实验二细菌的人工培养最后

1、实验二实验二 细菌的人工培养细菌的人工培养 微生物学实验微生物学实验 v1.熟悉培养基的成分、类型和作用;v2.掌握细菌平板划线分离法的原理、 步骤及结果;v3.掌握细菌在液体培养基的三种生长 状态;v4.了解细菌的自然界分布.实验内容和要求实验内容和要求 细菌的人工培养细菌的人工培养v一、培养基一、培养基 概念概念: 培养基是用人工方法将多种营养物质按培养基是用人工方法将多种营养物质按照各类微生物生长的需要而合成的一种混合养料。照各类微生物生长的需要而合成的一种混合养料。 任何培养基都应该具备微生物生长所需要六任何培养基都应该具备微生物生长所需要六大营养要素：大营养要素： 碳源、氮源、无机盐

2、、能源、生长因子、水碳源、氮源、无机盐、能源、生长因子、水任何培养基一旦配成，必须立即进行灭菌处理任何培养基一旦配成，必须立即进行灭菌处理高压蒸高压蒸汽灭菌汽灭菌按物理状态不同划分固体培养基固体培养基 液体培养基液体培养基在液体培养基中加入一定量凝固剂，使在液体培养基中加入一定量凝固剂，使其成为固体状态，琼脂含量一般为其成为固体状态，琼脂含量一般为1.5%-2.0%1.5%-2.0%琼脂含量一般为琼脂含量一般为0.3%-0.5%不加任何不加任何凝固剂凝固剂半固体培养基半固体培养基固体培养基常用来进行微生物的分离、固体培养基常用来进行微生物的分离、鉴定、活菌计数及菌种保藏鉴定、活菌计数及菌种保藏

3、 观察微生物的运动特征、分类鉴定及观察微生物的运动特征、分类鉴定及噬菌体效价滴定噬菌体效价滴定 用于增菌，大规模工业生产及在实验用于增菌，大规模工业生产及在实验室进行微生物的研究室进行微生物的研究 培养基的分类：培养基的分类：固体培养基固体培养基半固体培养基半固体培养基 液体培养基液体培养基按用途不同划分按用途不同划分基础培养基基础培养基鉴别培养基鉴别培养基含有一般微生物生长繁殖所需的基本营养物含有一般微生物生长繁殖所需的基本营养物。比如。比如 肉汤培养基。肉汤培养基。选择培养基选择培养基利用细菌代谢产物不同而使指示剂显色反应利用细菌代谢产物不同而使指示剂显色反应不同的原理，鉴别和鉴定细菌。如

4、不同的原理，鉴别和鉴定细菌。如麦糠凯琼麦糠凯琼脂培养基。脂培养基。营养培养基营养培养基在培养基中加入相应的特殊营养物质或化学在培养基中加入相应的特殊营养物质或化学物质，抑制不需要的微生物的生长，有利于物质，抑制不需要的微生物的生长，有利于所需微生物的生长。所需微生物的生长。用来将某种或某类微生用来将某种或某类微生物从混杂的微生物群体中分离出来。物从混杂的微生物群体中分离出来。如如SS琼琼脂培养基。脂培养基。在基础培养基中加入某些特殊营养物质制成的在基础培养基中加入某些特殊营养物质制成的一类营养丰富的培养基。如一类营养丰富的培养基。如血琼脂培养基。血琼脂培养基。特殊培养基特殊培养基如厌氧培养基。

5、如厌氧培养基。用于厌氧菌的培养。用于厌氧菌的培养。培养基的分类：培养基的分类：细菌的人工培养细菌的人工培养v二、细菌的接种技术二、细菌的接种技术 v分离培养接种法平板划线法平板划线法、平行划线法v纯种细菌接种法 固体斜面培养基接种法固体斜面培养基接种法 液体培养基接种法液体培养基接种法 半固体培养基接种法半固体培养基接种法 细菌分离培养接种法的原理细菌分离培养接种法的原理 根据机械分离作用，在无菌培养基中从混杂的标本混杂的标本中分离出所需的单个细菌生长繁殖所形成的菌落。 图图4-2平板划线分离法平板划线分离法 1.斜线法斜线法 2.曲线法曲线法 3.方格法方格法 4.放射法放射法 5.四格法四

6、格法 1、以无菌操作用接种环取待分离纯化的菌液以无菌操作用接种环取待分离纯化的菌液，将菌液点种在平板边缘一处，取出接种环，烧去多余的菌种。2、将接种环再次通过稍打开皿盖的缝隙将接种环再次通过稍打开皿盖的缝隙（约45度角）伸入平板，在平板边缘空白处接触一下使接种环冷却,然后从接种有菌的部位在平板上自左向右轻轻划线。3、划线时平板面与接种环面成划线时平板面与接种环面成30-4030-40度角度角，以手腕力量在平板表面轻巧滑动划线, 线条要平行密集，充分利用平板表面积，注意勿使前后两条线重叠，划线完毕，关上皿盖.灼烧接种环。 斜线斜线(分区分区)划线分离法划线分离法4.用接种环先将培养物涂布于平板1

7、区并作数次划线,再在2、3区依次划线。5.每划完一个区域，均将接种环灭菌一次，待冷后再划下一区域6.每一区域的划线均接触上一区域的接种线每一区域的划线均接触上一区域的接种线12次，使接种量逐次，使接种量逐渐减少，以获得单个菌落渐减少，以获得单个菌落。其他操作与上述曲线划线分离法相同。斜线斜线(分区分区)划线分离法划线分离法操作要领：操作要领： 无菌操作。无菌操作。 无划破琼脂。无划破琼脂。 前后两条线密而不重叠。前后两条线密而不重叠。 做好标记，第二天观察结果做好标记，第二天观察结果平板划线分离法平板划线分离法纯种细菌接种法纯种细菌接种法 液体培养基接种 半固体培养 基穿刺接种固体斜面培养固体

8、斜面培养基接种基接种图斜面接种时的无菌操作图斜面接种时的无菌操作 (1)接种灭菌接种灭菌 (2)开启棉塞开启棉塞 (3)管口灭菌管口灭菌 (4)挑起菌苔挑起菌苔 (5)接种接种 (6)塞好棉塞塞好棉塞 （1 1）细菌在固体培养基中的生长现象）细菌在固体培养基中的生长现象菌落定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形成单一肉菌落定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形成单一肉眼可见的细菌集团。菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、眼可见的细菌集团。菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透明度、湿润度、黏度、溶血性表面、透明度、湿润度、黏度、溶血性。菌落菌落类型：类型：S型、型、R型、型、M型型菌

9、落。菌落。菌苔菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。菌苔（2 2） 细菌在半固体培养基中的生长现象细菌在半固体培养基中的生长现象 无鞭毛的细菌沿穿刺线生长，穿刺线清晰；无鞭毛的细菌沿穿刺线生长，穿刺线清晰；有鞭毛的细菌则沿穿刺线向周围扩散生长，穿刺线模糊不清。有鞭毛的细菌则沿穿刺线向周围扩散生长，穿刺线模糊不清。经常用于做用于检查细菌的动力。经常用于做用于检查细菌的动力。（3 3）细菌在液体培养基中的生长现象细菌在液体培养基中的生长现象 不同细菌在液体培养基中生长繁殖可出现均匀混浊、沉淀不同细菌在液体培养基中生长繁殖可出现均匀混浊、沉淀（多见于链状

10、排列的细菌多见于链状排列的细菌）和形成菌膜和形成菌膜（专性需氧菌专性需氧菌）三种现三种现象，临床应用的澄清透明的注射液若发现上述任何一种现象，象，临床应用的澄清透明的注射液若发现上述任何一种现象，均表明已被细菌污染，禁止使用。均表明已被细菌污染，禁止使用。菌膜菌膜菌沉淀菌沉淀均匀浑浊均匀浑浊对照对照细菌的分布细菌的分布细菌在自然界的分布细菌在自然界的分布 土壤中的细菌土壤中的细菌 水中的细菌水中的细菌 空气中的细菌空气中的细菌 细菌在正常人体的分布细菌在正常人体的分布 人工培养细菌的意义人工培养细菌的意义v在医学中的应用：在医学中的应用：诊断；细菌鉴定；生物制品。诊断；细菌鉴定；生物制品。 v

11、在工农业生产中的应用：在工农业生产中的应用：细菌在培养过程产生多种代谢细菌在培养过程产生多种代谢产物，经过加工处理，可制成抗生素、维生素、氨基酸、产物，经过加工处理，可制成抗生素、维生素、氨基酸、有机溶剂、酒、酱油、味精等产品有机溶剂、酒、酱油、味精等产品。 v在基因工程中的应用：在基因工程中的应用：制备出胰岛素和干扰素等生物制制备出胰岛素和干扰素等生物制剂。剂。 问题与讨论问题与讨论1.培养基按物理性状分为几种？决定培养基按物理性状分为几种？决定相应物理相应物理性状的物性状的物质是什么？不同物理质是什么？不同物理性状的性状的培养基主要用途如何？培养基主要用途如何？2.什么是菌落？分离培养时，如