性外表的竞争吸附。常用的液固色谱固定相是外表多孔和全多孔微粒性硅胶、氧化铝、分子筛极性和活性炭非极性等，由于硅胶柱具有高的柱效，试样容量大，并具有机械性能好、不溶胀、不与大多数试样发生化学反响等特点，因此是使用最普遍的一种色谱柱。 液固色谱别离法最适宜别离那些溶解在非极性溶剂中、具有中等相对分子质量且为非离子型的试样。能别

5、离多官能团化合物、稳定化合物、异构体等，如胺类、酚、醇、酰胺、增塑剂等，液固色谱不适用于强极性的离子型试样的别离，不适用与别离同系物。1.2液液色谱法又称液液分配色谱法，两相都是液体。一个液相作为流动相，另一个液相及固定液则涂渍在很细的惰性载体或硅胶上作为固定相，流动相与固定相应互不相溶，两者之间有一个明显的分界面。固定液对被别离组分是一种很好的溶剂，当被分析的试样进入色谱柱后，各组分按照它们各自的分配系数，很快的在两相间到达分配平衡，即液液分配色谱是根据组分在两相中的分配系数不同而进展别离的。假设按照固定相与流动相之间相对极性的不同，液液分配色谱法又可分为正相色谱法和反相色谱法。正相液液色谱

6、法，固定相的极性大于流动相的极性，它对极性强的组分有较大的保存值，常用于别离强极性化合物，例如胺类、酰胺、醇、酚、生物碱、农药、染料等；反相液液色谱法，固定液的极性小于流动相的极性，它对极性弱的组分有较大的保存值，适用于别离弱极性或非极性的化合物，例如多核芳烃、蒽醌、脂溶性维生素、酚醛树脂、增塑剂等。1.3离子交换色谱法离子交换色谱法是以离子交换树脂为固定相，树脂上具有可以交换的离子基团。当流动相带着组别离解生成的离子通过固定相时，树脂上可交换的离子基团与具有一样电荷的组别离子进展可逆交换，根据组别离子对树脂亲和力不同而得到别离。凡在溶剂中能够解离的物质通常都可以用离子交换色谱法来进展别离。它

7、不仅广泛的应用于有机物质，还广泛用于生物物质的别离，例如氨基酸、核酸、蛋白质、药物及它们的代物、维生素的混合物、食品防腐剂、血清的别离等。1.4 离子对色谱法离子对色谱法是将一种或多种与溶质分子电荷相反的离子称为对离子或反离子加到流动相或固定相中，使其与溶质粒子结合形成离子对化合物，从而控制溶质粒子的保存行为，在色谱别离过程中，流动相中待别离的有机离子与固定相或流动相中带相反电荷的对离子结合，形成离子对化合物，然后在两相间进展分配。用于阳离子别离的对离子是烷基磺酸类，如己烷磺酸南等；用于阴离子别离的对离子是烷基铵类，如氢氧化四丁基铵等。离子对色谱主要用于能电离的或有离子性质的有机化合物或离子性

8、和中和溶质的混合物的别离2，特别是反相离子对色谱法解决了以往难别离混合物的别离问题，例如酸、碱和离子、非离子的混合物，特别是一些生化试样如核苷、生物碱、儿茶酚胺、药物及核酸等的别离。1.5 空间排阻色谱法空间排阻色谱法也称凝胶渗透色谱法，是一种按照溶质分子在流动相溶液中的体积大小别离的色谱法。固定相为凝胶，是一种外表惰性、含有许多不同尺寸的孔穴或立体网状的物质，凝胶的孔穴大小与被别离的试样大小相当，试样组分进入色谱柱后，随流动相在凝胶外部空隙以及凝胶孔穴旁流过，大组分分子由于不能进入孔穴而被排斥，从而随流动相移动而最先流出，小分子组分可以渗透到孔穴部，受到更强的直流，会更慢的被洗脱出来。空间排

9、阻色谱法主要适用于分子量的差异在百分之十以上的物质的别离。可以应用于对未知试样的探索别离，例如测量聚合物的相对分子质量及其分布，聚合物的支化度、共聚物及共混物的组成，聚合物分级及其构造分析，高聚物中微量添加剂的分析等。2高效液相色谱法的应用2.1高效液相色谱法在食品分析上的应用食品是人类生存的必需品和能量来源，食品平安关系到人类的身体安康和生命平安，关系到经济安康和社会稳定，在食品生产过程中，各种食品添加剂含量过高会影响人体安康，外界环境污染也会是食品沾污，因此食品分析很重要。高效液相色谱分析法比化学分析法操作简便，快速，融合了液相和气相两种分析方法的优势，因而成效更加明显，正在广泛的在食品检

10、测工作中应用开来3。食品添加剂分析食品添加剂是在食品生产加工过程中，为改善食品色、香、味等品质，以及为防腐和加工工艺的需要，而参加食品中的少量的化学合成或者天然物质4。食品添加剂可以分为天然食品添加剂与化学合成食品添加剂。化学合成食品添加剂如果添加不当或者在食品中发生转化则会对人体造成一定的危害。用HPLC分析食品添加剂是相当成熟的方法，如梯度洗脱分析食品中的合成着色剂，等度洗脱分析食品中的防腐剂、抗氧化剂等5。阿布都外力吐尼亚孜6通过反相高效液相色潽法同时测定十种食品添加剂、固相萃取-反向高效液相色谱法同时测定食品中12种添加剂、反向高效液相色谱法同时测定14种食品添加剂添加剂三个实验证明反

11、相高效液相色潽法具有简便、检测时间短、多组分检测、准确、适用面广、易于掌握、别离效果好和使用高通量分析等优点，可以通过一次测定就到达对防腐剂、人工合成甜味剂等食品添加剂的定性、定量检测，并且适用于常规检测。食品营养成分分析食物中有多种人体需要的营养成分，主要有糖、脂肪、蛋白质高、维生素、无机盐和水六大类。根据在机体的作用，这些营养成分可以分为构成物质、能源物质和调节物质。蛋白质、无机盐和水是构成物质，糖和脂肪是能源物质，维生素是调节物质。朱群英7采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器法同时测定食品中的果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖含量，果糖、蔗糖、葡萄糖的线性围分别为0.53.0g/L、0.55

12、.0g/L、0.55.0g/L，具有基线稳定、别离效果好，结果准确、样品处理简单、测定速度快等优点，可作为评价食品中糖含量的有效方法。兰芳8以维生素A和E萃取率的平均值为检测指标，采用L1837正交试验法考察了萃取剂的类型、用量、分散剂的类型、用量以及萃取时间和离子强度6个影响因素，利用高效液相色谱法测定维生素的含量，维生素A和E在0.23174g/ml围线性关系良好，方法稳定可行。食品污染物分析1983年，联合国粮农组织和世界卫生组织食品添加剂法规委员会第十六次会议规定：凡不是有意参加食品中，而是在生产、制造、处理、加工、填充、包装、运输和贮藏等过程中带入食品的任何物质都称为污染物，但不包括

13、昆虫碎体、动物毛发和其他不寻常的物质；残留农药也算是污染物。污染物可能有：化肥、农药、抗菌素、激素、药物和包装材料溶出物等。丹红是一种人工合成的染料，具有潜在的致癌性，测定丹红的方法主要是高效液相色谱法，洁9利用廉价的甲醇作为流动相建立的高效液相色谱法，检测速度快，检出限低，实现了对丹红混合物包括丹红-的别离分析，测定丹红-的线性围为0.0140mg/L,相对偏差均小于百分之五，检出限在0.010.02mg/L之间，成功应用于环境水样和食品中丹红的分析测定，并且样品处理过程简单、快速。季铵盐外表活性剂是高产量化学品，广泛用于杀菌剂、药物和除草剂，柔顺剂，护发剂等，由于其毒性小，在食品及食品工业

14、中广泛应用。海微10采用高效液相色谱法-串联质谱连用技术建立了食物中十二烷基三甲基溴化铵、十二烷基二甲基苄基氯化铵、十四烷基二甲基苄基氯化铵、十六烷基二甲基苄基氯化铵以及二癸基二甲基氯化铵五种季铵盐残留分析检测方法，五种季铵盐在5.00500.00g/L围线性关系良好，相关系数均不低于0.995，方法定量限位10.00g/kg。该方法样品前处理简单，分析时间短，灵敏度高，完全满足国外检测量的需要。液质联用检测食品中农兽药残留量以及食品中其他有害物质都十分灵敏有效。高效液相色谱法别离痕量金属离子与有机试剂形成的稳定的有色衍生物，例如食品中的锌、铜、铅和镉，克制了光度分析选择性差的缺点，可实现多元

15、素同时测定11。2.2高效液相色谱法在环境污染分析中的应用环境污染是指自然地或人为地向环境中添加*种物质而超过环境的自净能力而产生危害的行为，由于人为因素是环境的构成或状态发生变化，环境素质下降，从而扰乱和破坏了生态系统和人类的正常生产和生活条件的现象。在环境分析中，高效液相色谱法起着重要的作用，大局部有机污染物都能用HPLC来检测，如有机磷农药、有机氯农药、酰胺类除草剂、拟除虫菊酯杀虫剂、分类及其衍生物、工业染料等12。环境污染物中的重金属及农药残留检测一般是微量或痕量分析，高效液相色谱法灵敏度高，别离效率高、应用围广、分析速度快、样品用量少。王蕾蕾13通过浊点萃取-高效液相色谱法同时别离测

16、定了Cr和Cr的研究以及固相萃取-高效液相色谱法连用拆分手性农药2,4-滴丙酸和2-甲-4氯丙酸的实验，实验结果良好，证明了高效液相色谱法的实用性以及不可替代性。2.3高效液相色谱法在医药研究中的应用医药是人类生活中必不可少的，高效色谱法由于它的高选择性、高灵敏度等特点，已成为医药研究的有力工具。例如定性、定量测定人工合成药物的纯化成分，中草药有效成分的别离、制备以及纯度测定，人体血液和体液中药物的浓度、药物代物的测定，新型高效手性药物对应体含量的测定等。远高14采用胶束萃取-高效液相色谱法测定虎杖中的白藜芦醇，白藜芦醇在0.04200g/ml，r=0.9998围线性关系良好定性检测限S/N=

17、3为9.46ng/ml。肖燕15通过高效液相色谱法对四种降糖药物进展了快速的检测，并列出了药物的一阶导数相似度差值，数据说明一阶导数光谱相似度扩大了四种药物的差异性，有利于定性的准确。2.4高效液相色谱法在生物化学和生物工程中的应用生命科学和生物工程技术的迅速开展使得人们对核苷酸、核酸、以及氨基酸、多肽、蛋白质等生物分子的研究兴趣日益增加。其中高效液相色谱法的反相色谱法、离子色谱法等均可以对上述生物分子进展别离分析16。道来17等人建立的高效液相色谱法-电喷雾质谱法能直接对刺身中各皂苷成分进展快速分析，能克制由于皂苷类物质分子有寡糖链存在、构造复杂且极性大、难挥发、含量低、没有紫外吸收等特点造

18、成的分析鉴别困难。随着高效液相色谱法技术的不断开展，它在精细化工、石油化工天然产物方面的应用也将越来越深入。3 结语本文综述了高效液相色谱法的原理，以及高效液相色谱法在食品污染物分析、环境污染分析、医药研究、生物化学和生物工程上的应用。高效液相色谱法也受到其他几种别离技术的竞争，例如毛细管电泳法、反流色谱等，但是HPLC仍是不可取代的。HPLC就其耐用性、通用性、别离能力、尤其对水溶性、非挥发的、热不稳定的化合物的别离能力，仍旧会保持其固有地位18。相信高效液相色谱法的应用前景会非常明朗。参考文献1郭卓雨，高丽萍，郭培培.高效液相色谱在我国食品分析与检测中的应用J.联合大学学报.2013,272:55-582 邹汉法，玉奎，卢佩章.反相离子对色谱法及其应用J.色谱,1992,106：3293333樊惠民，余